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抗RalB单克隆抗体的制备及初步应用 被引量：2
1
作者 潘华政 黄湘 +4 位作者 姚小艳 王穗海 杜红岩 季朝能 李明 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期651-653,670,共4页
目的制备抗Ras相关蛋白RalB的单克隆抗体(McAb),探讨RalB蛋白在哺乳动物真核细胞中的表达,为进一步研究RalB功能奠定基础。方法以纯化的原核表达RalB蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得... 目的制备抗Ras相关蛋白RalB的单克隆抗体(McAb),探讨RalB蛋白在哺乳动物真核细胞中的表达,为进一步研究RalB功能奠定基础。方法以纯化的原核表达RalB蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗RalB蛋白的McAb的杂交瘤细胞株。通过免疫组织化学方法和Western-blot方法分别对RalB在组织中的表达及特异性进行鉴定。结果获得2株能高效分泌特异性McAb的抗RalB的杂交瘤细胞系F001,F002,其免疫球蛋白亚类均为IgG1。免疫组织化学实验结果表明RalB定位于肝癌细胞的细胞膜,Western-blot显示RalB在不同的肝癌细胞及正常肝细胞中均有表达。结论成功获得抗RalB的特异性的单克隆抗体,为进一步研究RalB与肿瘤的相关功能研究创造了条件。 展开更多
关键词 ralb蛋白 单克隆抗体 真核细胞 表达
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小鼠骨髓细胞中p16和Ralb基因启动区CpG岛的甲基化位点分析 被引量：1
2
作者 田金凤 曹培 +3 位作者 于秀远 彭春华 杨新军 闫洪涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期962-967,共6页
抑癌基因p16和白血病致癌因子Ralb与白血病的发生密切相关,其启动子区CpG岛的甲基化对基因表达具有重要作用.本文旨在分析p16、Ralb基因启动子区CpG岛甲基化位点信息,并比较这两个基因在小鼠骨髓细胞和原代培养的骨髓细胞中甲基化状态... 抑癌基因p16和白血病致癌因子Ralb与白血病的发生密切相关,其启动子区CpG岛的甲基化对基因表达具有重要作用.本文旨在分析p16、Ralb基因启动子区CpG岛甲基化位点信息,并比较这两个基因在小鼠骨髓细胞和原代培养的骨髓细胞中甲基化状态的差异.运用"MethPrimer"软件预测p16、Ralb基因启动子区的CpG岛,设计甲基化特异性引物.利用重亚硫酸盐测序法(BSP)检测甲基化位点信息.结果显示,p16有1个CpG岛,岛上21个CpG位点全部未发生甲基化;Ralb有2个CpG岛,CpG岛1上的5个CpG位点全部呈甲基化状态,而CpG岛2上的17个CpG位点全部呈非甲基化状态,且小鼠骨髓细胞和体外原代培养的骨髓细胞中两基因的甲基化状态一致.表明p16、Ralb基因甲基化状态未受外界培养条件的影响而改变,提示在与两基因甲基化相关的研究中体外试验可替代体内试验. 展开更多
关键词 抑癌基因P16 白血病致癌因子ralb CPG岛 甲基化 重亚硫酸盐测序
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RalB在多种肿瘤细胞中的表达及意义
3
作者 潘华政 黄湘 +2 位作者 王穗海 杜红延 李明 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期302-303,共2页
目的探讨RalB(v-ral simian leukemia viral oncogene homolog B,ras related;GTP binding protein)蛋白在多种肿瘤细胞中的表达及意义。方法以人胚肾293T细胞为正常细胞对照,选用8种不同组织的肿瘤细胞,采用抗RalB的单克隆抗体通过West... 目的探讨RalB(v-ral simian leukemia viral oncogene homolog B,ras related;GTP binding protein)蛋白在多种肿瘤细胞中的表达及意义。方法以人胚肾293T细胞为正常细胞对照,选用8种不同组织的肿瘤细胞,采用抗RalB的单克隆抗体通过Western blot方法检测其RalB蛋白的表达。结果RalB在293T细胞中表达明显降低,在乳腺癌细胞株MCF-7、卵巢癌细胞株HO8910、宫颈癌细胞株Hela、肺癌细胞株、结肠癌细胞株LOVO、SW480中均有表达,其中RalB蛋白在结肠癌细胞株SW480中表达明显增高。结论RalB可能以组织特异性的方式在不同肿瘤细胞中表达。 展开更多
关键词 ralb蛋白 肿瘤细胞 WESTERN blot方法
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白纹伊蚊rAlb-34k2蛋白对C6/36细胞内的DENV2早期抑制作用 被引量：2
4
作者 朱亚妮 金芮 +5 位作者 代薇露 李莹 陈玲玲 赵久刚 吴家红 商正玲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第2期167-170,176,共5页
