目的探究毛兰素(Erianin)在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)中的作用及其在高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)-Ras同源基因家族成员A(Ra...目的探究毛兰素(Erianin)在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)中的作用及其在高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)-Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(recombinant Rho associated coiled coil containing protein kinase 1,ROCK1)信号通路中的调控机制。方法1-氯-2,4-二硝基苯(1-Chloro-2,4-dinitrobenzene,DNCB)诱导BALB/c小鼠作为AD的模型,测量小鼠的皮肤厚度、脾和淋巴结的重量。甲苯胺蓝和HE染色检测小鼠的背部皮肤和耳朵的病理改变;ELISA检测炎症因子水平;肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激HaCaT细胞建立AD体外模型;采用流式细胞术检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS);免疫荧光法检测线粒体活性氧(mitochondrion reactive oxygen species,mtROS);TUNEL检测细胞凋亡情况;免疫蛋白印迹法检测HMGB1、RAGE、RhoA、ROCK1蛋白表达情况。结果在体内实验中毛兰素抑制皮肤厚度的增加,减轻脾和淋巴结重量,改善炎症细胞的浸润和肥大细胞脱颗粒,降低炎症因子水平(P<0.05)。在体外实验中,毛兰素减少TNF-α诱导的HaCaT细胞ROS、mtROS的产生(P<0.01)。毛兰素治疗后HMGB1、RAGE、RhoA及ROCK1的蛋白表达量下降(P<0.01);使用RAGE特异性阻断剂(TFA)处理r-HMGB1刺激的HaCaT细胞后,HMGB1的表达没有发生变化,RAGE、RhoA及ROCK1表达减少(P<0.01);在Rho激酶抑制剂Y-27632+r-HMGB1组中,除RAGE的表达没有降低,其余结果与TFA+r-HMGB1组相近。结论毛兰素可能通过调节HMGB1/RAGE-RhoA/ROCK1信号通路缓解特应性皮炎。展开更多
目的:基于乙二醛酶-1(GLO-1)/晚期糖基化终末产物(AGE)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)通路探讨糖痹康干膏防治2型糖尿病周围神经病变(DPN)的作用机制。方法:56只SD大鼠随机选取8只为正常组,其余48只大鼠予高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲...目的:基于乙二醛酶-1(GLO-1)/晚期糖基化终末产物(AGE)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)通路探讨糖痹康干膏防治2型糖尿病周围神经病变(DPN)的作用机制。方法:56只SD大鼠随机选取8只为正常组,其余48只大鼠予高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病(T2DM)模型,按血糖将大鼠随机分为模型组、唐林组(13.5 mg·kg^(-1))、二甲双胍组(135 mg·kg^(-1))和糖痹康干膏低、中、高剂量组(3、6、12 g·kg^(-1))。干预第4周模型组机械痛痛阈下降则DPN造模成功。每4周测定大鼠的空腹血糖、体质量、机械痛痛阈。干预16周,苏木素-伊红(HE)染色法观察坐骨神经病理形态,免疫组化法检测坐骨神经RAGE、AGE、蛋白激酶C(PKC)、胶原蛋白(COL)表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测坐骨神经RAGE、PKC、Toll样受体(TLR)、COL、GLO-1 m RNA表达。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酐(CREA)、尿素(UREA)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量。结果:与正常组比较,模型组空腹血糖升高(P<0.01),体质量及机械痛痛阈降低(P<0.01),血清AST、ALT、CREA、UREA、IL-6、TNF-α升高(P<0.01),坐骨神经RAGE、AGE、PKC表达升高(P<0.01),COL表达降低(P<0.01),TLR、RAGE、PKC m RNA表达升高(P<0.01),COL、GLO-1 m RNA表达降低(P<0.01),坐骨神经形态不规则、轴索形态改变、髓鞘变性。与模型组比较,糖痹康干膏高剂量组各时间,中剂量组给药第4、16周空腹血糖降低(P<0.05,P<0.01);糖痹康干膏各剂量组体质量无明显变化;糖痹康干膏各剂量组在给药后不同时间出现痛阈升高(P<0.05,P<0.01);各剂量组血清IL-6、TNF-α含量下降(P<0.05,P<0.01);糖痹康干膏各剂量组坐骨神经中RAGE、AGE、PKC表达降低(P<0.01),COL表达升高(P<0.01),TLR、RAGE、PKC m RNA表达降低(P<0.01),GLO-1 m RNA表达升高(P<0.05,P<0.01),低、高剂量组COL m RNA表达升高(P<0.01),糖痹康干膏各剂量组病理表现均较模型组病变程度轻。结论:糖痹康干膏具有明显改善DPN作用,其机制可能与调控GLO-1/AGE/RAGE通路作用有关。展开更多
