期刊文献+
共找到12,185篇文章
< 1 2 250 >
每页显示 20 50 100
RT-PCR Array技术筛选膀胱癌癌症相关信号通路基因的表达变化 被引量:3
1
作者 杨珂 傅斌 +5 位作者 王义兵 王共先 李军华 刘仁升 齐雪亮 黄亮 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期505-510,共6页
背景与目的:膀胱癌是泌尿外科最常见肿瘤疾病,其发病机制至今尚未完全明了。本研究旨在观察正常膀胱组织与膀胱癌组织众多肿瘤相关信号通路关键基因的表达情况,为后续进一步深入研究膀胱癌复发与转移提供证据。方法:收集27例膀胱癌患者... 背景与目的:膀胱癌是泌尿外科最常见肿瘤疾病,其发病机制至今尚未完全明了。本研究旨在观察正常膀胱组织与膀胱癌组织众多肿瘤相关信号通路关键基因的表达情况,为后续进一步深入研究膀胱癌复发与转移提供证据。方法:收集27例膀胱癌患者标本,液氮保存,冰冻切片法分离膀胱癌组织与正常膀胱组织,用德国QIAGEN公司Cancer Pathway Finder PCR Array板筛选与癌症相关信号通路中的84个基因在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的表达情况。结果:与正常膀胱组织相比,膀胱癌组织中上调基因8个,下调基因19个。本研究选择影响上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的信号通路作为研究方向,其中GSC、KRT14和DSP上调,SNAI2和SNAI3下调。因此,选定GSC、KRT14、DSP、SNAI2和SNAI3作为兴趣基因,并对其进行多样本荧光定量q RT-PCR验证。结果表明:GSC在膀胱癌组织中上调,但与正常膀胱组织表达相比,差异无统计学意义(P>0.05)。KRT14和DSP在膀胱癌中表达高于正常组织(P<0.05),SNAI2和SNAI3在膀胱癌中表达低于正常膀胱组织(P<0.05),且SNAI3表达差异最为明显。结论:基因KRT14、DSP及SNAI3可能与膀胱癌发生、发展及转移有密切关系,可能成为基因治疗膀胱癌的重要靶点。 展开更多
关键词 RT—PCR array 膀胱癌 信号通路
暂未订购
基于TaqMan探针的A群轮状病毒荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
2
作者 侯雪艳 周霞 +3 位作者 刘建奎 康桦华 翟少伦 郭庆勇 《微生物学通报》 北大核心 2026年第2期1096-1108,共13页
背景A群轮状病毒(group A rotavirus,RVA)是导致婴幼儿及幼龄动物发生腹泻的主要人兽共患病病原之一,具有较强的传染性。目的建立一种快速、特异检测猪、牛、羊、人等物种RVA的实时荧光定量RT-PCR检测方法。方法基于GenBank中的猪、牛... 背景A群轮状病毒(group A rotavirus,RVA)是导致婴幼儿及幼龄动物发生腹泻的主要人兽共患病病原之一,具有较强的传染性。目的建立一种快速、特异检测猪、牛、羊、人等物种RVA的实时荧光定量RT-PCR检测方法。方法基于GenBank中的猪、牛、羊和人源RVA NSP5基因保守序列,设计1对特异性引物、1条探针,该探针带有TaqMan-MGB发光基团,优化最适退火温度(Tm)、最适引物和探针浓度,建立一种可以检测猪、牛、羊和人等物种RVA的实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果建立的RVA荧光定量RT-PCR方法最佳退火温度为51℃;最适引物和探针浓度均为0.4μmol/L;敏感性高,最低检测限可达3.24 copies/μL;特异性强,与猪、牛、羊等常见病原无检测交叉反应;重复性好,其批内和批间试验变异系数分别为0.063%-0.812%和0.612%-1.016%,可以快速、特异检测猪、牛、羊样品和人轮状病毒,有很好的临床适用性。结论本实验建立了一种检测多物种RVA的实时荧光定量RT-PCR方法,为猪、牛、羊和人等多物种的RVA流行病学调查和早期诊断提供了良好的技术支撑。 展开更多
关键词 A群轮状病毒 NSP5基因 TAQMAN-MGB探针 荧光rt-pcr
原文传递
Noninvasive interception of circulating leukocyte in vivo by optical tweezer array 被引量:1
3
作者 Sisi Ge Jinhua Zhou Xunbin Wei 《Journal of Innovative Optical Health Sciences》 2026年第1期56-69,共14页
The ability to noninvasively manipulate and isolate specific cell populations in vivo is critical for advancing real-time diagnostics,precision medicine,and immunological research.Here,we present a novel and broadly a... The ability to noninvasively manipulate and isolate specific cell populations in vivo is critical for advancing real-time diagnostics,precision medicine,and immunological research.Here,we present a novel and broadly applicable optical trapping system based on a custom-designed 2×3 optical tweezer array,which enables the real-time interception and manipulation of circulating leukocytes in live animals.By utilizing intrinsic velocity differences between leukocytes and red blood cells,the system achieves stable trapping of individual leukocytes in vessels 15-20μm in diameter and decelerates multiple cells in vessels greater than 20μm.Notably,it also enables the optical blockage of lymphatic vessels exceeding 50μm,a previously unreported capability.This label-free,noninvasive approach operates without repeated blood draws and is compatible with diverse vessel geometries and flow dynamics.The system offers a generalizable solution for in vivo cell extraction and analysis,paving the way for high-precision single-cell technologies in biomedical research and clinical translation. 展开更多
