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百香果果生炭疽菌小GTP酶基因Rab7的鉴定与功能分析
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作者 张承康 黄欣 +3 位作者 李希荣 郭彦超 郭田龙 陈美霞 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第6期1107-1115,共9页
由果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)引起的百香果炭疽病是影响百香果(Passiflora edulis)产量和品质的重要病害,解析果生炭疽菌致病分子机制对病害防控具有重要意义。本研究鉴定得到百香果果生炭疽菌小GTP酶Rab7,并将其与多种真菌... 由果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)引起的百香果炭疽病是影响百香果(Passiflora edulis)产量和品质的重要病害,解析果生炭疽菌致病分子机制对病害防控具有重要意义。本研究鉴定得到百香果果生炭疽菌小GTP酶Rab7,并将其与多种真菌的Rab7蛋白氨基酸序列进行比对。系统发育分析结果表明,果生炭疽菌Rab7蛋白与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Rab7蛋白的亲缘关系最远,而与胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、禾谷炭疽菌(Colletotrichum graminicola)Rab7蛋白的亲缘关系较近。利用同源重组技术构建Rab7基因敲除菌株△Rab7及Rab7基因回补菌株△Rab7/Rab7。表性分析发现,与野生型和△Rab7/Rab7相比,△Rab7在PDAY和MM培养基中的菌落直径显著下降,黑色素积累量显著增加,分生孢子产量显著减少。但△Rab7与野生型N425对H 2O 2胁迫的敏感性无显著差异。激光共聚焦显微镜观察发现Rab7-GFP融合蛋白定位于液泡膜,且△Rab7液泡呈现碎片化分布,表明Rab7基因通过调控果生炭疽菌液泡融合维持其正常液泡形态。本研究结果为解析果生炭疽菌的致病分子机制提供理论依据。 展开更多
关键词 百香果 果生炭疽菌 小GTP酶基因rab7 致病性
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Rab7负向调控巨噬细胞中CpG诱导的细胞因子的表达 被引量:3
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作者 王娜 王玉珍 +3 位作者 万永青 谢基明 康鸿斌 刘春霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期681-684,共4页
目的:研究Rab7过表达及失活突变(Rab7T22N)对CpG刺激的RAW264.7巨噬细胞中分泌细胞因子的影响。方法:采用RT-PCR和Real-time PCR检测RAW264.7细胞中Rab7在CpG刺激下表达模式。将Rab7真核表达质粒及失活突变质粒Rab7T22N通过脂质体法转染... 目的:研究Rab7过表达及失活突变(Rab7T22N)对CpG刺激的RAW264.7巨噬细胞中分泌细胞因子的影响。方法:采用RT-PCR和Real-time PCR检测RAW264.7细胞中Rab7在CpG刺激下表达模式。将Rab7真核表达质粒及失活突变质粒Rab7T22N通过脂质体法转染RAW264.7细胞,G418稳定筛选,Western法鉴定表达效果。用CpG刺激稳定表达Rab7的RAW264.7细胞系,RT-PCR和Real-time PCR检测细胞因子IL-6、IL-1β、IFN-β的表达量变化。结果:CpG刺激RAW264.7后,Rab7 mRNA表达水平逐渐增高,在8小时达到高峰,表达增高近4倍。Rab7过表达后,CpG刺激后产生的IL-6、IL-1β、IFN-β显著降低。巨噬细胞中Rab7失活突变后,在CpG刺激后IL-6、IL-1β、IFN-β的表达又显著增加。结论:CpG促进RAW264.7巨噬细胞中Rab7 mRNA的表达,Rab7抑制了CpG刺激的巨噬细胞中IL-6、IL-1β、IFN-β的表达,该抑制作用的发挥与其酶活性的GTP结合有关。该研究为进一步阐明Rab7在CpG/TLR9信号通路中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 rab7 CPG rab7T22N RAW264.7细胞
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LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症患者的突变分析 被引量:10