[目的]探究S100A12、RAGE在宫颈癌细胞增殖、迁移和凋亡中的作用。[方法]采集2022年4月-2023年5月宫颈癌病例癌组织及癌旁组织的石蜡标本,用免疫组化法检测S100A12的表达。随机将SiHa细胞分为空白组(无转染)、阴性对照组(转染空白质粒)...[目的]探究S100A12、RAGE在宫颈癌细胞增殖、迁移和凋亡中的作用。[方法]采集2022年4月-2023年5月宫颈癌病例癌组织及癌旁组织的石蜡标本,用免疫组化法检测S100A12的表达。随机将SiHa细胞分为空白组(无转染)、阴性对照组(转染空白质粒)和敲低组(转染siRNA),构建相应细胞模型。免疫组化检测S100A12在宫颈癌组织和癌旁组织的表达情况;实时荧光定量PCR检测S100A12 mRNA与RAGE mRNA水平;Western Blot检测PCNA、S100A12的蛋白表达水平;通过MTT法以及细胞集落形成实验检测细胞的生长情况,通过Transwell实验检测细胞迁移情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。[结果]S100A12在宫颈癌组织中蛋白表达水平高于癌旁组织(82.47%±0.35%vs 11.34%±0.17%,P<0.05)。敲低组细胞中S100A12、RAGE的mRNA和蛋白表达均低于空白组与阴性对照组(1.16±0.12 vs 1.13±0.16 vs 0.17±0.08;2.57±0.13 vs 2.67±0.13 vs 0.65±0.05;P<0.05)。敲低组细胞的增殖能力、集落形成数量和迁移能力均低于空白组、阴性对照组(P<0.05)。敲低组细胞的凋亡率高于空白组、阴性对照组(1.16%±0.09%vs 1.78%±0.03%vs 11.53%±0.09%;P<0.05)。[结论]宫颈癌组织中RAGE与S100A12表达量显著升高,下调S100A12后,癌细胞的增殖、迁移能力减弱,凋亡率增加,并且RAGE表达受到抑制。因此,S100A12对宫颈癌细胞的抑制作用与调控RAGE相关。展开更多
目的探讨山柰酚(kaempferol,Kae)调控高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)通路对哮喘(asthma,BA)小鼠气道炎症的影响。方法将小鼠...目的探讨山柰酚(kaempferol,Kae)调控高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)通路对哮喘(asthma,BA)小鼠气道炎症的影响。方法将小鼠分为对照组(Control组)、BA组、Kae低剂量组(Kae-L组)、Kae高剂量组(Kae-H组)及Kae-H+rHMGB1组(重组蛋白rHMGB1);使用动物肺功能分析仪检测小鼠呼气流速(peak expiratory flow,PEF)和静息每分钟通气量(minute ventilation at rest,VE),采用全自动血液分析仪分析白细胞总数(leukocyte count,LEU)、嗜酸性粒细胞(eosinophil count,EOS)、淋巴细胞(lymphocyte count,LYM)及中性粒细胞(neutrophil count,NEU)等炎症细胞数量,使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-5、IL-13及IL-10水平;流式细胞仪检测Th17、Treg细胞比例和Thl、Th2细胞的百分比,并计算Th17/Treg值和Thl/Th2比值;观察肺组织形态和纤维化情况;Western Blot检测检测BCL2相关X蛋白(BCL2-associated X protein,Bax)、HMGB1、RAGE、核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、p-NF-κB蛋白表达。结果与BA组相比,Kae-L组和Kae-H组小鼠肺组织和纤维化程度有所减轻,PEF和VE、IFN-γ和IL-10水平、Treg细胞比例、Th1细胞比例、Th1/Th2值、肺组织Bcl-2蛋白表达水平升高,肺泡灌洗液中LEU、EOS、LYM和NEU数量、IL-4、IL-5、IL-13水平、外周血中Th17比例、Th17/Treg值、Th2细胞比例、肺组织Bax、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达水平降低(P<0.05);rHMGB1可逆转Kae对BA小鼠的改善作用(P<0.05)。结论Kae可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路来调节BA小鼠免疫反应,降低炎症和肺组织损伤,改善肺功能。展开更多
