Rap2a在胶质瘤中的表达及其意义

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作者 王诗筌 王雷 +3 位作者 施恒亮 朱炳鑫 朱玉辐 于如同 《临床神经外科杂志》 CAS 2017年第4期279-282,286,共5页

目的探讨Rap2a在胶质瘤中的表达及其意义。方法应用Western blot检测Rap2a在胶质瘤组织中的表达情况;在胶质瘤细胞U251、U87中转染Rap2a质粒,应用细胞克隆形成实验和Ed U实验检测过表达Rap2a对U251、U87细胞增殖的影响;应用流式细胞术... 目的探讨Rap2a在胶质瘤中的表达及其意义。方法应用Western blot检测Rap2a在胶质瘤组织中的表达情况;在胶质瘤细胞U251、U87中转染Rap2a质粒,应用细胞克隆形成实验和Ed U实验检测过表达Rap2a对U251、U87细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测过表达Rap2a对U251、U87细胞周期的影响。结果 Rap2a在胶质瘤组织中呈低表达;过表达Rap2a抑制了U251、U87的增殖;过表达Rap2a明显使细胞U251、U87的细胞周期阻滞在G0/G1期。结论 Rap2a的蛋白表达水平在胶质瘤组织中表达下调,过表达Rap2a抑制胶质瘤细胞的增殖能力。 展开更多

关键词 胶质瘤 rap2a 细胞周期 细胞增殖

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Rap2a真核表达质粒的鉴定及其对肺癌细胞迁移能力的影响 被引量：1

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作者 吴金霞 桑苗苗 +2 位作者 曹文嘉 郑骏年 裴冬生 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第9期643-648,共6页

背景与目的小G蛋白家族成员Rap2a可调控内皮素和细胞粘附从而影响细胞运动及细胞与基质间相互作用,但其在肿瘤发生发展中的作用仍属未知。克隆人Ras家族小G蛋白Rap2a的cDNA,构建其真核表达质粒并在肺癌细胞表达,初步探讨Rap2a在肺癌发... 背景与目的小G蛋白家族成员Rap2a可调控内皮素和细胞粘附从而影响细胞运动及细胞与基质间相互作用,但其在肿瘤发生发展中的作用仍属未知。克隆人Ras家族小G蛋白Rap2a的cDNA,构建其真核表达质粒并在肺癌细胞表达,初步探讨Rap2a在肺癌发生发展中的作用。方法Western blot检测Rap2a在肺癌细胞中的内源性表达。人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA,经逆转录聚合酶链式反应逆转录成cDNA,PCR扩增Rap2a基因,酶切后插入pcDNA3.1(+)构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Rap2a,采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染H1299和A549细胞,Western blot检测目的基因表达。Transwell小室迁移实验观察Rap2a对肺癌细胞迁移能力的影响。明胶酶谱实验检测Rap2a对细胞分泌基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2的影响。结果与正常细胞相比,肺癌细胞中Rap2a基础表达水平明显增高。双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3.1(+)-Rap2a成功构建,Werstern blot检测到H1299和A549细胞有相应蛋白表达。迁移实验结果显示转染Rap2a基因后肿瘤细胞迁移能力明显增加。明胶酶谱实验结果显示Rap2a过表达后肺癌细胞分泌MMP2的量随之增加。结论人Rap2a真核表达质粒成功构建,Rap2a基因在肺癌细胞株成功表达并能促进肺癌细胞的迁移能力。 展开更多

关键词 基因克隆 迁移 A549 H1299

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血浆Rap2a蛋白在肝癌中的表达及诊断价值 被引量：1

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作者 张丽君 魏建波 +3 位作者 崔艳霞 白阳秋 张立达 杨玉秀 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第4期369-371,共3页