目的探讨白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白在DENV2感染C6/36细胞中的作用。方法采用RT-qPCR检测不同浓度rAlb-34k2蛋白作用6 h、60 h后C6/36细胞内DENV2 NS1核酸的变化;采用Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白与DENV2颗粒结合情况;采用ELISA及Western... 目的探讨白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白在DENV2感染C6/36细胞中的作用。方法采用RT-qPCR检测不同浓度rAlb-34k2蛋白作用6 h、60 h后C6/36细胞内DENV2 NS1核酸的变化;采用Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白与DENV2颗粒结合情况;采用ELISA及Western blot分别检测rAlb-34k2蛋白与C6/36细胞膜蛋白结合的差异。结果rAlb-34k2蛋白作用6 h后,C6/36细胞内DENV2 NS1 RNA的相对表达被抑制,其中10、25、100μg/ml浓度组NS1 RNA的相对表达(2^(-ΔΔCT))值分别为(0.6778±0.04827)、(0.5972±0.06369)和(0.4704±0.05297),差异有统计学意义(P<0.05);rAlb-34k2蛋白作用60 h后,各蛋白组间差异无统计学意义。Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白(71、118.3、177.5μg/ml)可与DENV2病毒颗粒结合。间接ELISA检测rAlb-34k2蛋白与C6/36细胞疏水性膜蛋白和亲水性膜蛋白结合的A值分别为(1.1±0.26)和(3.1±0.047),差异有统计学意义(P=0.0016),Western blot检测亲水性膜蛋白的阳性结合条带数显著多于疏水性膜蛋白。结论白纹伊蚊雌蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白体外能与DENV2病毒颗粒及C6/36细胞膜蛋白结合,并抑制DENV2病毒早期在C6/36细胞中增殖。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 ralb-34k2蛋白 DENV2 亲水性膜蛋白
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白纹伊蚊rAlb-34k2蛋白诱导小鼠皮肤补体固有成分及CRIg的变化
5
作者 金芮 田炎珅 +7 位作者 朱亚妮 代薇露 卢涛 徐昊 朱俐兰 朱家洪 吴家红 商正玲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第5期551-555,579,共6页
目的探讨白纹伊蚊唾液特异性34k2重组蛋白(rAlb-34k2)刺激(小鼠腹腔巨噬细胞)RAW264.7及C57BL/6小鼠后补体相关成分mRNA的变化。方法分别用不同浓度rAlb-34k2蛋白刺激RAW264.7细胞和C57BL/6小鼠足垫,采集样本,Trizol提取RNA,逆转录为cDN... 目的探讨白纹伊蚊唾液特异性34k2重组蛋白(rAlb-34k2)刺激(小鼠腹腔巨噬细胞)RAW264.7及C57BL/6小鼠后补体相关成分mRNA的变化。方法分别用不同浓度rAlb-34k2蛋白刺激RAW264.7细胞和C57BL/6小鼠足垫,采集样本,Trizol提取RNA,逆转录为cDNA后经实时荧光定量PCR方法检测刺激后不同时间各组标本中补体C3、C1q、CfB、CRIg的mRNA变化。结果rAlb-34k2诱导CfB、C3、C1q的mRNA表达上调,且皮肤组织上调幅度高于RAW264.7细胞,其中以CfB mRNA的上调幅度及持续更为显著,在诱导24h时各组(5μg、20μg)2-△△CT值分别是23.90±8.38、8.50±1.64(P<0.05);但刺激12-24h时高剂量组与低剂量组比较上调幅度差异无统计学意义(P>0.05)。在RAW264.7细胞,以刺激6h各种补体固有分成CfB、C3、C1q表达上调,但随时间延长均恢复至正常水平,各剂量组间差异不明显。在局部皮肤组织,rAlb-34k2刺激24h后CRIg表达上调,且呈浓度和时间依赖趋势;48h时,各组rAlb-34k2(5μg、20μg)2-△△CT值达到高峰,分别为8.67±2.44和32.98±9.74,有统计学差异(P<0.05)。在Raw264.7细胞,刺激6h时CRIg有上调表达趋势,但随时间延长而下调,各剂量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白参与调控巨噬细胞及皮肤补体重要成分的表达变化,在组织中尤为显著,且显著上调定居组织的巨噬细胞特异性膜受体CRIg。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 ralb-34k2 皮肤局部 补体 CRIg 巨噬细胞
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白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响 被引量：1
