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HSV-TK/CD20双自杀基因系统慢病毒载体的构建及应用
被引量:
3
1
作者
家婷
张涛
+9 位作者
邹强
郑武燕
赵日
欧阳寒梅
曹倩
朱榕
王茂庆
叶鑫宇
刘佳慧
李华
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期711-717,共7页
目的构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除。方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位。合成...
目的构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除。方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位。合成编码RQR8及HSV-TK的基因,构建慢病毒共表达载体pLV-RQR8-T2A-TK;脂质体Lipofectamine3000转染Jurkat细胞,流式荧光抗CD34单抗检测RQR8的表达,通过磁珠筛选获得RQR8+TK+Jurkat细胞;分别加入GCV或RTX检测自杀可控开关功能:CCK8法检测加药后细胞增殖情况,Annexin-V/PI检测细胞凋亡情况。结果慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK酶切片段大约1 670 bp,测序进一步证实外源片段插入正确。慢病毒感染Jurkat细胞,感染率为45.21%,磁珠纯化得到99.4%纯度的RQR8+TK+Jurkat。GCV对RQR8+TK+Jurkat具有细胞毒性作用,GCV浓度为40μmol/L时,其存活率为(52.11±7.04)%,IC50为20.66μmol/L。80μmol/L GCV作用RQR8+TK+Jurkat细胞72 h后凋亡率达(41.28±2.78)%。在血清(含补体)存在情况下,320μg/ml RTX可通过补体介导的细胞杀伤作用杀伤RQR8+TK+Jurkat,其存活率为(29.64±4.52)%。结论双自杀可控开关慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK构建成功,加入GCV或RTX可通过2种不同路径成功杀伤细胞,达到细胞清除目的,提高了安全性,为临床治疗过继免疫不良反应提供多种选择。
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关键词
自杀基因
HSV-TK
CD20
rqr8
利妥昔单抗
更昔洛韦
原文传递
题名
HSV-TK/CD20双自杀基因系统慢病毒载体的构建及应用
被引量:
3
1
作者
家婷
张涛
邹强
郑武燕
赵日
欧阳寒梅
曹倩
朱榕
王茂庆
叶鑫宇
刘佳慧
李华
机构
西南交通大学医学院
西部战区总医院肿瘤诊治中心
成都医学院科研实验中心
成都中医药大学基础医学院免疫学教研室
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期711-717,共7页
基金
四川省科技厅面上项目(19YYJC0242)
四川省科技厅应用基础重点项目(2018JY0440)
+2 种基金
成都军区卫生人才培养对象(4173273)
医院研究型人才培养对象(41732536)
成都军区十二五重大项目(B14005)
文摘
目的构建同时表达单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和RQR8膜蛋白双自杀可控开关的Jurkat细胞,使之可通过更昔洛韦药物(GCV)或利妥昔单抗(RTX)实现可控性细胞消除。方法 RQR8膜蛋白小分子含利妥昔单抗识别的模拟表位和抗CD34单抗表位。合成编码RQR8及HSV-TK的基因,构建慢病毒共表达载体pLV-RQR8-T2A-TK;脂质体Lipofectamine3000转染Jurkat细胞,流式荧光抗CD34单抗检测RQR8的表达,通过磁珠筛选获得RQR8+TK+Jurkat细胞;分别加入GCV或RTX检测自杀可控开关功能:CCK8法检测加药后细胞增殖情况,Annexin-V/PI检测细胞凋亡情况。结果慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK酶切片段大约1 670 bp,测序进一步证实外源片段插入正确。慢病毒感染Jurkat细胞,感染率为45.21%,磁珠纯化得到99.4%纯度的RQR8+TK+Jurkat。GCV对RQR8+TK+Jurkat具有细胞毒性作用,GCV浓度为40μmol/L时,其存活率为(52.11±7.04)%,IC50为20.66μmol/L。80μmol/L GCV作用RQR8+TK+Jurkat细胞72 h后凋亡率达(41.28±2.78)%。在血清(含补体)存在情况下,320μg/ml RTX可通过补体介导的细胞杀伤作用杀伤RQR8+TK+Jurkat,其存活率为(29.64±4.52)%。结论双自杀可控开关慢病毒载体pLV-RQR8-T2A-TK构建成功,加入GCV或RTX可通过2种不同路径成功杀伤细胞,达到细胞清除目的,提高了安全性,为临床治疗过继免疫不良反应提供多种选择。
关键词
自杀基因
HSV-TK
CD20
rqr8
利妥昔单抗
更昔洛韦
Keywords
Suicide gene
HSV-TK
CD20
rqr8
Rituximab
Ganciclovir
分类号
R918 [医药卫生—药学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HSV-TK/CD20双自杀基因系统慢病毒载体的构建及应用
家婷
张涛
邹强
郑武燕
赵日
欧阳寒梅
曹倩
朱榕
王茂庆
叶鑫宇
刘佳慧
李华
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
3
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