目的探讨血浆Rap2a蛋白表达对肝癌的诊断价值。方法 41例肝癌患者为肝癌组,28例肝硬化患者为肝硬化组,30例体检健康者为对照组,采用ELISA法检测3组血浆Rap2a蛋白及甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)水平,分析Rap2a蛋白表达与肝癌临床特... 目的探讨血浆Rap2a蛋白表达对肝癌的诊断价值。方法 41例肝癌患者为肝癌组,28例肝硬化患者为肝硬化组,30例体检健康者为对照组,采用ELISA法检测3组血浆Rap2a蛋白及甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)水平,分析Rap2a蛋白表达与肝癌临床特征的关系;采用Spearman法分析Rap2a与AFP的相关性;绘制ROC曲线,评估Rap2a对肝癌的诊断效能。结果肝癌组血浆Rap2a蛋白[118.57(73.99,153.44)μg/L]和AFP[148.51(37.42,295.77)μg/L]水平高于肝硬化组[64.73(34.54,75.86)、38.61(18.76,72.42)μg/L]和对照组[17.63(8.94,24.53)、21.98(12.24,49.27)μg/L](P<0.05),肝硬化组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);肝癌组血浆Rap2a蛋白水平与AFP水平无相关性(r=-0.258,P=0.103);肝癌组TNM分期Ⅲ～Ⅳ期和有远处转移者血浆Rap2a蛋白水平[139.94(80.31,230.52)μg/L,167.16(107.29,399.56)μg/L]明显高于Ⅰ～Ⅱ期[104.57(36.41,131.27)μg/L]和无远处转移者[103.07(42.46,131.27)μg/L](P<0.05),血浆Rap2a蛋白水平在不同年龄、性别、肿瘤直径、乙型肝炎病毒感染状态及有无门静脉血管侵犯方面差异无统计学意义(P>0.05);以Rap2a蛋白水平78.57μg/L为最佳截断值时,诊断肝癌的AUC为0.868(95%CI:0.784～0.952),灵敏度为83.6%,特异度为78.3%;Rap2a与AFP联合检测诊断肝癌的AUC(0.985)高于Rap2a或AFP单独检测的AUC(0.868,0.783)(P<0.05)。结论 Rap2a诊断肝癌有较高敏感度与特异度,有可能成为诊断肝癌的一种新肿瘤标志物;Rap2a与AFP联合检测可提高肝癌的诊断率。 展开更多

关键词 肝癌 rap2a 甲胎蛋白

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Rap2a对肺癌细胞侵袭能力的影响及其机制

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作者 王秀存 吴金霞 +2 位作者 布会敏 杜文琪 裴冬生 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期668-672,共5页

目的检测小G蛋白家族成员Rap2a对人肺癌细胞迁移侵袭的影响及机制探讨。方法构建pc DNA3.1-Rap2a质粒,转染入A549和H1299细胞,运用划痕和Transwell小室实验观察Rap2a对肺癌细胞侵袭能力的影响。CCK-8和流式细胞术检测Rap2a对细胞增殖和... 目的检测小G蛋白家族成员Rap2a对人肺癌细胞迁移侵袭的影响及机制探讨。方法构建pc DNA3.1-Rap2a质粒,转染入A549和H1299细胞,运用划痕和Transwell小室实验观察Rap2a对肺癌细胞侵袭能力的影响。CCK-8和流式细胞术检测Rap2a对细胞增殖和凋亡的影响,Western blot检测Bcl-2、Bax、ERK和Akt等的蛋白表达水平。结果与空质粒组相比,转染Rap2a质粒的肺癌细胞侵袭能力明显增加,但细胞的增殖和凋亡能力无明显变化,Bcl-2和Bax的蛋白水平也无明显变化。Western blot结果显示,Rap2a过表达后p-Akt473的表达水平增加。结论人Rap2a促进肺癌细胞的迁移侵袭可能与Rap2a影响Akt磷酸化水平有关。 展开更多

关键词 rap2a 侵袭 肺癌 AKT

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微重力效应激活VEGFR2/RAP1B/ERK通路促进hCMEC/D3细胞血管生成 被引量：1

