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大黄通过NRAV调节miR-509-3p/Rab5c轴抑制呼吸道合胞病毒的效果 被引量:2
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作者 王秀丽 陈美汐 +2 位作者 王艳玲 陈新辉 何素焕 《河北医药》 CAS 2024年第19期2949-2953,共5页
目的 通过体外实验评估大黄免煎颗粒对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制效果,探究大黄对RSV感染过程中关键环节的影响和细胞内信号通路的调节等。方法 通过体外培养A549细胞,使用A549细胞设置空白对照组、感染对照组、-2 h组、0 h组、2 h组、... 目的 通过体外实验评估大黄免煎颗粒对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制效果,探究大黄对RSV感染过程中关键环节的影响和细胞内信号通路的调节等。方法 通过体外培养A549细胞,使用A549细胞设置空白对照组、感染对照组、-2 h组、0 h组、2 h组、4 h组、6 h组、8 h组在感染RSV的不同时间点加入大黄高剂量溶液,使用定量聚合酶链反应检测细胞内病毒基因(RSV-N)的相对量的表达,使用病毒空斑实验法测定上清病毒滴度,感染RSV 72 h后使用cck8法测定细胞活性;使用A549细胞设置感染对照组、利巴韦林组、大黄高剂量组、大黄中剂量组、大黄低剂量组,感染24 h后使用Western blot检测不同处理组RSV携带的绿色荧光蛋白(RSV-GFP)、Rab相关蛋白(Rab5c)蛋白表达水平,qPCR检测不同处理组抗病毒反应的负调负因子(NRAV)、Rab5c、RSV-N基因的相对量的表达。结果 不同浓度大黄培养A549细胞72 h后存活率比较差异有统计学意义(P<0.01),与5μg/mL比较,500μg/mL差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度利巴韦林培养A549细胞72 h后细胞存活率比较差异无统计学意义(F=1.89,P=0.17),选取25、50、100μg/mL分别作为大黄低剂量组、大黄中剂量组、大黄高剂量组,利巴韦林处理浓度为500μmol/L;-2 h组细胞存活率较2 h、4 h、6 h、8 h组升高(均P<0.05),-2 h组细胞病毒滴度、RSV-N基因较2 h、4 h、6 h、8 h组降低(均P<0.05),且-2 h组细胞存活率、病毒滴度及RSV-N基因与0 h组比较无差异(均P>0.05);大黄高剂量组、大黄中剂量组、大黄低剂量组较感染对照组细胞的NRAV、RSV-N、Rab5c基因降低(均P<0.05)。结论 大黄可能通过降低A549细胞的NRAV水平促进miR-509-3p对Rab5c mRNA的靶向降解,降低了Rab5c的表达减缓了细胞内囊泡转运,从而发挥抑制RSV增殖的能力。 展开更多
关键词 大黄 A549细胞 RSV rab5c NRAV miR-509-3p
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METTL3通过调控RAB5C的m^(6)A修饰抑制肝癌细胞增殖迁移
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作者 马利军 姬海涛 +3 位作者 屈晓威 王延峰 高晓伟 韩继明 《国际肿瘤学杂志》 2025年第11期680-688,共9页
目的探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)通过调控RAB5C的稳定性对肝癌细胞增殖和迁移的影响及可能机制。方法利用UALCAN数据库分析RAB5C在肝癌组织中的表达情况及其与临床病理特征的关系;将对数生长期的肝癌细胞株分为si-NC组(转染空白片段)... 目的探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)通过调控RAB5C的稳定性对肝癌细胞增殖和迁移的影响及可能机制。