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作者 张如旭 郭鹏 +7 位作者 任志军 赵国华 刘三妹 刘婷 资晓宏 胡正茂 夏昆 唐北沙 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期817-823,共7页
为了分析LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT)的突变特点,文章分别应用PCR结合DNA序列分析方法和PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)结合DNA序列分析方法对6个常染色体显性遗传家系先证者和2... 为了分析LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT)的突变特点,文章分别应用PCR结合DNA序列分析方法和PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)结合DNA序列分析方法对6个常染色体显性遗传家系先证者和27个散发病例进行LITAF和RAB7基因突变分析;应用PCR-SSCP结合DNA序列分析方法对14个常染色体遗传的CMT家系先证者和27个散发患者进行LMNA和MTMR2基因突变分析。结果发现:LITAF基因c.269G→A、c.274A→G序列变异和LMNA基因c.1243G→A、c.1910C→T序列变异,未发现RAB7和MTMR2基因的序列变异。其中LITAF基因c.269G→A、LMNA基因c.1243G→A和c.1910C→T为新发现的单核苷酸多态;LITAF基因c.274A→G为已知多态。说明LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因突变在中国人CMT患者中罕见。 展开更多
关键词 腓骨肌萎缩症 脂多糖诱导肿瘤坏死因子а(LITAF) Ras相关GTP结合蛋白7(rab7) 核纤层蛋白A/C(LMNA) 肌管蛋白相关蛋白2(MTMR2) 基因突变
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α-硫辛酸对糖尿病肾病自噬相关因子LC3、Rab7和Beclin1表达的影响 被引量:12
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作者 黄显元 刘建红 朱彦儒 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第17期2073-2078,共6页
目的:研究α-硫辛酸对糖尿病肾病(DN)自噬相关因子LC3、Rab7和Beclin1表达的影响。方法:2型糖尿病肾病Ⅲ期患者110例,其中55例常规治疗为对照组,55例患者在常规治疗的基础上加用硫辛酸治疗为研究组;建立DN模型大鼠,对比硫辛酸治疗的DN... 目的:研究α-硫辛酸对糖尿病肾病(DN)自噬相关因子LC3、Rab7和Beclin1表达的影响。方法:2型糖尿病肾病Ⅲ期患者110例,其中55例常规治疗为对照组,55例患者在常规治疗的基础上加用硫辛酸治疗为研究组;建立DN模型大鼠,对比硫辛酸治疗的DN患者和DN模型组大鼠Scr、BUN水平和肾脏组织中LC3、Rab7和Beclin1的表达的影响。结果:治疗后两组患者Scr和BUN均显著降低(P<0.05),且研究组患者治疗后Scr和BUN均显著低于对照组患者(P<0.05),肾脏组织中LC3、Rab7和Beclin1蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05);DN模型大鼠经硫辛酸治疗后,Scr和BUN均显著降低(P<0.05),肾脏组织中LC3、Rab7和Beclin1基因表达显著升高(P<0.05)。结论:α-硫辛酸对糖尿病肾病肾脏的保护作用可能通过促进肾脏中自噬相关因子LC3、Rab7和Beclin1的表达有关。 展开更多
关键词 Α-硫辛酸 糖尿病肾病 LC3 rab7 BECLIN1
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乳腺癌细胞中Rab7基因的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 云小乐 董仕超 +3 位作者 张威 谢基明 康鸿斌 王玉珍 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期248-252,共5页
