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云浮地区结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL与rrs突变特征研究 被引量:1
1
作者 林妙芬 祝惠钦 《实验室检测》 2025年第11期32-34,共3页
目的 分析云浮地区肺结核患者链霉素耐药基因rpsL和rrs基因突变特征,为肺结核诊疗提供依据。方法 采用热裂解法提取35例结核分枝杆菌复合群菌株DNA,分别设计针对rpsL和rrs基因片段引物,再进行PCR扩增、电泳、测序。结果 30例链霉素耐药... 目的 分析云浮地区肺结核患者链霉素耐药基因rpsL和rrs基因突变特征,为肺结核诊疗提供依据。方法 采用热裂解法提取35例结核分枝杆菌复合群菌株DNA,分别设计针对rpsL和rrs基因片段引物,再进行PCR扩增、电泳、测序。结果 30例链霉素耐药株中检出18例基因突变(60.00%),其中rpsL基因突变15例(83.33%),rrs基因突变3例(16.67%);5例敏感株均未突变。耐药株与敏感株的突变率差异显著(χ^(2)=4.008,P=0.045)。基因测序与比例法药敏结果一致性较低(Kappa=0.300,P=0.013)。突变以单位点突变为主(83.33%,15/18),多位点突变占16.67%(3/18)。rpsL 128 A>G突变率最高(40.00%,12/30),其次为rpsL263 A>G、rrs514 A>C、rrs906 A>G(各3.33%,1/30)。结论 云浮地区耐链霉素结核分枝杆菌与rpsL和rrs基因突变密切相关,突变类型最常见的是rpsL 128 A>G,共发现5种新的突变类型。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 基因突变 链霉素 rpsl基因 rrs基因 基因测序
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武汉地区结核分枝杆菌氨基糖苷类抗生素耐药分离株rpsL和rrs基因特征分析 被引量:7
2
作者 温子禄 沈建国 +5 位作者 张朝宝 余晓丽 陈平 唐神结 郭晓奎 张舒林 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1583-1587,共5页
目的阐明武汉地区结核分枝杆菌分离株氨基糖苷类药物耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征。方法从武汉医疗救治中心共收集69株结核分枝杆菌的临床菌株,包括耐链霉素(SM)菌株35株(其中4株同时对卡那霉素耐药)和SM敏感菌株34株(其中全敏... 目的阐明武汉地区结核分枝杆菌分离株氨基糖苷类药物耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征。方法从武汉医疗救治中心共收集69株结核分枝杆菌的临床菌株,包括耐链霉素(SM)菌株35株(其中4株同时对卡那霉素耐药)和SM敏感菌株34株(其中全敏感20株)。采用PCR直接测序法分析rpsL和rrs基因的分子突变特征。结果 35株SM耐药株中有26株(74.3%)检测到rpsL突变,突变位点集中在第43位和第88位密码子,并发现了1个新的突变类型Lys88Glu;13株耐药株(37.1%)检测到四种不同类型的rrs基因突变,分别为A1401G(17.1%,6/35)、A514C(14.3%,5/35)、G1487A(2.9%,1/35)和C517T(2.9%,1/35),1株全敏感菌株的rrs基因发生了C1029T突变。卡那霉素耐药株中只有3株检测到了rrs突变,并发现了一种rrs基因尚未见报道的G1487A突变类型。结论结核分枝杆菌对氨基糖苷类药物的耐药与rpsL和rrs突变相关,耐药基因突变类型存在地域差异。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 氨基糖苷类 耐药 rpsl基因 rrs基因
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链霉素耐药结核分支杆菌rpsL基因分析 被引量:9
3
作者 黄海南 韩金祥 +3 位作者 王进鸿 宋长征 梁浩 张忠玲 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期376-381,共6页
