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冬枣cDNA三框表达文库构建及ZjRWD40基因上游调控因子的筛选
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作者 王嘉琪 王惠冉 +6 位作者 王佳伟 周军 任玉锋 徐文娣 张琨 乔帅 张智凯 《广西植物》 北大核心 2025年第7期1336-1347,共12页
冬枣是重要的以食代药鲜食水果,RWD40通过调节DNA甲基化水平影响下游基因表达和调控果实发育,进而影响果实风味品质。RWD40蛋白是参与甲基化调控途径的关键蛋白,为了揭示冬枣中何种上游蛋白调控RWD40基因的表达,该研究利用酵母单杂交技... 冬枣是重要的以食代药鲜食水果,RWD40通过调节DNA甲基化水平影响下游基因表达和调控果实发育,进而影响果实风味品质。RWD40蛋白是参与甲基化调控途径的关键蛋白,为了揭示冬枣中何种上游蛋白调控RWD40基因的表达,该研究利用酵母单杂交技术初步筛选冬枣ZjRWD40基因的上游候选调控因子。结果表明:(1)冬枣cDNA三框表达文库的滴度为4×10^(9)CFU·mL^(-1),重组率为100%。(2)从冬枣ZjRWD40基因家族启动子区筛选了应激防御元件ABRE、MBS和TGACG-motif,分别以其诱饵序列构建诱饵载体,命名为Bait1-ABRE、Bait2-MBS和Bait3-TGACG-motif。(3)酵母单杂交筛选上游调控因子的结果显示,Bait1-ABRE具有自激活现象,Bait2-MBS和Bait3-TGACG-motif诱饵载体初步调取11条基因序列,其中5条与植物抗逆反应直接相关,它们可能通过与MBS元件和TGACG-motif元件互作来调控冬枣ZjRWD40基因的表达,进而调控冬枣的DNA甲基化水平。该研究结果为揭示ZjRWD40基因调控冬枣果实发育分子网络机制提供一定的参考,同时为冬枣抗逆育种奠定理论基础。 展开更多
关键词 冬枣 rwd40 基因 CDNA文库 酵母单杂交 顺式作用元件
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