本实验主要是从人乳腺癌细胞中克隆Rab7基因并进行基因序列比对和分析。通过培养乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB231,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板,根据GenBank公布的人Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与... 本实验主要是从人乳腺癌细胞中克隆Rab7基因并进行基因序列比对和分析。通过培养乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB231,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板,根据GenBank公布的人Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与真核表达载体pc-DNA3.1连接,构建pcDNARab7重组质粒。测序后发现MCF-7细胞中克隆的Rab7序列与GenBank序列的同源性为91%,发生了多处突变,其中94.4%为同义突变,5.5%为错义突变。但是MDA-MB231细胞中克隆的Rab7基因序列与GenBank中的Rab7序列的同源性为100%。由于发现Rab7在MCF-7乳腺癌细胞中发生突变,而在MDA-MB-231乳腺癌细胞中基因未发生突变,我们推测Rab7基因的突变是否与乳腺癌的产生有关系,这个发现为以后研究Rab7与乳腺癌的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 rab7 基因克隆 基因突变 MCF-7 MDA-MB231
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SIRT1通过调节FOXO1/RAB7信号通路促进低氧诱导的胰腺癌细胞自噬 被引量:11
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作者 田舍 江建新 +2 位作者 喻超 李琳 孙诚谊 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1545-1550,共6页
目的:探讨SIRT1对低氧诱导的胰腺癌细胞自噬的影响及FOXO1/RAB7信号通路在其中的作用。方法:利用Western blot和免疫荧光法检测SIRT1在低氧诱导的自噬胰腺癌细胞核内的表达情况。将下调 SIRT1 基因的小干扰RNA和过表达 SIRT1 的质粒转... 目的:探讨SIRT1对低氧诱导的胰腺癌细胞自噬的影响及FOXO1/RAB7信号通路在其中的作用。方法:利用Western blot和免疫荧光法检测SIRT1在低氧诱导的自噬胰腺癌细胞核内的表达情况。将下调 SIRT1 基因的小干扰RNA和过表达 SIRT1 的质粒转染到胰腺癌Panc-1细胞中,敲减和过表达 SIRT1 基因;激光共聚焦显微镜追踪双色LC3荧光蛋白表达,Western blot实验检测自噬相关蛋白LC3、p62及FOXO1/RAB7信号通路的蛋白表达情况。通过生物信息学GEPIA网站关联性分析预测SIRT1与FOXO1的相互作用,并进一步利用免疫共沉淀技术检测 SIRT1与FOXO1蛋白的相互作用。结果: SIRT1在低氧诱导的胰腺癌细胞核内表达增加。敲减SIRT1 的表达可以引起胰腺癌细胞自噬受抑制。过表达 SIRT1 能够增强Panc-1细胞中FOXO1和RAB7的蛋白表达水平( P <0.05),而当 SIRT1 表达下调时,FOXO1和RAB7表达受到抑制( P <0.05)。SIRT1与FOXO1蛋白存在相互作用。结论: SIRT1可能参与胰腺癌细胞自噬的调控,其机制可能与 FOXO1/RAB7信号通路有关。 展开更多
关键词 胰腺癌 SIRT1蛋白 自噬 FOXO1/rab7信号通路
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Rab5与Rab7调控N2a细胞内狂犬病病毒的早期感染 被引量:3
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作者 李莹莹 王新宇 +5 位作者 陈云云 Waqas Ahmad 曹国燊 段铭 关振宏 张茂林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期768-771,共4页