结核分支杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis.TB)的rpsL基因突变往往与链霉素 (Streptomycin .SM)耐药变异有关。选择了 77例TB临床分离株 ,应用BACTEC4 6 0快速培养系统进行常规药敏实验 ,同时针对rpsL基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,对PC... 结核分支杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis.TB)的rpsL基因突变往往与链霉素 (Streptomycin .SM)耐药变异有关。选择了 77例TB临床分离株 ,应用BACTEC4 6 0快速培养系统进行常规药敏实验 ,同时针对rpsL基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,对PCR产物进行单链构型多态性 (SSCP)分析 ,MboⅡ酶切后的限制性片段长度分析 (RFLP)和序列测定分析。常规药敏实验显示 :有 2 0株为SM敏感 ,5 7株为耐药。SSCP显示 :34株的rpsL基因为野生型 ,4 3株为突变型。与常规药敏相比SSCP的特异性和阳性预期值分别为 95 %和 98%。RFLP显示 :81 4 %的突变类型使其失去MboⅡ酶切位点。序列测定显示 :失去MboⅡ酶切位点的突变为rpsL基因 4 3位密码子存有单碱基突变 (AAG→AGG)。实验结果表明 ,TB对SM耐药变异与rpsL基因突变相关 ,其中第 4 3位密码子的突变是最常见的原因。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 链霉素耐药 rpsl基因 基因突变
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河南省耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变分析 被引量:17
4
作者 贾琼 石大伟 +4 位作者 赵玉玲 李辉 陈彦丞 李亮 朱国峰 《中国防痨杂志》 CAS 2010年第11期760-762,共3页
关键词 耐多药结核分枝杆菌 耐药相关基因 链霉素 突变分析 rpsl rrS 河南省 抗结核药物
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耐链霉素结核分枝杆菌rpsL基因高突变位点43Codon分子信标检测的实验研究 被引量:4
5
作者 陈庆海 边志衡 +1 位作者 匡红 府伟灵 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期309-311,331,共4页
目的选择耐链霉素(STR)结核分枝杆菌rpsL基因主要突变位点密码子43序列设计分子信标探针及扩增体系,并建立运用荧光显微镜及图像分析软件检测荧光结果及定性判断的方法。方法运用软件Beacon designer设计43Codon分子信标探针及建立其扩... 目的选择耐链霉素(STR)结核分枝杆菌rpsL基因主要突变位点密码子43序列设计分子信标探针及扩增体系,并建立运用荧光显微镜及图像分析软件检测荧光结果及定性判断的方法。方法运用软件Beacon designer设计43Codon分子信标探针及建立其扩增体系,采用荧光显微镜观测反应后的荧光信号及图像分析软件定性判断结果。结果包含43Codon rpsL基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物条带清晰;通过荧光显微镜观测到标准株及耐STR株PCR产物与分子信标探针杂交后荧光信号区别明显;67株耐STR与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,P<0.05和P<0.01的耐STR组检出率为80%。结论分子信标技术是一种具有高灵敏、高特异核酸检测技术;采用荧光显微镜观测荧光信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。 展开更多
关键词 耐链霉素rpsl基因 突变位点43Codon 分子信标 荧光显微镜
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TaqMan-小沟结合物荧光探针对青海省青南地区104株鼠疫菌链霉素耐药基因rpsL突变位点的筛查 被引量:3
6
作者 柏吉祥 辛有全 +7 位作者 李胜 靳娟 张琪 杨晓艳 金泳 彭文轩 代瑞霞 何建 《中国热带医学》 CAS 2023年第6期662-666,共5页
目的了解青海省青南地区rpsL基因点突变引起鼠疫菌耐链霉素的现状,为今后青南地区突发人间鼠疫的精准临床用药及预防耐药发生提供理论依据。方法筛选1957—2009年青海省青南地区取自鼠疫患者、媒介昆虫体内及中间宿主的104株代表性鼠疫... 目的了解青海省青南地区rpsL基因点突变引起鼠疫菌耐链霉素的现状,为今后青南地区突发人间鼠疫的精准临床用药及预防耐药发生提供理论依据。方法筛选1957—2009年青海省青南地区取自鼠疫患者、媒介昆虫体内及中间宿主的104株代表性鼠疫菌,用赫氏平皿进行分离培养,采用十二烷基磺酸钠裂解和苯酚-氯仿法提取代表性鼠疫菌的DNA,针对我国链霉素耐药基因rpsL基因设计引物及TaqMan-小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针Probe1[FAM]和Probe2[VIC],利用TaqMan-MGB荧光探针的实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,对青南地区104株鼠疫菌链霉素耐药位点rpsL基因的突变情况进行检测。结果青南地区104株被试菌株FAM检测结果均为阳性,对应检测rpsL(128:A),相对荧光单位(relative fluorescence unit,RFU)峰值>1000,阴性<200。所有被试菌株VIC检测结果均为阴性,对应检测rpsL(128:G),RFU峰值<200,阳性>1000。即青南地区104株鼠疫菌中未发现耐链霉素rpsL基因点突变菌株。结论了解到青南地区鼠疫菌耐链霉素菌株分布情况,为青南地区预防耐药发生以及鼠疫菌临床治疗提供了基础数据。 展开更多