方法利用UALCAN数据库分析RAB5C在肝癌组织中的表达情况及其与临床病理特征的关系;将对数生长期的肝癌细胞株分为si-NC组(转染空白片段)、si-RAB5C-1组(沉默RAB5C)、si-RAB5C-2组(沉默RAB5C)、si-NC+over-NC组(转染空白片段+空白载体)、si-METTL3+over-NC组(沉默METTL3+空白载体)、si-METTL3+over-RAB5C组(沉默METTL3+RAB5C过表达载体)、RAB5C-WT+si-NC组(RAB5C野生型载体+空白载体)和RAB5C-MUT+si-METTL3组(RAB5C突变型载体+沉默METTL3);采用EdU实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;使用GEPIA数据库分析METTL3与RAB5C表达的相关性;使用SARMP数据库对RAB5C中的m^(6)A修饰位点进行预测;联合双荧光素酶报告基因实验与Me-RIP实验鉴定METTL3与RAB5C的靶向调控关系。结果UALCAN数据库分析显示,RAB5C mRNA在正常组织(n=50)和肝癌组织(n=371)中的表达量分别为54.1(44.9,63.1)、93.5(67.1,120.0),差异有统计学意义(χ^(2)=0.01,P<0.001)。RAB5C mRNA在淋巴结未转移(n=252)和转移(n=4)患者中的表达量分别为93.9(65.1,120.4)、117.5(100.3,142.9),在TP53突变(n=105)和未突变(n=105)患者中的表达量分别为100.2(80.5,133.1)、84.7(62.3,115.9),差异均有统计学意义(χ^(2)=0.72,P=0.020;χ^(2)=0.74,P=0.010)。EdU实验结果显示,si-NC组、si-RAB5C-1组和si-RAB5C-2组HepG2细胞增殖率分别为(39.3±2.93)%、(19.98±1.77)%、(19.98±2.46)%,差异有统计学意义(F=63.01,P<0.001),且si-RAB5C-1组和si-RAB5C-2组细胞增殖率均小于si-NC组(均P<0.05)。Transwell实验结果显示,si-NC组、si-RAB5C-1组、si-RAB5C-2组HepG2细胞迁移数分别为(94.2±1.2)、(26.1±0.5)、(25.1±0.6)个,差异有统计学意义(F=87.26,P<0.001),且si-NC组细胞迁移数均高于si-RAB5C-1组和si-RAB5C-2组(均P<0.05)。流式细胞术结果显示,si-NC组、si-RAB5C-1组和si-RAB5C-2组HepG2细胞凋亡率分别为(7.18±1.04)%、(12.56±1.50)%、(11.68±1.54)%,差异有统计学意义(F=13.09,P=0.007),且si-RAB5C-1组和si-RAB5C-2组细胞凋亡率均高于si-NC组(均P<0.05)。GEPIA、SARMP数据库分析显示,METTL3与RAB5C两者表达呈正相关(r=0.13,P=0.002),且RAB5C存在多个m^(6)A修饰位点以及对应的m^(6)A结合位点基序。MeRIP-qPCR实验结果显示,si-NC组HepG2细胞RAB5C相对表达量为1.00±0.11,高于si-METTL3组的0.28±0.18,差异有统计学意义(t=6.89,P=0.002)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与RAB5C-WT+si-NC组(1.00±0.16)相比,在肝癌HepG2细胞中沉默METTL3的表达可显著抑制野生型RAB5C启动子的荧光素酶活性(0.50±0.12),差异具有统计学意义(t=4.26,P=0.010);而与RAB5C-WT+si-NC组(1.00±0.03)相比,si-METTL3处理对突变型RAB5C启动子的荧光素酶活性(0.97±0.01)无显著影响(t=1.53,P=0.200)。EdU法、Transwell实验和流式细胞术结果显示,si-NC+over-NC组、si-METTL3+over-NC组和si-METTL3+over-RAB5C组细胞增殖、迁移和凋亡差异均具有统计学意义(均P<0.05);与si-METTL3+over-NC组比较,si-METTL3+over-RAB5C组细胞增殖、迁移和凋亡差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论METTL3可能通过介导m^(6)A修饰调控RAB5C表达进而抑制肝癌的发生发展。 展开更多
关键词 肝肿瘤 甲基转移酶样蛋白3 N6-甲基腺苷 rab5c
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黄连素对HSV-1病毒感染HEp-2细胞的活性影响及分子机制 被引量:4
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作者 崔玉娟 胡丹东 +1 位作者 杨颖丽 张继 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期387-393,共7页