狂犬病病毒(rabies virus,RABV)作为一种高度嗜神经性的病毒,通过网格蛋白介导和pH依赖的内吞途径侵入神经细胞,然后经胞内体途径进行传输。已有研究表明,Rab5和Rab7是介导胞内体分选、成熟及定向运输的关键蛋白,而RABV胞内运输是否也... 狂犬病病毒(rabies virus,RABV)作为一种高度嗜神经性的病毒,通过网格蛋白介导和pH依赖的内吞途径侵入神经细胞,然后经胞内体途径进行传输。已有研究表明,Rab5和Rab7是介导胞内体分选、成熟及定向运输的关键蛋白,而RABV胞内运输是否也受到这两者的调控尚不清楚。本试验通过免疫荧光、Western blot及TCID50等技术,检测了N2a中RABV核蛋白(N)和Rab5与Rab7的胞内共定位及RNAi下调Rab5与Rab7表达时,N蛋白表达水平、病毒滴度等的变化。结果发现,Rab5和Rab7与RABV N蛋白存在共定位;当Rab5和Rab7表达下调,RABV感染初期N蛋白表达显著下降,且病毒TCID50也随之降低。结果表明,RABV感染受Rab5和Rab7调节。为进一步解析狂犬病病毒逆轴浆传输机制提供了新的数据。 展开更多
关键词 Rab5 rab7 狂犬病病毒 胞内体 早期感染
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Rab7在自噬体和溶酶体融合过程作用的研究进展 被引量:4
8
作者 胡东 王婉 +1 位作者 吴静 张荣波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期119-121,共3页
自噬体与溶酶体的有效融合是细胞发挥自噬功能对细胞内多余物质进行降解和再利用的关键。自噬体与溶酶体的融合受控于复杂的信号通路网络,涉及多个环节及众多分子的协同作用,并与内吞机制有部分重叠。Ras相关蛋白7(Rab7,小GTP酶家族的成... 自噬体与溶酶体的有效融合是细胞发挥自噬功能对细胞内多余物质进行降解和再利用的关键。自噬体与溶酶体的融合受控于复杂的信号通路网络,涉及多个环节及众多分子的协同作用,并与内吞机制有部分重叠。Ras相关蛋白7(Rab7,小GTP酶家族的成员)可能是自噬体与溶酶体的融合进程中最为重要的分子之一,在指导自噬体成熟、胞内负荷运输及与溶酶体的对接与融合过程中发挥重要调节功能。自噬体与溶酶体的融合障碍可引起先天性及适应性免疫应答异常,导致炎症、肿瘤及胞内微生物感染的加重。因此控制Rab7的活性可能成为治疗这些疾病的潜在靶点。 展开更多
关键词 rab7 自噬 溶酶体 成熟 综述
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花生AhRab7基因的克隆及其原核表达研究 被引量:4
9
作者 向小华 宋琳 +3 位作者 裴玉贺 郭新梅 隋炯明 宋希云 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期686-693,共8页
为了研究花生小G蛋白AhRab7基因在大肠杆菌中的表达模式及与高盐胁迫的关联性,采用RT-PCR技术从花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20中克隆了AhRab7(7-1、7-2)的cDNA全长序列,通过核苷酸序列和氨基酸序列分析结果表明AhRab7(7-1、7-2)... 为了研究花生小G蛋白AhRab7基因在大肠杆菌中的表达模式及与高盐胁迫的关联性,采用RT-PCR技术从花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20中克隆了AhRab7(7-1、7-2)的cDNA全长序列,通过核苷酸序列和氨基酸序列分析结果表明AhRab7(7-1、7-2)的cDNA全长分别为872 bp、816 bp,分别含1个621 bp、618 bp大小的开放阅读框(ORF,open readingframe),拟编码氨基酸数分别为206aa、205aa。将携带完整的ORF序列连入表达载体pET-28a(+)中,经IPTG诱导后进行耐盐性测定,结果表明两种全长重组酶(分别含pET-28a-Rab7-1和pET-28a-Rab7-2的重组质粒)均具有正常酶活性,明显缓解了高盐环境(5.5%~10%NaCl溶液)对大肠杆菌的生长胁迫,而对照组(含空载体pET-28a)未能检测出相同的酶活性,结果表明AhRab7基因表达可以显著缓解高盐胁迫影响。目的基因经IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测到目标蛋白的大小为23kDa,与预测结果一致。这为后期探讨花生对盐胁迫及其他非生物胁迫的研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 花生 rab7基因克隆 原核表达 盐胁迫
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Rab7基因沉默对巨噬细胞中R848激活的细胞因子及MAPK信号通路影响 被引量:2
10
作者 邹凯 云小乐 +4 位作者 康鸿斌 王雪 张晓慧 谢基明 王玉珍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期967-970,共4页