关键词 Leukocytes optical tweezer array in vivo interception
原文传递
南非2型口蹄疫病毒特异性RT-PCR检测方法的建立及初步应用
4
作者 王轶男 谢佳芮 +2 位作者 寇美玲 苏晓航 苗海生 《上海畜牧兽医通讯》 2026年第1期6-10,18,共6页
为了实现对存在传入风险的南非2型(South African type 2, SAT2)口蹄疫病毒的早期发现、精准鉴定和有效预警,本研究基于SAT2型口蹄疫病毒毒株IRAN/2024和ETH/2022完整VP1基因序列,构建了pUC57-IRAN-VP1、pUC57-ETH-VP1质粒;参考SAT2型... 为了实现对存在传入风险的南非2型(South African type 2, SAT2)口蹄疫病毒的早期发现、精准鉴定和有效预警,本研究基于SAT2型口蹄疫病毒毒株IRAN/2024和ETH/2022完整VP1基因序列,构建了pUC57-IRAN-VP1、pUC57-ETH-VP1质粒;参考SAT2型口蹄疫病毒VP1基因序列设计并筛选特异性引物,以所构建的质粒为模板,建立了SAT2型口蹄疫病毒特异性RT-PCR检测方法,并开展敏感性试验、特异性试验。敏感性试验结果显示,该方法可以检测质量浓度低至1 pg/mL的质粒DNA。特异性试验结果显示,该方法对伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、1型蓝舌病病毒、牛病毒性腹泻病毒、山羊痘病毒、阿卡斑病毒、流行性出血热病毒等常见病毒的核酸,以及参试的O型和A型口蹄疫病毒(PanAsia、Cathay、Mya98、Ind2001-1、Ind2001-2、AKT-Ⅲ、Sea-97毒株)核酸均无交叉反应。应用该方法对2023年云南边境地区50份牛食道-咽部分泌物样品进行核酸检测,检测结果与RT-qPCR检测结果一致。本研究建立的SAT2型口蹄疫病毒特异性RT-PCR检测方法具有一定的实用性,为口蹄疫疫情防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 SAT2型 rt-pcr 特异性
在线阅读 下载PDF
Deep learning-based number of sources estimation under colored noise and imperfect array
5
作者 Linqiang JIANG Tao TANG +2 位作者 Zhidong WU Ding WANG Paihang ZHAO 《Chinese Journal of Aeronautics》 2026年第2期414-428,共15页
The estimation of the Number of Sources(NoS)is a significant challenge in signal processing,particularly due to the impact of colored noise on the performance of NoS estimation.This paper proposes a Multidimensional F... The estimation of the Number of Sources(NoS)is a significant challenge in signal processing,particularly due to the impact of colored noise on the performance of NoS estimation.This paper proposes a Multidimensional Feature Network(MFNet)which is designed for NoS estimation by extracting features of the sampled received signals and Sampled Covariance Matrix(SCM).The MFNet treats the raw signal and the SCM as two different types of data,and is able to achieve NoS estimation under colored noise and imperfect array.MFNet employs the Gated Recurrent Unit(GRU)to capture sequential information from the original signal data and to construct the Pseudo Covariance Matrix(PCM).Subsequently,various dimensional features,including eigenvalues and the Gerschgorin disk radius,are extracted from both the PCM and SCM,which are then jointly input into the subsequent network.An overall accuracy of 82%can be achieved after network training.The ablation experimental results demonstrate the effectiveness of multiple inputs.And simulation results demonstrate that the proposed MFNet achieves higher estimation accuracy compared to existing algorithms and exhibits greater robustness against colored noise. 展开更多
关键词 Number of source estimation Deep learning Colored noise Imperfect array array signal processing
原文传递