5

作者 李玉娟 吴爱佳 +3 位作者 汪家苹 闫然然 崔姚远 杨静 《北京理工大学学报》 北大核心 2025年第7期764-770,共7页

探究模拟微重力(simulated microgravity,SMG)效应对人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3的增殖、迁移以及血管生成能力影响.将对数生长期的hCMEC/D3细胞分为对照组(CON)和24h-SMG组,采用ELISA法检测细胞Ang-2和VEGFA因子表达;通过细胞划痕愈合... 探究模拟微重力(simulated microgravity,SMG)效应对人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3的增殖、迁移以及血管生成能力影响.将对数生长期的hCMEC/D3细胞分为对照组(CON)和24h-SMG组,采用ELISA法检测细胞Ang-2和VEGFA因子表达;通过细胞划痕愈合法和管样形成法观察SMG效应对细胞迁移能力影响,利用Western-Blot检测VEGFR2/RAP1B/ERK蛋白表达水平变化.24h-SMG效应显著提升血管生成相关因子Ang-2和VEGFA表达水平,划痕实验及管样形成实验显示SMG效应能够增强hCMEC/D3细胞迁移及血管形成能力,Western-Blot结果显示24h-SMG效应上调VEGFR2、Rap1B和Braf相对表达量,提高MEK1和ERK1/2的磷酸化水平.SMG效应可以通过激活VEGFR2/RAP1B/ERK通路来发挥促脑血管细胞生成的作用. 展开更多

关键词 模拟微重力 脑微管内皮细胞 血管生成 VEGFR2/RAP1B/ERK信号通路

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ERF转录因子基因RAP2L15过量表达调控杨树矮化生长

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作者 樊艳 孙赫 +2 位作者 韩有志 王卫锋 王升级 《分子植物育种》 北大核心 2025年第2期476-481,共6页

杨树繁殖快,易栽培,目前已广泛用于生态防护林和工业用材林。ERF(ethylene responsive factor)转录因子是AP2/ERF家族中最大的亚族,在调节植物生长发育、应答各种非生物胁迫方面发挥着重要的作用。本研究旨在揭示ERF转录因子家族成员RAP... 杨树繁殖快,易栽培,目前已广泛用于生态防护林和工业用材林。ERF(ethylene responsive factor)转录因子是AP2/ERF家族中最大的亚族,在调节植物生长发育、应答各种非生物胁迫方面发挥着重要的作用。本研究旨在揭示ERF转录因子家族成员RAP2L15在调控杨树生长发育方面的功能。本研究以‘717杨’为材料,克隆ERF转录因子RAP2L15基因的总cDNA序列,进行植物过表达载体构建。结果表明,通过农杆菌介导法进行杨树遗传转化,获得杨树过表达转基因株系14个。RT-qPCR结果显示,与非转基因植株相比,RAP2L15在转基因株系中的表达水平更高。对转基因株系和非转基因植株的株高测量发现,与非转基因植株相比,转基因植株的株高显著小于非转基因对照,表明RAP2L15的过量表达明显抑制了杨树株高生长。本研究将为进一步深入分析转录因子RAP2L15在调控杨树生长发育方面的功能提供参考依据与材料基础。 展开更多

关键词 ERF 遗传转化 植物矮化 杨树 RAP2L15

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肺癌组织中RAP2B的表达 被引量：5

7

作者 张巧 陈景涛 +3 位作者 吴卫东 袁劲松 程书钧 吴逸明 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2007年第6期466-468,共3页

背景与目的:探讨肺癌组织及其癌旁组织中RAP2B的表达及其意义。材料与方法:以β-actin为内参,运用半定量RT-PCR技术检测30例肺癌组织及其癌旁组织RAP2B mRNA的表达水平。用Western-blot方法检测RAP2B蛋白的表达。结果:①肺癌组织中RAP2B... 背景与目的:探讨肺癌组织及其癌旁组织中RAP2B的表达及其意义。材料与方法:以β-actin为内参,运用半定量RT-PCR技术检测30例肺癌组织及其癌旁组织RAP2B mRNA的表达水平。用Western-blot方法检测RAP2B蛋白的表达。结果:①肺癌组织中RAP2B mRNA的阳性表达率为73.3%(22/30),在癌旁组织中的阳性表达率为30.0%(9/30),两者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。RAP2B mRNA在癌组织的相对表达量为0.155(0.000～0.530),在癌旁组织的相对表达量为0.000(0.000～0.160),两者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。②RAP2B蛋白在肺癌组织中的检出率为80.0%(24/30),在癌旁组织的检出率为60.0%(18/30),两者间的差异无统计学意义(P>0.05)。RAP2B蛋白在癌组织的相对表达量为0.195(0.050～0.580),在癌旁组织的相对表达量为0.030(0.000～0.180),两者间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RAP2B的过表达可能是肿瘤发生的一个重要标志,在肿瘤的发生发展过程中可能有重要作用。 展开更多