6
作者 覃燕春 李莹 +4 位作者 胡欢 周璐 黄贞植 吴家红 商正玲 《中国热带医学》 CAS 北大核心 2024年第8期907-913,共7页
目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋... 目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P<0.0001;荷载rAalb_CTL1蛋白的混合淋巴细胞培养上清未影响BMDM细胞中DENV-2的复制,荷载rAlb-34k2-1蛋白的混合淋巴细胞培养上清可抑制BMDM中DENV-2复制(2^(-ΔΔCT) <0.5,P<0.05);与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后,rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制,为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。 展开更多
关键词 ralb-34k2-1蛋白 2型登革病毒 细胞免疫应答
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白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白可黏附大肠杆菌并抑制其生长
7
作者 田炎珅 徐倩 +5 位作者 金芮 朱亚妮 商正玲(指导) 王政艳 程金芝 吴家红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期784-788,共5页
目的:探讨重组的白纹伊蚊唾液特异性34k2蛋白(rAlb-34k2)黏附大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等多种细菌的可能,及其对大肠杆菌OD600值的影响。方法:利用细菌结合实验,通过Western blot方法检测rAlb-34k2蛋白与大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、乙型... 目的:探讨重组的白纹伊蚊唾液特异性34k2蛋白(rAlb-34k2)黏附大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等多种细菌的可能,及其对大肠杆菌OD600值的影响。方法:利用细菌结合实验,通过Western blot方法检测rAlb-34k2蛋白与大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的黏附效应,用分光光度计法检测不同浓度的rAlb-34k2蛋白对24 h内大肠杆菌OD600值的影响。结果:可在7%SDS处理后的大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌的细菌上清液、菌体沉淀和7%SDS处理的铜绿假单胞菌上清液中检测到rAlb-34k2蛋白,而在处理的乙型溶血性链球菌上清液及其菌体沉淀中未检测到相应的蛋白条带。不同浓度的rAlb-34k2蛋白(16~137 ng/μl)处理后大肠杆菌在12 h的OD600显著低于细菌对照组(P<0.05),其中以高浓度(137 ng/μl、112 ng/μl)的蛋白处理组细菌OD600值下降最为显著,且该现象与Ca^2+无关。此外,同源的rAalb-CTL2蛋白(重组白纹伊蚊唾液CTL2蛋白)在Ca^2+依赖下具有诱导大肠杆菌OD600增高的现象。结论:白纹伊蚊雌蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白可与多种细菌黏附,且可能具有抑制大肠杆菌的作用。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 ralb-34k2蛋白 细菌结合试验 抑菌试验
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白纹伊蚊唾液蛋白促进巨噬细胞免疫应答及2型登革病毒的复制
8
作者 旷晓元 肖秋秋 +2 位作者 吴文诗 牟小会 吴家红 《中国热带医学》 北大核心 2025年第2期149-155,共7页
目的 探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞(Raw264.7)的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒(Dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响。方法 将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)后,... 目的 探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞(Raw264.7)的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒(Dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响。