目的:本实验阐述了Rab7对Raw264.7巨噬细胞中R848激活TLR7(Toll like receptor-7)所产生的细胞因子的影响,并探讨Rab7对MAPK信号转导的影响。方法:使用Rab7刺激silence-Rab7-Raw264.7细胞,检测R848激活TLR7后产生的TNF-α、IL-6、IFN-α... 目的:本实验阐述了Rab7对Raw264.7巨噬细胞中R848激活TLR7(Toll like receptor-7)所产生的细胞因子的影响,并探讨Rab7对MAPK信号转导的影响。方法:使用Rab7刺激silence-Rab7-Raw264.7细胞,检测R848激活TLR7后产生的TNF-α、IL-6、IFN-α、IFN-β与IP-10,通过Western blot检测MAPK的磷酸化水平,分析Rab7对MAPK的信号转导的作用。结果:Rab7对TLR7激活后细胞因子的产生具有抑制作用,Rab7对MAPK信号通路具有抑制作用。结论:本实验结果进一步说明Rab7是TLR7信号转导通路的负向调控因子,并且参与到MAPK信号通路中。 展开更多
关键词 rab7 TLR7 RAW264.7细胞 MAPK
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Rab7 GTPase负向调节巨噬细胞中poly I:C诱导的细胞因子的表达 被引量:2
11
作者 王玉珍 谢基明 +1 位作者 王宁飞 刘帅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期867-870,共4页
目的:通过构建Rab7的失活突变载体tRab7(Rab7T22N),研究Rab7失活突变后对poly I:C诱导的RAW264.7巨噬细胞中细胞因子的影响。方法:利用PCR定点突变法构建Rab7的失活突变载体Rab7T22N,将Rab7的真核表达载体及其突变体tRab7通过脂质体法... 目的:通过构建Rab7的失活突变载体tRab7(Rab7T22N),研究Rab7失活突变后对poly I:C诱导的RAW264.7巨噬细胞中细胞因子的影响。方法:利用PCR定点突变法构建Rab7的失活突变载体Rab7T22N,将Rab7的真核表达载体及其突变体tRab7通过脂质体法瞬时转染RAW264.7细胞,通过Western blot方法检测Rab7的表达情况。poly I:C刺激转染细胞不同时间后检测细胞因子IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达变化。结果:Western blot检测结果显示,与转染空质粒的对照细胞相比,转染Rab7和tRab7的细胞中Rab7的蛋白水平显著增高。Rab7过表达后,抑制了巨噬细胞RAW264.7中poly I:C刺激后IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的产生,而Rab7失活突变体tRab7(Rab7T22N)过表达后显著促进了IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达。结论:Rab7抑制了poly I:C刺激的巨噬细胞中IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达,该抑制作用依赖于其GTP结合活性。本研究为进一步阐明Rab7在TLR3信号转导通路中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 polyI:C rab7 IFN-Β TNF-Α TLR3
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Rab7蛋白参与了BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的过程 被引量:2
12
作者 赵舒祺 蔡军伟 +7 位作者 李雪 杨勤 黄林 罗海华 项静 乔敏 姜勇 刘靖华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期900-906,共7页
目的:探讨Rab GTP酶是否参与了对细菌脂蛋白(BLP)耐受的骨髓诱导分化巨噬细胞(BMDMs)杀菌能力增强的过程。方法:首先利用real-time PCR比较BLP耐受巨噬细胞和非耐受细胞中Rab5a、Rab5b、Rab7、Rab9、Rab9b、Rab11a、Rab11b、Rab12、Rab3... 目的:探讨Rab GTP酶是否参与了对细菌脂蛋白(BLP)耐受的骨髓诱导分化巨噬细胞(BMDMs)杀菌能力增强的过程。方法:首先利用real-time PCR比较BLP耐受巨噬细胞和非耐受细胞中Rab5a、Rab5b、Rab7、Rab9、Rab9b、Rab11a、Rab11b、Rab12、Rab32和Rab34的表达变化,筛选出水平升高的Rab7分子;进一步用real-time PCR和Western blot实验证实Rab7的mRNA和蛋白表达是否在BLP耐受细胞感染大肠杆菌后继续升高;接下来用RNAi技术下调BLP耐受巨噬细胞Rab7表达,观察细胞对细菌的吞噬能力及杀灭能力的影响。