日本黄瓜绿斑驳花叶病毒常规和实时荧光RT-PCR检测
6
作者 陈红运 叶明辉 +3 位作者 陈青 廖富荣 于子翔 沈建国 《植物检疫》 2026年第1期53-57,共5页
本研究以日本黄瓜绿斑驳花叶病毒(kyuri green mottle mosaic virus,KGMMV)为材料,设计1对常规RT-PCR检测引物KGCPN-F/KGCPN-R和1组引物/探针KGM-F/KGM-R/KGM-P,分析测试了2对已发表KGMMV常规RT-PCR检测引物KGCP-F/KGCP-R和KGMP-F/KGMP... 本研究以日本黄瓜绿斑驳花叶病毒(kyuri green mottle mosaic virus,KGMMV)为材料,设计1对常规RT-PCR检测引物KGCPN-F/KGCPN-R和1组引物/探针KGM-F/KGM-R/KGM-P,分析测试了2对已发表KGMMV常规RT-PCR检测引物KGCP-F/KGCP-R和KGMP-F/KGMP-R,建立了KGMMV的常规和实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,引物KGCP-F/KGCP-R扩增KGMMV时出现预期大小的条带,扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)时出现非常微弱的条带;引物KGCPN-F/KGCPN-R扩增KGMMV时出现预期大小的条带,扩增小西葫芦绿斑驳花叶病毒(zucchini green mottle mosaic virus,ZGMMV)时出现比预期稍大的条带,通过对PCR产物进行序列测定和分析比对可准确鉴定KGMMV。KGCP-F/KGCP-R和KGCPN-F/KGCPN-R的相对灵敏度分别为10^(-6)和10^(-5)稀释度,适用于KGMMV的常规RT-PCR检测。基于引物探针KGM-F/KGM-R/KGM-P建立的KGMMV实时荧光RT-PCR检测方法能特异性检出KGMMV,相对灵敏度达10^(-7)稀释度,分别比2对常规RT-PCR检测引物高10倍和100倍,适用于瓜类种子中KGMMV的快速检测。 展开更多
关键词 日本黄瓜绿斑驳花叶病毒 常规rt-pcr 实时荧光rt-pcr 检测
原文传递
A new 10K liquid SNP genotyping array for wax gourd and its application in heterosis utilization and cultivars identification
7
作者 Dan Liu Lingling Xie +4 位作者 Yuting Lei Bingchuan Tian Daolong Liao Fangfang Wu Baobin Mi 《Journal of Integrative Agriculture》 2026年第2期734-743,共10页
High-throughput single nucleotide polymorphism(SNP) arrays have emerged as essential genotyping tools,significantly accelerating breeding programs and advancing basic research.In this study,a high-throughput 10K SNP g... High-throughput single nucleotide polymorphism(SNP) arrays have emerged as essential genotyping tools,significantly accelerating breeding programs and advancing basic research.In this study,a high-throughput 10K SNP genotyping array for wax gourd was developed using genotyping by target sequencing(GBTS),featuring 10,722 SNPs evenly distributed across all 12 chromosomes,including 278 functional loci associated with key economic traits.To demonstrate its utility,genetic distances among 19 elite inbred lines were calculated from SNP data and correlated with heterosis for single fruit weight.The results revealed that greater genetic distance was associated with higher middle parent heterosis(MPH) for single fruit weight.Furthermore,56 commercial wax gourd cultivars collected from eight regions were selected and genotyped.Population structure analysis,phylogenetic analysis,and principal component analysis(PCA) collectively indicated that these cultivars fall into two major groups.Group I,comprising black or dark green skinned wax gourds,exhibited lower genetic diversity than Group II,which includes green or light green skinned varieties,reflecting shorter genetic distances within Group I.Finally,60 polymorphic SNPs were used to construct DNA fingerprints for distinguishing the 56 cultivars.As the first high-throughput genotyping platform for wax gourd,this SNP array provides an effective and powerful tool for genetic analysis. 展开更多
关键词 wax gourd SNP genotyping array HETEROSIS cultivar identification DNA fingerprint
在线阅读 下载PDF