文摘目的探究毛兰素(Erianin)在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)中的作用及其在高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)-Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(recombinant Rho associated coiled coil containing protein kinase 1,ROCK1)信号通路中的调控机制。方法1-氯-2,4-二硝基苯(1-Chloro-2,4-dinitrobenzene,DNCB)诱导BALB/c小鼠作为AD的模型,测量小鼠的皮肤厚度、脾和淋巴结的重量。甲苯胺蓝和HE染色检测小鼠的背部皮肤和耳朵的病理改变;ELISA检测炎症因子水平;肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激HaCaT细胞建立AD体外模型;采用流式细胞术检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS);免疫荧光法检测线粒体活性氧(mitochondrion reactive oxygen species,mtROS);TUNEL检测细胞凋亡情况;免疫蛋白印迹法检测HMGB1、RAGE、RhoA、ROCK1蛋白表达情况。结果在体内实验中毛兰素抑制皮肤厚度的增加,减轻脾和淋巴结重量,改善炎症细胞的浸润和肥大细胞脱颗粒,降低炎症因子水平(P<0.05)。在体外实验中,毛兰素减少TNF-α诱导的HaCaT细胞ROS、mtROS的产生(P<0.01)。毛兰素治疗后HMGB1、RAGE、RhoA及ROCK1的蛋白表达量下降(P<0.01);使用RAGE特异性阻断剂(TFA)处理r-HMGB1刺激的HaCaT细胞后,HMGB1的表达没有发生变化,RAGE、RhoA及ROCK1表达减少(P<0.01);在Rho激酶抑制剂Y-27632+r-HMGB1组中,除RAGE的表达没有降低,其余结果与TFA+r-HMGB1组相近。结论毛兰素可能通过调节HMGB1/RAGE-RhoA/ROCK1信号通路缓解特应性皮炎。
文摘目的:基于乙二醛酶-1(GLO-1)/晚期糖基化终末产物(AGE)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)通路探讨糖痹康干膏防治2型糖尿病周围神经病变(DPN)的作用机制。方法:56只SD大鼠随机选取8只为正常组,其余48只大鼠予高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病(T2DM)模型,按血糖将大鼠随机分为模型组、唐林组(13.5 mg·kg^(-1))、二甲双胍组(135 mg·kg^(-1))和糖痹康干膏低、中、高剂量组(3、6、12 g·kg^(-1))。干预第4周模型组机械痛痛阈下降则DPN造模成功。每4周测定大鼠的空腹血糖、体质量、机械痛痛阈。干预16周,苏木素-伊红(HE)染色法观察坐骨神经病理形态,免疫组化法检测坐骨神经RAGE、AGE、蛋白激酶C(PKC)、胶原蛋白(COL)表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测坐骨神经RAGE、PKC、Toll样受体(TLR)、COL、GLO-1 m RNA表达。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酐(CREA)、尿素(UREA)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量。结果:与正常组比较,模型组空腹血糖升高(P<0.01),体质量及机械痛痛阈降低(P<0.01),血清AST、ALT、CREA、UREA、IL-6、TNF-α升高(P<0.01),坐骨神经RAGE、AGE、PKC表达升高(P<0.01),COL表达降低(P<0.01),TLR、RAGE、PKC m RNA表达升高(P<0.01),COL、GLO-1 m RNA表达降低(P<0.01),坐骨神经形态不规则、轴索形态改变、髓鞘变性。与模型组比较,糖痹康干膏高剂量组各时间,中剂量组给药第4、16周空腹血糖降低(P<0.05,P<0.01);糖痹康干膏各剂量组体质量无明显变化;糖痹康干膏各剂量组在给药后不同时间出现痛阈升高(P<0.05,P<0.01);各剂量组血清IL-6、TNF-α含量下降(P<0.05,P<0.01);糖痹康干膏各剂量组坐骨神经中RAGE、AGE、PKC表达降低(P<0.01),COL表达升高(P<0.01),TLR、RAGE、PKC m RNA表达降低(P<0.01),GLO-1 m RNA表达升高(P<0.05,P<0.01),低、高剂量组COL m RNA表达升高(P<0.01),糖痹康干膏各剂量组病理表现均较模型组病变程度轻。结论:糖痹康干膏具有明显改善DPN作用,其机制可能与调控GLO-1/AGE/RAGE通路作用有关。