方法 将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)后,按实验室前期建立的表达纯化条件获取唾液蛋白并通过SDS-PAGE及Western Blot(WB)方法鉴定;以CCK8法分析rAlb-34kDa-1蛋白对Raw264.7细胞的毒性。将0.02、0.20和2.0μg/mL浓度rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞6、12和24 h,采用实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR, qRTPCR)检测细胞中白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、趋化因子配体2(chemokine ligand 2, CCL2)、干扰素-β(interferon-β, IFN-β)、干扰素刺激基因15(interferon stimulated gene 15, ISG15)的表达,运用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞培养上清IL-6和TNF-α的分泌;免疫荧光法观察rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞后p65进入细胞核的情况,分析rAlb-34kDa-1蛋白是否通过NF-κB信号通路实现对Raw264.7细胞的免疫调控;按分组(DENV-2作用组、唾液蛋白+DENV-2共孵育组)加不同的处理因素作用6、12和24 h后收集细胞,利用qRT-PCR检测细胞内DENV-2的mRNA表达量及运用流式细胞术(FCM)检测不同处理因素作用24 h细胞内J2(dsRNA)的荧光强度。结果 SDS-PAGE及WB结果显示成功获得rAlb-34kDa-1蛋白且经CCK8法分析该蛋白对Raw264.7细胞无毒性;0.2μg/mL和2.0μg/mL的rAlb-34kDa-1均能诱导Raw264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL2、IFN-β、ISG15的表达;rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞1 h后显著增强Raw264.7细胞核内的p65的荧光强度;rAlb-34kDa-1与DENV-2作用于Raw264.7细胞12 h时,2μg/mL的rAlb-34kDa-1显著增强细胞中DENV-2的mRNA表达量。作用24 h时,0.02、0.20和2μg/mL的rAlb-34kDa-1均能增强Raw264.7细胞中DENV-2的mRNA表达量,2μg/mL的rAlb-34kDa-1与DENV-2共孵育于Raw264.7细胞24h后细胞内J2的荧光信号显著增强。结论 rAlb-34kDa-1蛋白能调节小鼠Raw264.7细胞免疫应答,促进DENV-2在Raw264.7细胞中复制。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 ralb-34kDa-1蛋白 2型登革病毒 免疫调控
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Ral家族与肿瘤 被引量：4
9
作者 邢方凯 罗鹏 张吉强 《生命的化学》 CAS CSCD 2012年第3期211-216,共6页
Ras相关蛋白Ral家族包括RalA和RalB,参与介导了多种细胞内外信号转导、跨膜运输、细胞形态的维持、转录因子的调节、细胞分化和肿瘤发生与转移等重要的生命活动。Ral家族上游信号通路以及广泛分布的效应器网络对其各种功能起着重要的调... Ras相关蛋白Ral家族包括RalA和RalB,参与介导了多种细胞内外信号转导、跨膜运输、细胞形态的维持、转录因子的调节、细胞分化和肿瘤发生与转移等重要的生命活动。Ral家族上游信号通路以及广泛分布的效应器网络对其各种功能起着重要的调控作用,对Ral家族的深入研究将为预防和治疗肿瘤提供了一条新的途径。 展开更多
关键词 RALA ralb RAS 肿瘤
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Ral家族与肿瘤 被引量：1
10
作者 孙强 邱雪杉 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2008年第4期379-381,共3页
肿瘤的生长有赖于肿瘤细胞的生存和增殖,而肿瘤的侵袭转移则主要依赖于细胞的迁移。在Ras蛋白家族中,许多成员影响着细胞形态,个别成员可以直接影响细胞迁移。其中,Ral家族成员参与肿瘤的生成、侵袭和转移等过程。现在普遍认为,Ral家族... 肿瘤的生长有赖于肿瘤细胞的生存和增殖,而肿瘤的侵袭转移则主要依赖于细胞的迁移。在Ras蛋白家族中,许多成员影响着细胞形态,个别成员可以直接影响细胞迁移。其中,Ral家族成员参与肿瘤的生成、侵袭和转移等过程。现在普遍认为,Ral家族成员主要通过影响细胞的迁移对肿瘤的侵袭和转移起作用。Ral A和RalB两种蛋白序列高度同源,而最近研究发现,Ral A和RalB可能对肿瘤迁移起着相反的作用,这也就使对Ral A和RalB作用的研究有了新的方向。 展开更多
关键词 RAL RALA ralb 肿瘤
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