A Reconfigurable Omnidirectional Triboelectric Whisker Sensor Array for Versatile Human–Machine–Environment Interaction
8
作者 Weichen Wang Jiaqi Zhu +9 位作者 Hongfa Zhao Fei Yao Yuzhu Zhang Xiankuan Qian Mingrui Shu Zhigang Wu Minyi Xu Hongya Geng Wenbo Ding Juntian Qu 《Nano-Micro Letters》 2026年第3期121-140,共20页
Developing effective,versatile,and high-precision sensing interfaces remains a crucial challenge in human-machine-environment interaction applications.Despite progress in interaction-oriented sensing skins,limitations... Developing effective,versatile,and high-precision sensing interfaces remains a crucial challenge in human-machine-environment interaction applications.Despite progress in interaction-oriented sensing skins,limitations remain in unit-level reconfiguration,multiaxial force and motion sensing,and robust operation across dynamically changing or irregular surfaces.Herein,we develop a reconfigurable omnidirectional triboelectric whisker sensor array(RO-TWSA)comprising multiple sensing units that integrate a triboelectric whisker structure(TWS)with an untethered hydro-sealing vacuum sucker(UHSVS),enabling reversibly portable deployment and omnidirectional perception across diverse surfaces.Using a simple dual-triangular electrode layout paired with MXene/silicone nanocomposite dielectric layer,the sensor unit achieves precise omnidirectional force and motion sensing with a detection threshold as low as 0.024 N and an angular resolution of 5°,while the UHSVS provides reliable and reversible multi-surface anchoring for the sensor units by involving a newly designed hydrogel combining high mechanical robustness and superior water absorption.Extensive experiments demonstrate the effectiveness of RO-TWSA across various interactive scenarios,including teleoperation,tactile diagnostics,and robotic autonomous exploration.Overall,RO-TWSA presents a versatile and high-resolution tactile interface,offering new avenues for intelligent perception and interaction in complex real-world environments. 展开更多
关键词 Reconfigurable sensor array Interaction interface Tactile perception Omnidirectional sensor Reversible anchoring
在线阅读 下载PDF
3D printed high-temperature ceramic conformal array antenna:Design,analysis,manufacturing,and testing
9
作者 Peng Li Ruibo Li +5 位作者 Zijiao Fan Jiujiu Han Guangda Ding Qunbiao Wang Wanye Xu Paolo Rocca 《Defence Technology(防务技术)》 2026年第1期340-353,共14页
In this study,the design,analysis,manufacturing,and testing of a 3D-printed conformal microstrip array antenna for high-temperature environments is presented.3D printing technology is used to fabricate a curved cerami... In this study,the design,analysis,manufacturing,and testing of a 3D-printed conformal microstrip array antenna for high-temperature environments is presented.3D printing technology is used to fabricate a curved ceramic substrate,and laser sintering and microdroplet spraying processes are used to add the conductive metal on the curved substrate.The problems of gain loss,bandwidth reduction,and frequency shift