文摘目的通过网络药理学和动物实验验证方法研究化痰祛湿活血方治疗非酒精性脂肪型肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的潜在作用机制。方法通过基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)获得NASH差异表达基因;通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicines Systems Pharmacology Platform,TCMSP)获得化痰祛湿活血方药物活性成分及潜在靶点;结合疾病与药物靶标的交集得到治疗靶点,对药物作用靶点进行蛋白互作网络分析、构建药物-活性成分-靶点网络和富集分析;通过动物实验对关键通路进行验证。结果共筛选出NASH 74个差异表达基因、化痰祛湿活血方97个活性成分和295个潜在靶点。通过交集筛选出JUN等5个基因作为关键靶点,并确定山奈酚、槲皮素等7个活性成分。富集分析揭示高级糖基化终末产物-受体(advanced glycation end products-the receptor of advanced glycation endproducts,AGE-RAGE)和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)通路可能在化痰祛湿活血方治疗NASH中发挥关键作用。动物实验发现化痰祛湿活血方可降低总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、血糖(glucose,GLU)水平,下调AGE-RAGE和IL-17通路中RAGE和激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的表达,从而发挥对NASH的治疗作用。结论化痰祛湿活血方可通过降低TC、TG、GLU水平,抑制RAGE和AP-1蛋白的表达治疗NASH。
文摘[目的]探究S100A12、RAGE在宫颈癌细胞增殖、迁移和凋亡中的作用。[方法]采集2022年4月-2023年5月宫颈癌病例癌组织及癌旁组织的石蜡标本,用免疫组化法检测S100A12的表达。随机将SiHa细胞分为空白组(无转染)、阴性对照组(转染空白质粒)和敲低组(转染siRNA),构建相应细胞模型。免疫组化检测S100A12在宫颈癌组织和癌旁组织的表达情况;实时荧光定量PCR检测S100A12 mRNA与RAGE mRNA水平;Western Blot检测PCNA、S100A12的蛋白表达水平;通过MTT法以及细胞集落形成实验检测细胞的生长情况,通过Transwell实验检测细胞迁移情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。[结果]S100A12在宫颈癌组织中蛋白表达水平高于癌旁组织(82.47%±0.35%vs 11.34%±0.17%,P<0.05)。敲低组细胞中S100A12、RAGE的mRNA和蛋白表达均低于空白组与阴性对照组(1.16±0.12 vs 1.13±0.16 vs 0.17±0.08;2.57±0.13 vs 2.67±0.13 vs 0.65±0.05;P<0.05)。敲低组细胞的增殖能力、集落形成数量和迁移能力均低于空白组、阴性对照组(P<0.05)。敲低组细胞的凋亡率高于空白组、阴性对照组(1.16%±0.09%vs 1.78%±0.03%vs 11.53%±0.09%;P<0.05)。[结论]宫颈癌组织中RAGE与S100A12表达量显著升高,下调S100A12后,癌细胞的增殖、迁移能力减弱,凋亡率增加,并且RAGE表达受到抑制。因此,S100A12对宫颈癌细胞的抑制作用与调控RAGE相关。
文摘目的探讨山柰酚(kaempferol,Kae)调控高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)通路对哮喘(asthma,BA)小鼠气道炎症的影响。方法将小鼠分为对照组(Control组)、BA组、Kae低剂量组(Kae-L组)、Kae高剂量组(Kae-H组)及Kae-H+rHMGB1组(重组蛋白rHMGB1);使用动物肺功能分析仪检测小鼠呼气流速(peak expiratory flow,PEF)和静息每分钟通气量(minute ventilation at rest,VE),采用全自动血液分析仪分析白细胞总数(leukocyte count,LEU)、嗜酸性粒细胞(eosinophil count,EOS)、淋巴细胞(lymphocyte count,LYM)及中性粒细胞(neutrophil count,NEU)等炎症细胞数量,使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-5、IL-13及IL-10水平;流式细胞仪检测Th17、Treg细胞比例和Thl、Th2细胞的百分比,并计算Th17/Treg值和Thl/Th2比值;观察肺组织形态和纤维化情况;Western Blot检测检测BCL2相关X蛋白(BCL2-associated X protein,Bax)、HMGB1、RAGE、核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、p-NF-κB蛋白表达。结果与BA组相比,Kae-L组和Kae-H组小鼠肺组织和纤维化程度有所减轻,PEF和VE、IFN-γ和IL-10水平、Treg细胞比例、Th1细胞比例、Th1/Th2值、肺组织Bcl-2蛋白表达水平升高,肺泡灌洗液中LEU、EOS、LYM和NEU数量、IL-4、IL-5、IL-13水平、外周血中Th17比例、Th17/Treg值、Th2细胞比例、肺组织Bax、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达水平降低(P<0.05);rHMGB1可逆转Kae对BA小鼠的改善作用(P<0.05)。结论Kae可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路来调节BA小鼠免疫反应,降低炎症和肺组织损伤,改善肺功能。