关键词 鼠疫菌 TaqMan-小沟结合物荧光探针 链霉素 rpsl基因 筛查
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应用TaqMan-MGB探针RT-qPCR技术对青海省海南州鼠疫菌耐链霉素rpsL基因突变位点的检测 被引量:2
7
作者 李胜 靳娟 +7 位作者 何建 张琪 杨晓艳 辛有全 赵海红 张晓璐 柏吉祥 代瑞霞 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期331-335,共5页
目的研究青海省海南藏族自治州(海南州)鼠疫疫源地鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)对链霉素的敏感性,以便在突发鼠疫疫情中能精准地指导鼠疫临床用药。方法根据鼠疫菌基因序列设计特异性引物,以S19960127菌株核糖体蛋白S12编码基因(rpsL基因)突变... 目的研究青海省海南藏族自治州(海南州)鼠疫疫源地鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)对链霉素的敏感性,以便在突发鼠疫疫情中能精准地指导鼠疫临床用药。方法根据鼠疫菌基因序列设计特异性引物,以S19960127菌株核糖体蛋白S12编码基因(rpsL基因)突变位点和野生型鼠疫菌株rpsL基因位点分别设计探针,利用TaqMan-MGB探针技术对海南州1954-2009年分离的87株鼠疫菌进行耐链霉素rpsL基因突变位点检测。结果87株被试菌株的野生型A碱基的羧基荧光素(FAM)探针检测结果均为阳性,每个反应管内荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(Ct)值在18.74~21.93,相对荧光单位(RFU)峰值>2000;S19960127的Ct值为25.42,RFU峰值<200;阴性对照RFU峰值<200。所有被试菌株突变型G碱基的亚磷酰胺(VIC)探针检测结果均为阴性,Ct值在20.04~24.79,RFU峰值<200;S19960127的Ct值为17.56,RFU峰值>1000;阴性对照RFU峰值<200。实验结果显示海南州鼠疫疫源地87株鼠疫菌基因序列第128位的碱基未发生A→G突变,该疫源地未检出耐链霉素鼠疫菌株。结论海南州鼠疫疫源地87株鼠疫菌对链霉素均敏感。鉴于细菌耐药性基因的产生与传播特征,应持续开展监测并建立鼠疫菌耐药性监测网络,以便能及时发现并控制耐药菌的传播。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 耐链霉素 rpsl基因 实时荧光定量PCR TAQMAN-MGB探针
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应用PCR-RFLP分析结核分枝杆菌rpsL基因突变 被引量:14
8
作者 吴雪琼 张俊仙 庄玉辉 《中国防痨杂志》 CAS 2000年第1期8-11,共4页
目的 了解结核分枝杆菌链霉素(SM)耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法 通过PCR-RFLP分析62株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因突变的部位和性质。结果 以H37RV标准株为对照,13株敏感株的rpsL基因有MboⅡ酶切位点... 目的 了解结核分枝杆菌链霉素(SM)耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法 通过PCR-RFLP分析62株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因突变的部位和性质。结果 以H37RV标准株为对照,13株敏感株的rpsL基因有MboⅡ酶切位点;37株耐SM分离株中,31株(838%)无MboⅡ酶切位点;12株耐其它抗结核药物株中,也有2株无MboⅡ酶切位点。结论 大多数结核分枝杆菌SM耐药分离株的核糖体S12蛋白编码基因(rpsL)第43位密码子有点突变。PCR-RFLP可能成为快速检测结核分枝杆菌耐药突变株的一种新方法。 展开更多
关键词 结核病 结核分枝杆菌 rpsl基因 PCR-RFLP