caused by high temperatures are addressed by using a proper antenna design,with parasitic patches,slots,and metal resonant cavities.The antenna prototype is characterized by the curved substrates and the conductive metals for the power dividers,the patch,and the ground plane;its performance is examined up to a temperature of 600℃in a muffle furnace and compared with the results from the numerical analysis.The results show that the antenna can effectively function at 600℃and even higher temperatures. 展开更多
关键词 Ceramic antenna Conformal array High-temperature environment 3D printing High gain and wide band
在线阅读 下载PDF
鹅星状病毒通用型TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:1
10
作者 陈立功 穆英丽 +5 位作者 张诚 潘保革 范乐乐 魏忠华 王学静 刘聚祥 《中国家禽》 北大核心 2025年第2期53-59,共7页
为建立用于鹅星状病毒1(GAstV 1)和鹅星状病毒2(GAstV 2)感染快速检测的实时荧光定量RT-PCR方法,试验根据部分GAstV ORF2基因和部分3′非编码区序列设计合成特异性引物和探针,采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度,在优化退火温度的基础... 为建立用于鹅星状病毒1(GAstV 1)和鹅星状病毒2(GAstV 2)感染快速检测的实时荧光定量RT-PCR方法,试验根据部分GAstV ORF2基因和部分3′非编码区序列设计合成特异性引物和探针,采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度,在优化退火温度的基础上,分别建立扩增GAstV 1和GAstV 2的标准曲线,进一步验证该方法的特异性、敏感性和重复性,建立的方法用于临床样品的检测,并与文献报道的常规RT-PCR方法进行比较。结果显示:优化后的反应体系中最优上、下游引物浓度均为0.40(或0.50)μmol/L,探针浓度均为0.50μmol/L,扩增线性范围分别为3.26×10^(3)~3.26×10^(8)拷贝/μL和7.09×10^(3)~7.09×10^(8)拷贝/μL,相关系数均为0.998;该方法可特异性检出两种GAstV,但对新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒、鹅细小病毒和血清4型禽腺病毒6种鹅病相关病毒的核酸均无扩增信号;其检测限分别为3.26×10^(2)拷贝/μL和7.09×10^(1)拷贝/μL;组内变异系数和组间变异系数均低于3%。建立的实时荧光定量RT-PCR方法对临床样品的检测结果显示,GAstV阳性率为90.57%(96/106);而文献报道的常规RT-PCR方法对GAstV 1和GAstV 2的混合阳性率为62.26%。研究表明,建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法为同时检测GAstV 1和GAstV 2提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 荧光定量rt-pcr TAQMAN探针
原文传递
兔出血症病毒RHDV1和RHDV2一步法双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR体系的建立和应用
11
作者 陈萌萌 王冠萱 +8 位作者 仇汝龙 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 徐为中 葛雷 李一鸣 王芳 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第5期937-942,共6页
兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体... 兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体系:2×One Step RT-PCR BufferⅢ10.0μL,上下游引物(10μmol/L)各0.6μL,ROX Reference DyeⅡ(50×)0.4μL,两种荧光探针(10μmol/L)各0.8μL,待测样本2.0μL,ddH_(2)O 4.8μL。反应程序:42℃5 min,95℃10 s,95℃5 s,60℃30 s,40个循环。试验结果表明,该体系特异性强,与轮状病毒、兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌无交叉反应;灵敏度高,最低检测限为1μL 100拷贝。通过组内重复和组间重复进行重复性分析,Ct值变异系数为0.2%~2.9%,表明该体系稳定性较好。使用该体系对112份临床样本(60份肝脏组织、52份鼻肛拭子)进行检测,RHDV总检出率为69%,而常规RT-PCR体系的检出率仅为51%。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有高灵敏度、强特异性和良好的重复性,可为RHDV的临床快速诊断及定量分析提供可靠技术支持。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 荧光定量rt-pcr TAQMAN探针
在线阅读 下载PDF
羊肠道病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
12
作者 马雪青 张雨星 +6 位作者 李平花 王松泰 魏达礼 赵志荀 朵红 卢曾军 孙普 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期757-763,共7页