关键词 RAP2B 肺癌 RT-PCR WESTERN BLOT

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miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭 被引量：6

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作者 杨屹立 何学元 +1 位作者 潘新民 马建勋 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第8期1068-1075,共8页

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过... 目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P<0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多

关键词 miR-205-5p RAP2B 胃癌 增殖 迁移

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Rap2b基因表达对NIH3T3细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的影响 被引量：1

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作者 张巧 段丽菊 +5 位作者 徐红辉 袁劲松 吴卫东 吴逸明 高燕宁 程书钧 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期403-406,共4页

目的了解Rap2b基因对NIH3T3细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。方法以人肺CDNA为模板克隆出Rap2b基因片段,构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,稳定转染NIH3T3细胞,利用集落形成试验和... 目的了解Rap2b基因对NIH3T3细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。方法以人肺CDNA为模板克隆出Rap2b基因片段,构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,稳定转染NIH3T3细胞,利用集落形成试验和细胞伤口愈合试验,观察细胞集落形成及细胞伤口愈合能力的改变。结果与转染空质粒的细胞对比,转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞集落形成数目明显增加(P<0.01),损伤修复愈合增快。结论 Rap2b基因表达可显著增加NIH3T3细胞集落形成,并增快该细胞的损伤愈合速度。提示Rap2b基因表达可能具有促进NIH3T3细胞增殖和恶性转化功能。 展开更多

关键词 Rap2b基因 NIH3T3细胞 真核表达载体 肺癌

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Rap2b基因真核表达载体构建及其对NIH3T3细胞P38通路的影响 被引量：1

10

作者 张巧 邢瑞婷 +5 位作者 徐红辉 袁劲松 李春阳 吴卫东 吴逸明 程书钧 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期640-643,共4页

目的构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞,以了解该基因对NIH3T3细胞AKT、ERK、JNK和P38信号转导通路的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。方法构建人Rap2b真核表达载体pcDNA3.1-Rap2b并... 目的构建pcDNA3.1-Rap2b真核表达载体,以外源基因Rap2b转染NIH3T3细胞,以了解该基因对NIH3T3细胞AKT、ERK、JNK和P38信号转导通路的影响,为探讨该基因在人肺癌发生中的作用提供实验依据。方法构建人Rap2b真核表达载体pcDNA3.1-Rap2b并稳定转染NIH3T3细胞,利用Western blot方法对转染的细胞进行AKT、ERK、JNK和P38磷酸化蛋白及总蛋白表达水平检测。结果转染pcDNA3.1-Rap2b质粒的细胞与转染空质粒pcDNA3.1的细胞相比,其AKT、ERK、JNK磷酸化蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而P38磷酸化蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论 Rap2b基因外源性高表达可能对P38通路有活化作用,对JNK、ERK、AKT通路无活化作用。 展开更多

关键词 Rap2b基因 NIH3T3细胞 真核表达载体 信号转导通路

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抗震梁柱节点失效行为评估方法 被引量：1

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作者 卢庆华 张玉凤 +1 位作者 霍立兴 张莉 《焊接》 2003年第8期12-16,共5页

提供了两种目前最新、最合理的危险评估方法 (RAPs) ,减少并控制梁柱节点在地震载荷下发生的脆性断裂。其中 ,简单方法 (RAP1)主要是依据实际经验 ,操作方便而保守 ;综合方法 (RAP2 )建立在有限元与断裂力学相结合得到的一系列分析基础... 提供了两种目前最新、最合理的危险评估方法 (RAPs) ,减少并控制梁柱节点在地震载荷下发生的脆性断裂。其中 ,简单方法 (RAP1)主要是依据实际经验 ,操作方便而保守 ;综合方法 (RAP2 )建立在有限元与断裂力学相结合得到的一系列分析基础上 。 展开更多

