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猪流行性腹泻病毒RT-RAA-LFD检测方法的建立
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作者 仇德洋 王海燕 +3 位作者 郑佳 杜建才 陈昭 李桂梅 《中国动物检疫》 2025年第7期90-95,共6页
为开发一种可靠、简易、便捷的现场猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,基于反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,建立了用于现场检测PEDV的RT-RAA-LFD方法。根据PEDV N基因保守序列进行引物和探针设计,通过试验优选... 为开发一种可靠、简易、便捷的现场猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,基于反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,建立了用于现场检测PEDV的RT-RAA-LFD方法。根据PEDV N基因保守序列进行引物和探针设计,通过试验优选出一套引物及一条探针,同时对RT-RAA反应时间和温度条件进行优化。优化后的方法在37℃恒温反应15 min,即可实现对PEDV目的基因片段的有效扩增;与其他常见腹泻病毒无交叉反应,最低检测限为1.23×10^(1) copies/μL;对134份临床样品进行检测,阳性检出率为5.97%,与国标检测方法结果一致。结果表明,本研究建立的PEDV RT-RAA-LFD检测方法操作简便,结果特异、灵敏,不需要专业的实验室设备和实验人员,适用于在资源有限地区对PEDV的检测,能够满足基层临床工作人员的需求。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 重组酶介导等温扩增 侧向层析试纸条
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检测牛肠道病毒RT-RAA-LFD方法的建立与初步应用 被引量：1
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作者 张福慧 郑学博 +5 位作者 崔续媛 章凡 张芷源 胡俊英 张群 王新平 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第11期2348-2355,共8页
本研究研发了一种基于重组酶介导核酸扩增(RAA)技术结合胶体金试纸条快速检测牛肠道病毒(BEV)的方法。以高度保守的BEV 5′UTR作为靶序列,设计出特异性引物,下游引物5′端标记生物素,探针5′端标记6-FAM,初步建立RT-RAA方法。将鼠源抗6-... 本研究研发了一种基于重组酶介导核酸扩增(RAA)技术结合胶体金试纸条快速检测牛肠道病毒(BEV)的方法。以高度保守的BEV 5′UTR作为靶序列,设计出特异性引物,下游引物5′端标记生物素,探针5′端标记6-FAM,初步建立RT-RAA方法。将鼠源抗6-FAM单克隆抗体作为金标抗体,链霉亲和素包被于检测线,羊抗鼠IgG包被于质控线,组装试纸条。将RAA技术与制备的胶体金试纸条相结合,建立起检测牛肠道病毒的RT-RAA-LFD方法,并对该方法的特异性、敏感性与重复性及临床应用等方面进行了评价。结果显示,该方法最佳引物浓度为5μmol/L,在35℃反应8 min即可完成对BEV核酸的扩增;该方法最低检测限为10^(1)拷贝/μL,且与牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、口蹄疫病毒均无交叉反应;制备的试纸条于4℃条件下,有效期至少为90 d;74份临床样品检测结果显示,该方法与RT-PCR检测结果一致。上述结果表明,本研究建立的BEV RT-RAA-LFD方法灵敏度高、特异性强,且操作更加便捷,适用于临床现场检测,为BEV感染的诊断和流行病学调查提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 牛肠道病毒 5′UTR rt-raa-lfd 胶体金试纸条
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