为建立一种灵敏、特异、准确的羊肠道病毒(CEV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,本研究基于CEV基因序列的保守区设计特异性引物和探针,并制备标准品,通过优化反应体系和反应条件,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法,同时对其敏感性、... 为建立一种灵敏、特异、准确的羊肠道病毒(CEV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,本研究基于CEV基因序列的保守区设计特异性引物和探针,并制备标准品,通过优化反应体系和反应条件,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法,同时对其敏感性、特异性和重复性进行评估,并与常规RT-PCR比较检测临床样品。结果显示,所建方法的标准曲线R2为0.995,拷贝数与Ct值有良好的线性关系;该方法特异性强,与口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊痘病毒(SPV)、羊口疮病毒(ORFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)无交叉反应;敏感性最低检测限为23 copies/μL;组内与组间变异系数均小于2.5%,重复性好。使用本方法检测了598份羊的临床样品,阳性检出率(83/598)高于常规RT-PCR (30/598)。上述结果表明,本研究建立了一种灵敏、特异的CEV TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法,并建议采用羊的粪便或肛拭子即可进行CEV的流调工作,这为CEV的诊断、流行病学调查提供了重要的技术支持。 展开更多
关键词 羊肠道病毒 TaqMan实时荧光定量rt-pcr 诊断
在线阅读 下载PDF
口蹄疫病毒O型、A型和AsiaⅠ型三重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
13
作者 王翠 赵雪丽 +7 位作者 王东方 王淑娟 马震原 杨海波 刘影 柴茂 谢彩华 闫若潜 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期61-69,共9页
为建立口蹄疫病毒(FMDV)O型、A型和AsiaⅠ型三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,本研究在比对多条FMDV基因的基础上,根据2B基因的最优保守区,设计O型、A型和Asia I型FMDV通用的反转录引物;再根据VP1基因的比对结果,以变异区为扩增靶区域,设... 为建立口蹄疫病毒(FMDV)O型、A型和AsiaⅠ型三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,本研究在比对多条FMDV基因的基础上,根据2B基因的最优保守区,设计O型、A型和Asia I型FMDV通用的反转录引物;再根据VP1基因的比对结果,以变异区为扩增靶区域,设计3对分别针对O型、A型和AsiaⅠ型FMDV的特异性引物和TaqMan MGB探针。经优化反应体系和扩增程序等反应条件,建立基于探针技术的FDMV三重实时荧光定量RT-PCR检测方法。验证该方法的特异性、敏感性和重复性,对15份临床疑似FMDV感染样品进行检测,并与基因测序方法及RT-PCR方法进行比较分析。结果显示:本研究成功建立了FMDV三重FQ-PCR方法,实现了一步法对FMDV O型、A型和AsiaⅠ型病原样品的鉴别检测。该方法可特异性扩增FMDV O型、A型和AsiaⅠ型标准株细胞培养物,但对猪水疱性口炎病毒(VSV)等7种病原及阴性对照未出现扩增,特异性较强;对FMDV O型、A型和AsiaⅠ型阳性重组质粒标准品的最低检出限均可达到10拷贝/μL,敏感性较高;批内/批间试验变异系数为0.48%~1.55%,重复性较好;利用建立的三重FQ-PCR方法对15份临床疑似FMDV感染样品进行检测,检测结果与基因测序结果完全一致,优于RT-PCR方法。本研究建立的三重FQ-PCR方法具有敏感性高、特异性强,在同一反应体系中能同时鉴别检测出FMDV O型、A型和AsiaⅠ型等优点,能满足临床鉴别检测的需求。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 三重实时荧光定量rt-pcr 应用
在线阅读 下载PDF
国标中H5亚型高致病性禽流感病毒实时荧光RT-PCR方法的优化与应用
14
作者 刘朔 彭程 +3 位作者 毛秋艳 杨吉喆 蒋文明 刘华雷 《病毒学报》 北大核心 2025年第5期1522-1530,共9页
当前H5N1亚型禽流感疫情在全球范围内肆虐,且病毒不断变异,因此需要持续对检测方法的有效性进行评估。近年来,我们在临床样品检测过程中发现,国家标准《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2020)中H5亚型高致病性禽流感病毒实时荧光RT... 当前H5N1亚型禽流感疫情在全球范围内肆虐,且病毒不断变异,因此需要持续对检测方法的有效性进行评估。近年来,我们在临床样品检测过程中发现,国家标准《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2020)中H5亚型高致病性禽流感病毒实时荧光RT-PCR方法存在扩增曲线荧光值偏低的现象,对结果判定产生一定干扰。基于国标引物和探针序列与当前流行毒株的匹配性评估分析,我们设计和优化了上游引物和探针序列,并对优化方法的特异性、灵敏度和临床样品检测效果与国标方法进行了对比。结果显示,该优化方法特异性强,与其他亚型AIV和常见禽类病原体均无交叉反应;针对2.3.4.4b分支H5亚型病毒的检测灵敏度较国标方法提高了10倍,针对2.3.4.4h分支H5亚型病毒的检测灵敏度与国标方法类似;组内和组间试验Ct值变异系数介于0.17%~1.58%,具有良好的重复性;对48份家禽和野禽咽肛拭子样品检测,本优化方法检出阳性样本38份(国标方法检出37份),其中64.9%(24/37)阳性样品的Ct值较国标方法低2以上。结果表明,本研究优化的荧光RT-PCR方法可为H5亚型高致病性禽流感病毒的流行病学调查监测及快速诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5亚型 实时荧光rt-pcr 检测方法
原文传递
福建蝴蝶兰病毒小RNA测序及RT-PCR检测
15
作者 樊荣辉 吴建设 +2 位作者 冯子楠 钟声远 钟淮钦 《园艺学报》 北大核心 2025年第2期503-512,共10页