关键词 危险评估方法 脆性断裂 梁柱节点 失效 抗震结构 有限元 RAP1 RAP2

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miR-509-3p靶向RAP2B基因通过PI3K/AKT信号通路调控喉癌细胞增殖、迁移和侵袭 被引量：5

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作者 王继国 王虹园 李婷 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2021年第22期5093-5098,共6页

目的探讨miR-509-3p对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法将miR-con、miR-509-3p、anti-miR-con、anti-miR-509-3p、si-con、si-RAP2B分别转染至M4E细胞中,分别记为miR-con组、miR-509-3p组、anti-miR-con组、anti-miR-5... 目的探讨miR-509-3p对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法将miR-con、miR-509-3p、anti-miR-con、anti-miR-509-3p、si-con、si-RAP2B分别转染至M4E细胞中,分别记为miR-con组、miR-509-3p组、anti-miR-con组、anti-miR-509-3p组、si-con组、si-RAP2B组;将miR-509-3p质粒分别与pcDNA-con、pcDNA-RAP2B共转染至M4E细胞中,分别记为miR-509-3p+pcDNA-con组、miR-509-3p+pcDNA-RAP2B组,以正常培养的细胞作为空白对照(NC)组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-509-3p和Ras相关蛋白(RAP)2B mRNA表达水平;Western印迹检测RAP2B、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测miR-509-3p和RAP2B的靶向关系。结果与喉上皮细胞NP69相比,人喉癌细胞系M4E、SCC-2、SCC-40中miR-509-3p低表达,RAP2B高表达(均P<0.05)。过表达miR-509-3p和敲减RAP2B,CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达水平显著降低,细胞存活率显著降低,细胞迁移和侵袭数目显著降低(均P<0.05)。miR-509-3p靶向RAP2B,高表达RAP2B部分逆转了miR-509-3p对M4E增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。过表达miR-509-3p,p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),高表达RAP2B部分逆转了miR-509-3p对p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平的抑制作用。结论过表达miR-509-3p可抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与RAP2B及PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多

关键词 miR-509-3p RAP2B PI3K/AKT信号通路 喉癌 增殖 迁移 侵袭

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T载体的构建及在恶性疟原虫RAP2基因克隆中的应用研究

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作者 李学荣 余新炳 +1 位作者 单志新 马长玲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期32-35,共4页

目的　构建PCR产物高效克隆载体T载体 ,并应用于克隆恶性疟原虫RAP2基因。方法　PUC18用SmaI酶切纯化后 ,与dTTP在 70℃孵育 3h ,构建T载体。另设计一对特异引物 ,采用PCR方法从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中特异扩增RAP2基因 ,并将... 目的　构建PCR产物高效克隆载体T载体 ,并应用于克隆恶性疟原虫RAP2基因。方法　PUC18用SmaI酶切纯化后 ,与dTTP在 70℃孵育 3h ,构建T载体。另设计一对特异引物 ,采用PCR方法从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中特异扩增RAP2基因 ,并将其克隆入T载体 ,重组克隆经蓝白斑初筛后 ,再用双酶切及PCR法进行鉴定。结果　从恶性疟原虫基因组DNA中特异扩增出大小为 12 15bp基因片段 ,与预期长度相符。克隆入T载体后的重组克隆经双酶切及PCR鉴定均正确无误。结论　成功构建T载体 ,并获得阳性重组克隆T -RAP2 。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 T载体 RAP2 聚合酶链反应 克隆

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Rap2c基因真核表达质粒的构建与表达

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作者 吴金霞 郑骏年 裴冬生 《徐州医学院学报》 CAS 2014年第9期561-564,共4页

目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系，克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA，构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA，经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA，PCR扩增Ra... 目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系，克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA，构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA，经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA，PCR扩增Rap2c，酶切后插入pcDNA3．1（＋）构建真核表达质粒 pcD-NA3．1（＋）-Rap2c，采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A 549和H 1299细胞，Western blot 检测其目的基因表达。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3．1（＋）-Rap2c成功构建，Werstern blot 检测到 A549和H 1299细胞有相应蛋白表达。结论成功构建人Rap2c基因真核表达质粒，为后续研究奠定了基础。 展开更多