目的探讨黄连素(berberine,BE)对HSV-1病毒感染HEp-2细胞活性影响及其相关分子机制。方法构建感染细胞模型,分为对照组、感染组、BE低浓度组(5μmol·L^(-1)-BE)、中浓度组(10μmol·L^(-1)-BE)和高浓度组(15μmol·L^(-1)-... 目的探讨黄连素(berberine,BE)对HSV-1病毒感染HEp-2细胞活性影响及其相关分子机制。方法构建感染细胞模型,分为对照组、感染组、BE低浓度组(5μmol·L^(-1)-BE)、中浓度组(10μmol·L^(-1)-BE)和高浓度组(15μmol·L^(-1)-BE),培养24 h。qRT-PCR测定HSV-1感染相关基因(gD、ICP-4、ICP-8、ICP-27)及LncRNA NRAV、miR-299-3p、RAB5C的mRNA表达水平;CCK-8法与流式细胞术分析检测细胞的活性与凋亡率;Western blot分析PI3K/AKT信号通路和JNK/p38 MAPK信号通路相关蛋白的表达水平。结果BE降低了gD、ICP-4、ICP-8、ICP-27的mRNA表达,提升了细胞活性,抑制了细胞凋亡,通过抑制LncRNA NRAV与RAB5C,促进miR-299-3p的表达,同时抑制了PI3K/AKT信号通路和JNK/p38 MAPK信号通路蛋白PI3K、AKT、JNK、p38的蛋白表达水平。结论BE能提升HSV-1感染后HEp-2细胞的活性,并抑制其凋亡,其机制可能与LncRNA NRAV、RAB5C靶向竞争结合miR-299-3p,抑制PI3K/AKT信号通路和JNK/p38 MAPK信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 黄连素 HSV-1 细胞生物学行为 LncRNA NRAV rab5c miR-299-3p PI3K/AKT信号通路 JNK/p38 MAPK信号通路
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miR-499在肝癌发生和发展中的作用机制研究 被引量:2
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作者 李宝华 戈海泽 刘树业 《检验医学与临床》 CAS 2020年第8期1012-1016,共5页
目的以肝癌细胞系Huh7细胞为模型,研究miR-499在肝癌发生和发展中的作用机制。方法通过TCGA和GEO数据库分析miR-499在肝癌患者及健康人中的表达差异,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌组织及正常癌旁组织中miR-499的表... 目的以肝癌细胞系Huh7细胞为模型,研究miR-499在肝癌发生和发展中的作用机制。方法通过TCGA和GEO数据库分析miR-499在肝癌患者及健康人中的表达差异,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌组织及正常癌旁组织中miR-499的表达差异。通过临床病例分析miR-499与肝癌患者临床指标的关系。采用CCK-8试验、集落形成试验检测miR-499对Huh7细胞活性及集落形成的影响。采用流式细胞术检测miR-499对Huh7细胞周期及相对凋亡率的影响。用TargetScan7.1、MicroRNA.org、MiRDB等数据库预测miR-499的下游靶基因。通过RT-qPCR及Western blot试验证明miR-499对RAB5C mRNA及蛋白水平的影响。结果TCGA和GEO数据库数据显示,miR-499在肝癌患者中呈低表达。RT-qPCR结果表明,miR-499在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织。临床数据整理表格显示,肝癌患者中miR-499高表达的患者普遍肿瘤体积较小、TNM分期较低、淋巴结转移能力较弱且分化良好。miR-499 mimics转染Huh7细胞后,通过CCK8试验和集落形成试验发现,miR-499抑制Huh7细胞增殖及集落形成能力。流式细胞术细胞周期与凋亡试验表明,miR-499抑制Huh7细胞的周期进程,并且促进Huh7细胞的凋亡能力。RT-qPCR及Western blot试验证明,RAB5C确为miR-499的靶基因。结论miR-499通过直接靶定并下调RAB5C的表达,从而抑制肝癌的发生和发展。 展开更多
关键词 miR-499 肝癌 HUH7细胞 rab5c 细胞增殖
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