从福建省福州、厦门、漳州、泉州采集56个蝴蝶兰(Phalaenopsis)疑似病毒样品,按侵染症状分为褪绿、黄化褐斑、黄化皱缩等3类样品,采用小RNA测序技术和RT-PCR进行检测,共发现8种病毒,按照检出率从高到低分别为建兰花叶病毒(Cymbidium mos... 从福建省福州、厦门、漳州、泉州采集56个蝴蝶兰(Phalaenopsis)疑似病毒样品,按侵染症状分为褪绿、黄化褐斑、黄化皱缩等3类样品,采用小RNA测序技术和RT-PCR进行检测,共发现8种病毒,按照检出率从高到低分别为建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)85.71%,齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)35.71%,白三叶草花叶病毒(white clover mosaic virus,WCMV)32.14%,淮山药X病毒(yam virus X,Ya VX)21.43%,水仙花叶病毒(Narcissus mosaic virus,Na MV)10.71%,凤果花叶病毒(pepino mosaic virus,Pe MV)8.93%,马铃薯X病毒(potato virus X,Po VX)7.14%和仙人指X病毒(Schlumbergera virus X,Sc VX)7.14%。其中,Cy MV、ORSV和WCMV的检出率在30%以上,多为复合侵染,侵染率达75.51%。以小RNA测序序列为模板,设计出特异引物,建立了同时检测5种病毒的多重RT-PCR体系;ORSV、Cy MV、WCMV、Ya VX和Po VX的引物对浓度分别为0.30,0.06,0.20,0.50和0.40μmol·L^(-1),退火温度56℃时,可同时扩增出片段大小分别为1156、908、561、292和162 bp的目的条带,特异性良好。灵敏度检测结果显示,可从≥0.0001 mg的感病植物组织中检测到这5种病毒。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 小RNA深度测序 多重rt-pcr 病毒
原文传递
副流感病毒5型RT-PCR检测方法的建立及检测试剂盒的初步配制
16
作者 吴华伟 陈晓春 +4 位作者 刘丹 秦义娴 高金源 孔冬妮 姜平 《中国兽药杂志》 2025年第11期7-15,共9页
为建立检测副流感病毒5型(Parainfluenza virus5,PIV5)的RT-PCR方法,针对PIV5L基因设计筛选出一对特异性引物,对退火温度、引物浓度、阳性对照灭活剂及浓度等进行了优化,并进行了敏感性、特异性、试剂盒配制及冻融后检测效果验证研究。... 为建立检测副流感病毒5型(Parainfluenza virus5,PIV5)的RT-PCR方法,针对PIV5L基因设计筛选出一对特异性引物,对退火温度、引物浓度、阳性对照灭活剂及浓度等进行了优化,并进行了敏感性、特异性、试剂盒配制及冻融后检测效果验证研究。结果显示:该方法仅能从PIV5分离毒种扩增到与预期大小相符的长度为314bp的特异性目的片段,最适退火温度为57.1℃,最适引物浓度为0.2umol/L,阳性对照适宜灭活剂为二乙烯亚胺(BEI),试剂盒冻融后不影响检测结果。建立的RT-PCR方法检测灵敏度为8~10TCID50,与BPIV_(3)等22种常见病毒均无交叉,特异性强、敏感性高,为PIV5的临床诊断和流行病学调查提供了技术方法。 展开更多
关键词 副流感病毒5型 rt-pcr 检测试剂
在线阅读 下载PDF
H9N2亚型禽流感病毒双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
17
作者 刘莉 张贺楠 +4 位作者 莫一群 徐亚亚 金丁丁 齐岩 胡增垒 《中国家禽》 北大核心 2025年第11期154-160,共7页
为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进... 为建立一种快速、灵敏且特异的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法,试验根据H9N2 AIV的HA基因和NA基因保守区域设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应体系及条件,建立H9N2亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR检测方法,进一步对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估,并将建立的方法用于临床样品的检测,与H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒进行比较。结果显示:该方法与其他亚型AIV、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、传染性法氏囊病病毒和传染性支气管炎病毒无交叉反应,检测限为0.1 copies/μL,批内和批间变异系数均小于5%,临床样本检测阳性率(24.3%)高于H9亚型AIV荧光RT-PCR检测试剂盒(18.9%)。研究表明,建立的H9N2 AIV双重TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强,敏感性较高,能够应用于H9N2 AIV的快速检测。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 TAQMAN探针 荧光定量rt-pcr HA基因 NA基因
原文传递
水貂震颤综合征-星状病毒的检测及半巢式RT-PCR检测方法的建立
18
作者 王旭 刘德凯 +3 位作者 赵碧田 黄泽楷 李海名 张彦龙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期143-150,共8页
为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法,试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本,经H.E.染色制作成病理切片进... 为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法,试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本,经H.E.染色制作成病理切片进行组织病理学观察,采用RT-PCR方法对水貂常见病原[星状病毒(Astrovirus,AstV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)]进行检测,并对检测的病原进行遗传进化分析;然后建立针对病原建立半巢式RT-PCR检测方法,对建立的方法进行条件(退火温度、Taq酶体积、引物体积)优化、特异性试验、敏感性试验、重复性试验,并采用该方法对119份病死幼貂的脑组织样本进行检测。结果表明:病死水貂大脑-皮质内部分神经细胞变性、坏死,皮质内部分血管周围有炎性细胞浸润,出现管套现象,皮质内胶质细胞散在性浸润,与神经毒性AstV引起的特征性病理变化相似;其他组织未见明显病理变化。从病死幼貂脑组织中仅检测到AstV,命名为SMS-AstV-Harbin。