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莱茵衣藻RSP10的多克隆抗体制备及应用
1
作者 卢婵 张媛媛 +2 位作者 陶冶 樊振川 刘雁霞 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第11期23-29,共7页
【目的】研究径向辐条蛋白RSP10如何完成纤毛组装,制备一种高特异性的RSP10多克隆抗体。【方法】首先构建原核表达载体pMal-C2X-rsp10,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达MBP标签的RSP10,待融合蛋白纯化后切除MBP标签,免疫新西兰雄性大白... 【目的】研究径向辐条蛋白RSP10如何完成纤毛组装,制备一种高特异性的RSP10多克隆抗体。【方法】首先构建原核表达载体pMal-C2X-rsp10,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达MBP标签的RSP10,待融合蛋白纯化后切除MBP标签,免疫新西兰雄性大白兔获得抗血清,以间接ELISA法测定其效价。【结果】通过Protein A和抗原抗体纯化后,获得了特异性强、灵敏度高的兔抗莱茵衣藻RSP10抗体,通过免疫荧光检测其定位于细胞基体部位,进一步分离纤毛组分发现RSP10大量存在于纤毛轴丝中,少量存在于纤毛基质中。【结论】该试验为后续研究RSP复合物如何完成组装及其影响纤毛运动的深层分子机理提供了有力的数据支撑。 展开更多
关键词 纤毛 rsp10 多克隆抗体 表达和纯化
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家兔精子膜蛋白rSP10在大肠杆菌中的高效表达及其抗血清的制备 被引量：1
2
作者 刘建喜 林爱星 +3 位作者 杨毅 侯健 胡宏宇 陈永福 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期314-317,共4页
为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性 ,将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中 ,N端具有His6 肽的融合蛋白re rSP10得到高效表达 ,表达产物达细菌总蛋白的 6 7%。经DEAE柱层析纯化表达产物 ,re rSP1... 为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性 ,将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中 ,N端具有His6 肽的融合蛋白re rSP10得到高效表达 ,表达产物达细菌总蛋白的 6 7%。经DEAE柱层析纯化表达产物 ,re rSP10 ,产量约为 5 0mg mL培养物。Western实验结果表明 ,精子膜蛋白多克隆抗体能识别re rsp10 ,说明大肠杆菌表达的re rSP10具有免疫原性。用纯化的re rSP10免疫雌性兔 ,得到re rSP10专一性多克隆抗血清。将re rSP10专一性多克隆抗血清加入获能精子中 ,发现SP10专一性多克隆抗血清严重影响获能精子的运动并且表现为剂量依赖性 。 展开更多
关键词 家兔 精子膜蛋白 rsp10 表达 抗血清 免疫避孕
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家兔精子膜蛋白rsp10基因的克隆和特征分析
3
作者 刘建喜 林爱星 +2 位作者 杨毅 曾斌 陈永福 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期483-487,共5页
sp10基因在精卵识别过程中起着重要作用 .从家兔睾丸cDNA文库中克隆了家兔的sp10基因 (rsp10 ) ,cDNA序列全长 12 82bp ,包含 10 0 5bp开放阅读框 .由开放阅读框推测出的氨基酸序列与人、狒狒、狐和小鼠的SP10氨基酸序列之间存在较高水... sp10基因在精卵识别过程中起着重要作用 .从家兔睾丸cDNA文库中克隆了家兔的sp10基因 (rsp10 ) ,cDNA序列全长 12 82bp ,包含 10 0 5bp开放阅读框 .由开放阅读框推测出的氨基酸序列与人、狒狒、狐和小鼠的SP10氨基酸序列之间存在较高水平的同源性 ,同源性分别为 70 %、69%、68%和 61% .在大肠杆菌中表达rsp10基因 ,获得重组rSP10 .用重组rSP10免疫雌性母兔 ,得到rSP10专一性多抗 .对精子膜蛋白进行免疫印迹分析发现 ,rsp10基因在家兔睾丸中的表达呈现多态性 .rsp10基因在GenBank的登录号为 :AF2 51558. 展开更多
关键词 家兔 精子膜蛋白 rsp10 基因克隆 特征分析
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