结果:在检测的10个Rab GTP酶中,Rab7在BLP耐受BMDMs的mRNA水平升高,是非耐受细胞的1.4倍;进一步用real-time PCR和Western blot实验证实Rab7的mRNA和蛋白表达在BLP耐受细胞感染大肠杆菌后,随着时间延长均明显升高;下调Rab7表达不影响BLP耐受巨噬细胞对细菌的吞噬能力,但是显著降低其对细菌的杀灭能力。结论:BLP耐受通过上调巨噬细胞Rab7的表达,在增强巨噬细胞对细菌的杀灭过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 细菌脂蛋白 耐受 细菌清除 RAB GTP酶 rab7蛋白
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鸡Rab7b在细胞晚期内吞体定位和结合恒定链的分子特征 被引量:3
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作者 陈芳芳 谭红黎 +3 位作者 钱艳红 桂亚萍 于凤梅 查丽莎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3151-3159,共9页
Rab蛋白是介导胞内活性蛋白转运的分子家族。恒定链(invariant chain,Ii)具有协助抗原肽转运、B细胞成熟和作为细胞因子的受体等免疫学功能。前期研究发现,鸡(Gallus gallus)Rab5a在细胞早期内吞体中与Ii结合,但不清楚是否还有其他转运... Rab蛋白是介导胞内活性蛋白转运的分子家族。恒定链(invariant chain,Ii)具有协助抗原肽转运、B细胞成熟和作为细胞因子的受体等免疫学功能。前期研究发现,鸡(Gallus gallus)Rab5a在细胞早期内吞体中与Ii结合,但不清楚是否还有其他转运蛋白有该特性。基于Rab7b分子定位于晚期内吞体,并与胞内分子转运相关,本研究探索了鸡Rab7b与Ii结合的分子结构特征。首先,用自行设计的引物扩增了鸡和小鼠(Mus musculus)Rab 7 b基因,并进行了氨基酸同源性比对分析;构建了含鸡Rab7b及其67位氨基酸突变体Rab7bQ67L的原核和真核重组质粒。其次,将含红色荧光蛋白和目的基因的重组质粒转染鼠巨噬细胞系Raw264.7,培养后用绿色荧光素(FITC)标记的鼠抗晚期内吞体蛋白1(LAMP1)抗体染色,观察目的蛋白在内吞体的定位。进一步将鸡Rab7b和Rab7bQ67L分别与Ii共转染293T细胞,观察它们与Ii的共定位。最后用拉下法和免疫印迹检测鸡Rab7b及Rab7bQ67L与Ii的结合。结果表明,所克隆获得的鸡Rab 7 b基因与预期大小一致,其开放阅读框为624 bp,编码208个氨基酸。鸡和鼠的Rab7b蛋白质结构相似性为74%。尽管鸡Rab7b和突变体Rab7bQ67L均能结合Ii,但只有Rab7b可以定位于晚期内吞体,而突变体却改变了该定位特性。综上所述,鸡Rab7b与Ii不仅在晚期内吞体共定位,而且还能互相结合;鸡Rab7b的第67位氨基酸影响其在细胞内定位而不影响与Ii结合。综上表明,Rab分子参与了Ii在细胞内细胞器的转运,为进一步研究Ii在细胞内的转运机制提供了新的途径。 展开更多
关键词 II 晚期内吞体 rab7b 突变 共定位
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腓骨肌萎缩症RAB7基因突变分析 被引量:1
14
作者 郭鹏 宋福聪 +2 位作者 王相斌 夏昆 唐北沙 《疑难病杂志》 CAS 2010年第5期367-368,共2页
目的探讨RAS相关GTP结合蛋白7(RAB7)基因在中国人腓骨肌萎缩症的突变特点。方法应用聚合酶链反应—单链构象多态性(PCR-SSCP)并结合DNA序列分析的方法,对已经排除PMP22的大片段重复突变和PMP22、MPZ、Cx32、NEFL、GDAP1、Hsp22、Hsp27... 目的探讨RAS相关GTP结合蛋白7(RAB7)基因在中国人腓骨肌萎缩症的突变特点。方法应用聚合酶链反应—单链构象多态性(PCR-SSCP)并结合DNA序列分析的方法,对已经排除PMP22的大片段重复突变和PMP22、MPZ、Cx32、NEFL、GDAP1、Hsp22、Hsp27点突变的33例患者进行RAB7基因突变分析。结果33例患者所有外显子PCR产物量和特异性均较好,但SSCP均未出现异常条带,未发现RAB7基因突变。结论RAB7基因突变可能在中国人腓骨肌萎缩症患者中少见。 展开更多
关键词 腓骨肌萎缩症 rab7基因 突变分析
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稳转GFP-RAB7的肾小管上皮细胞在缺氧状态下RAB7的表达及位置变化 被引量:1