从基于AstV ORF1b基因构建的遗传进化树中可见,SMS-AstVHarbin与Mink astrovirus isolate-SMS-AstV(登录号为GU985458.1)处于同一小分支,亲缘关系较近;与Human astrovirus UK1(登录号为KM358468.1)、Canine astrovirus strain HUN/2012/8(登录号为KX599354.1)、Feline astrovirus 2(登录号为KF499111.1)、Porcine astrovirus 3 strain NI-Brain/173-2016a/HUN(登录号为KY073231.1)、Bovine astrovirus CH13(登录号为KM035759.1)、Ovine astrovirus 2(登录号为NC_002469.1)处于不同小分支,亲缘关系较远。建立的半巢式RT-PCR检测方法的最优退火温度、Taq酶(5 U/μL)体积和引物(10μmol/L)体积分别为52℃、0.5μL和1μL。该方法能特异性地检出SMS-AstV,其cDNA最低检测限为1 pg/μL,且对3份样本的3次重复检测结果均一致。采用该方法检出SMS-AstV阳性样本117份,阳性率为98.32%。说明引起该养殖场幼貂死亡的病原为SMS-AstV,针对该病原建立的半巢式RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于快速检测。 展开更多
关键词 水貂震颤综合征 水貂星状病毒 病理学观察 病毒鉴定 遗传进化分析 半巢式rt-pcr方法
原文传递
新城疫病毒通用荧光RT-PCR检测方法的建立
19
作者 王静静 克军宏 +3 位作者 王海鸣 郭通 于晓慧 刘华雷 《中国动物检疫》 2025年第11期83-88,96,共7页
为满足新城疫病毒(NDV)快速检测的需求,通过对我国流行的6种基因型NDV基因组序列进行比对,针对P基因保守区域设计特异性引物和探针,建立了NDV通用荧光RT-PCR检测方法,并评估了方法的特异性、敏感性、重复性和诊断性能。结果显示:该方法... 为满足新城疫病毒(NDV)快速检测的需求,通过对我国流行的6种基因型NDV基因组序列进行比对,针对P基因保守区域设计特异性引物和探针,建立了NDV通用荧光RT-PCR检测方法,并评估了方法的特异性、敏感性、重复性和诊断性能。结果显示:该方法可检测目前国内流行的6种基因型NDV,与其他常见禽病病毒无交叉反应,灵敏度比常规RT-PCR高10倍,组内和组间变异系数均低于1.5%。利用该方法检测1044份临床样品,绘制ROC曲线,其线下面积为0.9718,诊断的敏感性和特异性分别为92.62%和98.99%,与病毒分离鉴定结果的符合率为98.08%。结果表明,本研究建立的方法特异性强、敏感性高、重复性好、准确性高,可用于NDV的快速、通用检测。 展开更多
关键词 新城疫病毒 通用荧光rt-pcr 检测性能评估
在线阅读 下载PDF
11种致牛腹泻病原的一步法多重PCR/RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
20
作者 金美君 胡云皓 +8 位作者 辛凌翔 刘燕 潘瑶 王秀丽 赵浩然 汤承 陈曦 李锦铨 朱良全 《微生物学通报》 北大核心 2025年第1期383-396,共14页
【背景】单病原或多病原混合感染导致的牛腹泻综合征严重制约养牛业发展,病原快速准确诊断是防控该病的重要前提。【目的】建立11种致牛腹泻的细菌或病毒的一步法多重PCR/RT-PCR检测方法,实现快速诊断病原。【方法】通过文献检索调查了... 【背景】单病原或多病原混合感染导致的牛腹泻综合征严重制约养牛业发展,病原快速准确诊断是防控该病的重要前提。【目的】建立11种致牛腹泻的细菌或病毒的一步法多重PCR/RT-PCR检测方法,实现快速诊断病原。【方法】通过文献检索调查了引起牛腹泻病的主要病原及其高覆盖率的引物,选择以产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)α-toxin、肠道沙门氏菌(Salmonella enterica)inv A、大肠杆菌(Escherichia coli)K99、牛肠道病毒(bovine enterovirus,BEV)5′-UTR、牛星状病毒(bovine astrovirus,BAstV)ORF1a、牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRoV)VP6、牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKoV)D4、牛诺如病毒(bovine norovirus,BNoV)ORF1、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)N、牛环曲病毒(bovine torovirus,BToV)N、牛病毒性腹泻黏膜病病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)5′-UTR为靶标序列的引物,通过温度梯度PCR及单一控制变量法优化退火温度、引物浓度、循环数,建立11种病原的多重PCR/RT-PCR检测方法,对该方法进行特异性、灵敏度和重复性评价,并应用该方法进行临床样品检测。【结果】最佳退火温度为54.4℃,C.perfringens、S.enterica、E.coli、BEV、BAstV、BRoV、BKoV、BNoV、BCoV、BToV和BVDV对应基因片段最优引物浓度分别为0.20、0.25、0.25、0.20、0.25、0.25、0.35、0.50、0.25、0.25、0.30μmol/L,最优循环数为35个循环。该方法特异性强,仅对靶标病原检测为阳性,对溶血性曼氏杆菌(Mansiella haemolyticus)、化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、牛支原体(Mycoplasma bovine)分离株等病原检测均为阴性;敏感性高,对重组质粒标准品最低检出限依次为7.5×10^(3)、7.5×10^(4)、7.5×10^(3)、7.5×10^(1)、7.5×10^(4)、7.5×10^(2)、7.5×10^(3)、7.5×10^(2)、7.5×10^(2)、7.5×10^(4)、7.5×10^(3)copies/μL;重复性好,批间与批内试验均一致。用该方法检测江苏地区临床样品490份,结果显示,BEV、BAstV、BRoV、BKoV、BNoV、BCoV、BToV、BVDV阳性率分别0.61%、0.41%、0.61%、0.21%、27.14%、3.27%、0.21%、1.02%。通过单重PCR对该多重PCR临床样品检测结果进行重复验证,结果显示符合率为100%。随机挑选50个检测为阳性的PCR产物进行测序验证,结果均为相应病原的基因片段。【结论】建立一种同时检测11种牛腹泻主要病原的一步法多重PCR/RT-PCR检测方法。 展开更多
关键词 腹泻 细菌 病毒 多重PCR rt-pcr
原文传递
上一页 1 2 250 下一页 到第
使用帮助 返回顶部