关键词 Rap2c 基因克隆 真核表达

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杨树ERF转录因子RAP2L15基因RNAi植物表达载体的构建及遗传转化 被引量：6

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作者 王星斗 黄娟娟 +3 位作者 樊艳 郭聪慧 王升级 韩有志 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2705-2715,共11页

ERF (ethylene response factor)转录因子是植物最大的特异性转录因子基因家族之一,在植物抗逆及生长发育方面起着重要作用。本研究从‘84K杨’(Populus abla×P.glandulosa)中克隆出ERF转录因子基因RAP2L15的全长cDNA序列,对其编... ERF (ethylene response factor)转录因子是植物最大的特异性转录因子基因家族之一,在植物抗逆及生长发育方面起着重要作用。本研究从‘84K杨’(Populus abla×P.glandulosa)中克隆出ERF转录因子基因RAP2L15的全长cDNA序列,对其编码的氨基酸序列进行了同源性比对分析,并利用生物信息学对RAP2L15蛋白进行理化性质分析及结构预测。结果表明, RAP2L15编码的蛋白质序列含有155个氨基酸,属于不稳定的亲水蛋白,与杨树耐盐胁迫基因ERF38具有相似结构。同源性序列比对分析表明RAP2L15与拟南芥ERF转录因子基因AtERF016具有较高同源性,推测该基因可能与植物耐盐胁迫功能有关。构建RAP2L15-RNAi抑制表达载体并利用农杆菌介导叶盘转化法进行杨树遗传转化,获得转基因杨树株系5个。本研究为进一步探索RAP2L15转录因子基因在杨树生长发育及抗盐胁迫方面发挥的功能提供理论及材料基础。 展开更多

关键词 ERF RAP2L15 盐胁迫 遗传转化 基因重组

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miR-107通过RAP2B基因调控RhoA/ROCK通路对喉癌细胞上皮间质转化的机制研究 被引量：5

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作者 魏兴 刘海 +3 位作者 鄢斌成 蒋宗玲 段礼府 马仁强 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2023年第9期551-556,共6页

目的探索miRNA-107通过RAP2B基因是否可以调控RhoA/ROCK通路对喉癌细胞上皮间质转化(Epithelialmesenchymal transition,EMT)及增殖、侵袭能力产生影响并探讨其作用机制。方法将miR-107 mimic、si-RAP2B、miR-107 inhibitor、si-RAP2B+m... 目的探索miRNA-107通过RAP2B基因是否可以调控RhoA/ROCK通路对喉癌细胞上皮间质转化(Epithelialmesenchymal transition,EMT)及增殖、侵袭能力产生影响并探讨其作用机制。方法将miR-107 mimic、si-RAP2B、miR-107 inhibitor、si-RAP2B+miR-107 inhibitor以及相对应的对照组转染至TU1和TU8细胞;CCK-8实验测定TU1和TU8细胞的增殖能力,Transwell试验测定TU1和TU8的侵袭能力,划痕实验测定TU1和TU8的迁移能力;Western blot分析RAP2B、RhoA、ROCK和EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的表达情况。结果miR-107过表达和沉默RAP2B均可降低TU1和TU8细胞增殖(F_(TU1)=14.652,F TU8=13.248,P<0.01)、细胞侵袭(F_(TU1)=15.037,F TU8=12.024,P<0.01)、细胞迁移能力(F_(TU1)=14.532,F TU8=11.065,P<0.01)及Vimentin(t TU1=8.28,t TU8=8.16,P<0.01)、N-cadherin(t TU1=7.63,t TU8=8.04,P<0.01)表达,提高E-cadherin(t TU1=8.69,t TU8=7.63,P<0.01)的表达水平,抑制miR-107可逆转沉默RAP2B对TU1和TU8细胞的影响。结论miR-107在TU1和TU8组织低表达,其可能通过RAP2B基因调控RhoA/ROCK通路促进TU1和TU8细胞的侵袭、迁移及EMT。 展开更多

关键词 微RNAS 癌 鳞状细胞 细胞增殖 细胞迁移分析 上皮间质转化 RAP2B RhoA/ROCK

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新的肺癌候选癌基因RAP2B的鉴定和功能研究初探 被引量：2