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作者 余文敏 张晓毅 +2 位作者 王智 陈平圣 窦骏 《东南大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2015年第5期710-714,共5页
目的:了解缺氧状态下RAB7蛋白在稳转GFP-RAB7表达载体的肾小管上皮细胞中的表达及位置变化,验证其对细胞自噬与内吞现象的指示作用。方法:构建GFP-RAB7表达融合蛋白慢病毒载体转染肾小管上皮细胞(HK-2),缺氧处理后,采用RT-qPCR、蛋白质... 目的:了解缺氧状态下RAB7蛋白在稳转GFP-RAB7表达载体的肾小管上皮细胞中的表达及位置变化,验证其对细胞自噬与内吞现象的指示作用。方法:构建GFP-RAB7表达融合蛋白慢病毒载体转染肾小管上皮细胞(HK-2),缺氧处理后,采用RT-qPCR、蛋白质印迹技术和激光共聚焦技术检测外源基因RAB7在细胞内的表达及位置的变化。结果:成功将GFP-RAB7基因的表达载体转染到HK-2细胞中,并获得稳定表达GFP-RAB7蛋白的HK-2细胞;在缺氧状态下,RAB7 mRNA的表达轻微降低,蛋白水平没有变化;激光共聚焦显微镜发现GFP-RAB7蛋白发生聚集,显示自噬与内吞的形成。结论:成功建立稳定转染的表达GFPRAB7的HK-2细胞系,GFP-RAB7融合蛋白可指示自噬与内吞现象,为研究缺氧状况下肾小管上皮细胞自噬与内吞提供了有效工具。 展开更多
关键词 缺氧 GFP-rab7蛋白 肾小管上皮细胞 自噬 内吞
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SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM和Rab7的相互作用
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作者 胡东 王婉 +7 位作者 赵润鹏 徐雪维 邢应如 倪升发 徐从景 铁保贤 张荣波 吴静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1178-1182,共5页
目的研究Rab7在结核分枝杆菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)诱导的自噬体-溶酶体融合阻断中的作用。方法采用Rab7小干扰RNA(si Rab7)转染Raw264.7细胞,Western blot法检测P62蛋白水平。m Cherry-SapM转染Raw264.7细胞后免疫荧光检测Sap... 目的研究Rab7在结核分枝杆菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)诱导的自噬体-溶酶体融合阻断中的作用。方法采用Rab7小干扰RNA(si Rab7)转染Raw264.7细胞,Western blot法检测P62蛋白水平。m Cherry-SapM转染Raw264.7细胞后免疫荧光检测SapM与Rab7共定位情况,免疫共沉淀分析SapM与Rab7的关系。用3种SapM的突变体SapM△ARCA,SapM△FRED和SapM△CT转染Raw264.7细胞,分析SapM的不同突变体与Rab7的关系。结果 si Rab7处理后,细胞P62水平显著增高;免疫组织化学染色结果显示SapM与Rab7在胞内共定位;免疫共沉淀分析显示SapM与Rab7可相互沉淀;3种不同突变形式的SapM中,只有SapM△CT不能与Rab7相互作用。结论 SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM与Rab7的相互作用。 展开更多
关键词 分泌性酸性磷酸酶(SapM) 自噬 rab7 融合
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鸡Ii结合Rab5a和Rab7b分子的分析
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作者 陈芳芳 桂亚萍 +5 位作者 于凤梅 张俊 谈阳 李锦春 刘翠艳 查丽莎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3588-3597,共10页