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宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变研究 被引量:4
9
作者 车洋 杨天池 +1 位作者 平国华 林律 《中国预防医学杂志》 CAS 2016年第10期744-749,共6页
目的阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征,为宁波地区耐多药结核病的有效防控提供科学依据。方法从宁波市疾病预防控制中心收集67例耐多药结核分枝杆菌临床分离株,包括耐链霉素菌株40株和链霉素... 目的阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征,为宁波地区耐多药结核病的有效防控提供科学依据。方法从宁波市疾病预防控制中心收集67例耐多药结核分枝杆菌临床分离株,包括耐链霉素菌株40株和链霉素敏感菌株27株。采用PCR直接测序法分析rpsL和rrs基因的分子突变特征。对链霉素耐药与基因突变率关系之间的差异采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 40株耐链霉素菌株中,31株(77.50%)检测到rpsL发生突变。突变位点集中在第43位和第88位密码子;6株耐链霉素菌株(15.00%)检测到2种不同类型的rrs基因突变,分别为A1401G(7.50%,3/40);A514C(7.50%,3/40)。27株链霉素敏感菌株中有4株(14.81%)发生rpsL突变,突变位点集中在第104位和第119位密码子,1株链霉素敏感菌株的rrs基因检测到A1401G突变。耐多药结核分枝杆菌中链霉素耐药株rpsL基因突变率高于链霉素敏感株,两者之间差异有统计学意义(χ2=25.387,P<0.05)。结论宁波地区耐多药结核分枝杆菌对链霉素的耐药与rpsL突变高度相关,耐药基因突变类型存在地域差异。 展开更多
关键词 耐多药结核 链霉素 rpsl基因 rrs基因
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临床分离结核分枝杆菌耐药性质与rpoB、rpsL基因变异的研究 被引量:3
10
作者 许蕴怡 谭耀驹 +3 位作者 易小萍 关平 曹翌明 曾少芳 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第18期3131-3133,共3页
目的:对从疑似结核病患者痰液中分离的结核分枝杆菌的rpoB和rpsL基因突变情况进行研究,分别探讨其与耐利福平(RFP)和耐链霉素(SM)之间的关系。方法:采用PCR和DNA测序法对结核分枝杆菌临床分离株和1株卡介苗株(BCG)的rpoB和rpsL基因进行... 目的:对从疑似结核病患者痰液中分离的结核分枝杆菌的rpoB和rpsL基因突变情况进行研究,分别探讨其与耐利福平(RFP)和耐链霉素(SM)之间的关系。方法:采用PCR和DNA测序法对结核分枝杆菌临床分离株和1株卡介苗株(BCG)的rpoB和rpsL基因进行序列分析。结果:分离得到耐利福平27株,耐链霉素25株,经测序分析,所有利福平、链霉素敏感株rpoB、rpsL基因均未发生氨基酸突变;RFP和SM耐药株rpoB和rpsL基因的突变率各为81.5%(22/27)和76%(19/25);耐利福平以Ser531Leu突变最为常见,突变频率为55.6%(15/27),耐链霉素以Lys43Arg位突变最为常见,突变频率为72.0%(18/25)。结论:rpoB和rpsL基因突变分别是结核分枝杆菌RFP和SM耐药性产生的主要分子机制,PCR-DNA测序法可快速检测结核分枝杆菌RFP和SM耐药性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药性 RPOB基因 rpsl基因 基因变异
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结核分枝杆菌耐链霉素与rpsL和rrS基因的相关性研究 被引量:2
11
作者 李奇凤 张向晖 +3 位作者 杜燕 李宏 王远志 袁俐 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第1期16-18,共3页
为探讨新疆地区结核分枝杆菌对链霉素(streptomycin,STR)产生耐药性的分子机制,建立直接快速检测结核杆菌STR药物敏感性的方法。应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)银染分析技术,检测62株结核杆菌临床分离株链霉素耐药性及rpsL... 为探讨新疆地区结核分枝杆菌对链霉素(streptomycin,STR)产生耐药性的分子机制,建立直接快速检测结核杆菌STR药物敏感性的方法。应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)银染分析技术,检测62株结核杆菌临床分离株链霉素耐药性及rpsL和rrS基因变异情况,以结核分枝杆菌标准株(H37Rv)为对照。结果发现62株结核杆菌临床分离株中,32株STR敏感株的rpsL和rrS基因未见SSCP泳动异常,30株STR耐药株中,23株(76.7%)中rpsL(21株)和rrS(5株)基因出现SSCP泳动异常,并且3株出现了rpsL和rrS双基因的SSCP泳动异常。因此,rp-sL和rrS基因突变可能是结核分枝杆菌对链霉素产生耐药性的重要分子机制,PCR-SSCP银染技术可作为快速检测结核杆菌STR药物敏感性的方法。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 链霉素 rpsl rrS 耐药性 PCR-SSCP银染法