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作者 付国斌 刘彦 +6 位作者 袁劲松 郑宏伟 石太平 雷文东 肖汀 高燕宁 程书钧 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第4期273-276,共4页

背景与目的RAP2B是我们实验室构建的中国人肺鳞癌差异表达cDNA文库中高表达的基因之一。作为具有保守结构域的Ras超家族成员,RAP2B基因在肿瘤发生发展中的作用仍属未知。本文拟初步探讨RAP2B基因在肺癌中的作用及其机制。方法应用半定量... 背景与目的RAP2B是我们实验室构建的中国人肺鳞癌差异表达cDNA文库中高表达的基因之一。作为具有保守结构域的Ras超家族成员,RAP2B基因在肿瘤发生发展中的作用仍属未知。本文拟初步探讨RAP2B基因在肺癌中的作用及其机制。方法应用半定量RT-PCR方法检测了27例手术切除的肺鳞癌肿瘤组织和相应的癌旁组织中RAP2B基因的表达;结合生物信息学分析克隆全长ORF区并转染大鼠Rat1细胞,观察转化灶形成情况;采用NF-kappaB信号通路特异的报告基因观察RAP2B基因对NF-kappaB通路的影响。结果RAP2B mRNA在约67%(18/27)的肺鳞癌配对组织中肿瘤较癌旁组织高表达;成功构建了RAP2B的真核表达质粒;平板转化实验显示转染RAP2B基因的细胞出现明显转化灶;通路报告基因分析显示RAP2B能够明显激活NF-kappaB通路。结论RAP2B基因在肺癌患者的肿瘤组织高表达,在体外具有恶性转化Rat1细胞能力,提示其为候选癌基因,并且可能通过激活NF-kappaB信号通路在肺癌发生发展中发挥作用。 展开更多

关键词 肺肿瘤 RAP2B基因 NF—kappaB信号通路

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小分子量G蛋白Rap2信号途径的生物学功能 被引量：1

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作者 沈春雯 高忠江 施树良 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2010年第1期17-23,共7页

Rap2与Rap1同属于Ras超家族小分子量GTP结合蛋白的Rap亚家族,Rap2的氨基酸序列与Rap1具有60%的同源性,推测二者可能具有相似的信号途径和相近的生物学功能,包括细胞的增殖、分化、粘附和细胞骨架重排。然而,Rap2位于效应因子结构域的第3... Rap2与Rap1同属于Ras超家族小分子量GTP结合蛋白的Rap亚家族,Rap2的氨基酸序列与Rap1具有60%的同源性,推测二者可能具有相似的信号途径和相近的生物学功能,包括细胞的增殖、分化、粘附和细胞骨架重排。然而,Rap2位于效应因子结构域的第39位的苯丙氨酸不同于Rap1及Ras的丝氨酸,这个关键差异表明其可能通过特异的下游信号分子调控独特的生物学功能。最近,随着Rap2特异效应因子的不断发现,Rap2特异的信号通路及功能受到了更多的关注,Rap2具有多样的生物学功能,除调控细胞粘附及细胞骨架动态组装外、Rap2调节中枢神经突触的可塑性以及非洲爪蟾发育中背腹轴特化。此外,也有报道显示Rap2的表达增强与多种肿瘤的形成具有相关性。本文主要针对Rap2的信号途径和生物学功能研究的最新进展进行介绍。 展开更多

关键词 Rap2 效应因子 信号途径 生物学功能 肿瘤

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转录因子NbERF RAP2-1在黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染中的功能 被引量：1

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作者 于连伟 姜兴林 +7 位作者 杨灵玲 王贺 张玉阳 谢莉娜 夏子豪 李洪连 杨雪 施艳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第15期2919-2928,共10页