本研究旨在探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)与内吞体转运蛋白Rab5a和Rab7b结合的结构域和在细胞内共定位的特征。首先,用PCR和基因突变技术将Ii胞浆区与跨膜区[Ii_((Cyt-Tra))]、Ii CLIP(classⅡ-associated invariant chain peptide)... 本研究旨在探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)与内吞体转运蛋白Rab5a和Rab7b结合的结构域和在细胞内共定位的特征。首先,用PCR和基因突变技术将Ii胞浆区与跨膜区[Ii_((Cyt-Tra))]、Ii CLIP(classⅡ-associated invariant chain peptide)-三聚体区[Ii_((CLIP-TRIM))]和Ii突变体[Ii(M81-87aa)、Ii_((M91-99aa))和Ii_((M81-99aa))]分别插入pET-32a和pEGFP-C1构建相应的原核和真核重组质粒。其次,将构建的含有绿色荧光蛋白的重组质粒与实验室保存的含有红色荧光Rab5a和Rab7b的重组质粒共转染至人胚胎肾细胞系293 T,观察它们的共定位。将构建的原核重组质粒进行表达和纯化,最后用拉下法和免疫印迹检测Ii与Rab5a和Rab7b的结合域。结果表明,成功构建Ii结构域及Ii突变体的重组质粒。Ii_((Cyt-Tra))及Ii突变体均能与Rab5a和Rab7b在细胞内共定位,而Ii_((CLIP-TRIM))与空载体却不能。Ii的胞浆区和跨膜区是与Rab5a和Rab7b结合的功能结构域,而不是CLIP与三聚体区。综上所述,鸡Ii与Rab5a和Rab7b共定位和结合的区域是其胞浆区和跨膜区,而不是内质网腔区。这些结果提示Rab分子参与了Ii在胞内细胞器的转运机制,为进一步研究Ii及其载体在细胞内的转运机制和功能提供了新的途径。 展开更多
关键词 恒定链 II 结构域 RAB5A rab7b 共定位 结合
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Rab7与NPC1在小胶质细胞及小鼠小脑普肯耶细胞的定位
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作者 张莉 张旻 +2 位作者 姜亚平 卜碧涛 郝又国 《神经损伤与功能重建》 2009年第5期329-332,共4页
目的:观察Rab7与NPC1蛋白在小胶质细胞及小鼠小脑普肯耶细胞的定位及其与溶酶体的关系。方法:采用特异性识别Rab7、NPC1的抗体和溶酶体的特异性表面标记进行免疫荧光细胞化学染色及免疫荧光组织化学染色,在激光共聚焦显微镜下观察。结果... 目的:观察Rab7与NPC1蛋白在小胶质细胞及小鼠小脑普肯耶细胞的定位及其与溶酶体的关系。方法:采用特异性识别Rab7、NPC1的抗体和溶酶体的特异性表面标记进行免疫荧光细胞化学染色及免疫荧光组织化学染色,在激光共聚焦显微镜下观察。结果:Rab7和NPC1表达于小胶质细胞及小鼠小脑普肯耶细胞溶酶体,Rab7与NPC1共定位于小胶质细胞及npc+/+与npc-/-小鼠小脑普肯耶细胞细胞质内,两者分布有良好的相关性。结论:Rab7对NPC1蛋白的正常功能可能有重要影响。 展开更多
关键词 rab7 NPC1 免疫荧光 共定位
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RAB7L1基因多态性与济宁地区汉族人群PD发病风险的关系
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作者 田文静 杨燕 +1 位作者 吕占云 孙祖真 《神经损伤与功能重建》 2018年第7期369-371,共3页
目的:探讨RAB7L1基因多态性与济宁地区汉族人群帕金森病(PD)发病的关系。方法:选取2015年10月至2016年4月在我院就诊的PD患者200例(观察组),同时选取健康体检者200例作为对照组。对2组受试者进行RAB7L1基因rs1775143和rs823144位点的多... 目的:探讨RAB7L1基因多态性与济宁地区汉族人群帕金森病(PD)发病的关系。方法:选取2015年10月至2016年4月在我院就诊的PD患者200例(观察组),同时选取健康体检者200例作为对照组。对2组受试者进行RAB7L1基因rs1775143和rs823144位点的多态分析。结果:rs1775143位点显示3种基因型(TT型、CT型和CC型),rs823144位点显示3种基因型(AA型、AC型和CC型);观察组和对照组rs1775143基因型和等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组和对照组rs823144基因型和等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:RAB7L1基因rs1775143位点的多态性可能与济宁地区汉族人群PD的发生有一定关系,而rs823144位点可能与PD的发生无关。 展开更多
关键词 帕金森病 rab7L1基因 多态性 rs1775143位点 rs823144位点
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