【背景】黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是我国重要的检疫性植物病毒,对蔬菜和瓜类产业造成严重的经济损失。ERF转录因子可以调控植物生物和非生物胁迫,参与植物对多种病害的防御作用。前期研究显示CGMM... 【背景】黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是我国重要的检疫性植物病毒,对蔬菜和瓜类产业造成严重的经济损失。ERF转录因子可以调控植物生物和非生物胁迫,参与植物对多种病害的防御作用。前期研究显示CGMMV侵染后可以显著下调寄主转录因子Nb ERF RAP2-1的表达。【目的】明确ERF转录因子家族成员在CGMMV侵染过程中的作用,为CGMMV病害防治提供理论依据。【方法】运用MEGA7.0构建系统进化树,对基于Nb ERF RAP2-1蛋白的氨基酸序列进行系统进化分析;构建Nb ERF RAP2-1的荧光表达载体,并观察其亚细胞定位;利用q RT-PCR技术分析Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染不同时期的表达量;通过烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(VIGS)和瞬时过表达Nb ERF RAP2-1分析其在CGMMV侵染过程中的作用。【结果】系统进化树分析表明,Nb ERF RAP2-1与多种烟草的ERF转录因子同源性极高,与拟南芥的ERF转录因子亲缘关系较远;亚细胞定位结果显示Nb ERF RAP2-1定位于细胞核,作为转录因子行驶功能;CGMMV侵染对本氏烟内源基因Nb ERF RAP2-1的转录水平影响结果显示,在CGMMV侵染6、9、12 d时Nb ERF RAP2-1的表达量无明显变化,在CGMMV侵染15和18 d时Nb ERF RAP2-1表达量显著下调;TRV介导的VIGS可以将植物内源基因Nb ERF RAP2-1有效沉默,在沉默的植株系统叶上接种CGMMV,8 d对照植株系统叶出现斑驳、卷曲症状而Nb ERF RAP2-1沉默植株无症状,同时CGMMV RNA水平和蛋白水平检测结果也表明TRV:Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV的积累;同样,分别在本氏烟叶片瞬时过表达Nb ERF RAP2-124、48和72 h时检测CGMMV RNA水平和蛋白水平表达量,结果显示在病毒侵染早期,即复制阶段就抑制CGMMV的表达。【结论】Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV侵染初期病毒复制,即病毒RNA复制阶段;随着CGMMV不断侵染,在CGMMV细胞间运动和系统运动时期,CGMMV识别防御相关基因Nb ERF RAP2-1并抑制该基因的转录;当Nb ERF RAP2-1缺失后可能抑制了下游蛋白的转录或表达,从而抑制病毒侵染后期的积累。由此可见,Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染过程中发挥了重要作用。 展开更多

关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 NbERF RAP2-1 致病机制

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香烟烟雾冷凝物急性染毒对16HBE细胞Rap2B基因表达的影响

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作者 周明 龚春梅 +7 位作者 杨淋清 霍俊章 庄志雄 夏菠 吴德生 刘建军 徐新云 张巧 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期191-194,共4页

目的观察CSC急性染毒对人支气管上皮细胞的毒性特征及Rap2B基因表达的影响,推测Rap2B基因在急性染毒阶段的作用,为后续研究提供实验依据。方法 16HBE细胞暴露香烟烟雾冷凝物(CSC)24 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法确定染毒剂... 目的观察CSC急性染毒对人支气管上皮细胞的毒性特征及Rap2B基因表达的影响,推测Rap2B基因在急性染毒阶段的作用,为后续研究提供实验依据。方法 16HBE细胞暴露香烟烟雾冷凝物(CSC)24 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法确定染毒剂量,荧光定量PCR检测该基因mRNA表达水平,Western Blot检测其蛋白表达水平。结果 CSC对16HBE细胞有毒性作用,半数抑制浓度(IC50)为(0.08±0.006)mg/ml;CSC染毒16HBE细胞24 h后,细胞形态发生一定改变,高剂量组细胞出现明显形态学改变;与对照组比较,1/8 IC50剂量组mRNA和蛋白表达水平上调较高(P<0.05),随剂量组浓度增高mRNA和蛋白表达下调至最低(IC50组,P<0.05)。结论 Rap2B基因的表达在一定范围随着染毒浓度的改变呈现先升高后下降的趋势,提示Rap2B基因可能作为CSC靶基因在其急性染毒过程中发挥一定的作用。 展开更多

关键词 香烟烟雾冷凝物 16HBE Rap2B基因

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