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结核分枝杆菌katG、rpoB、rpsL耐药基因快速检测方法的建立 被引量:2
12
作者 杨柳 苏明权 +4 位作者 程晓东 岳乔红 马越云 刘家云 郝晓柯 《中国卫生检验杂志》 CAS 2009年第8期1735-1737,共3页
目的:建立一套应用multi-PCR-SSCP(multiple-Polymerase Chain Reaction-Single Strand Cinformation Poly-morphism)快速检测结核分枝杆菌耐药基因突变的方法,评价该方法的临床应用价值。方法:分别用常规PCR和multi-PCR-SSCP检测58株... 目的:建立一套应用multi-PCR-SSCP(multiple-Polymerase Chain Reaction-Single Strand Cinformation Poly-morphism)快速检测结核分枝杆菌耐药基因突变的方法,评价该方法的临床应用价值。方法:分别用常规PCR和multi-PCR-SSCP检测58株结核分枝杆菌临床分离株katG、rpoB、rpsL基因突变并与常规药敏试验检测结果进行对比。结果:经常规药敏试验检测,58株结核分枝杆菌临床分离株中有41株耐药,其中,耐异烟肼(INH)35株;耐利福平(RFP)31株;耐链霉素(SM)31株。单基因PCR-SSCP与multi-PCR-SSCP分析结果一致,检出katG、rpoB、rpsL基因的突变率分别为65.7%(23/35)、84%(26/31)、71%(22/31),17株药物敏感株中有1株rpoB基因SSCP电泳条带与结核杆菌标准株结果有差异。结论:multi-PCR-SSCP方法敏感、特异,可快速检测结核分枝杆菌katG、rpoB、rpsL耐药基因的突变,将该方法与药敏试验联合应用可互相弥补,成为临床指导用药的好方法。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 KATG RPOB rpsl 基因突变 multi-PCR-SSCP
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结核分枝杆菌临床分离株链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变的研究 被引量:3
13
作者 盛喜玲 赵玉玲 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第11期2534-2536,共3页
目的链霉素在结核病治疗中作为一线药物广泛使用,我国已经使用50年以上。本文主要研究结核分枝杆菌链霉素耐药基因rpsL和rrs基因突变检测对链霉素耐药的相关性。方法 205株结核分枝杆菌临床分离株(经常规方法证实,125株为链霉素耐药,80... 目的链霉素在结核病治疗中作为一线药物广泛使用,我国已经使用50年以上。本文主要研究结核分枝杆菌链霉素耐药基因rpsL和rrs基因突变检测对链霉素耐药的相关性。方法 205株结核分枝杆菌临床分离株(经常规方法证实,125株为链霉素耐药,80株为敏感),测定链霉素最小抑菌浓度(MIC),测序法检测rpsL和rrs基因突变。结果 84%(105/125)的链霉素耐药株携有rpsL或/和rrs基因突变,其中rpsL基因突变占大多数(76.8%,96/125)。对105株带有基因突变的菌株的分析表明,rpsL,rrs基因的突变类型与MIC之间未见密切关系。80株敏感株未检出基因突变。结论结核分支杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中起主要作用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 链霉素耐药 rpsl rrs MIC
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耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpsL基因特征分析 被引量:4
14
作者 车洋 于梅 +1 位作者 平国华 林律 《中国卫生检验杂志》 CAS 2016年第3期311-313,共3页
目的阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌rps L基因突变特征,为本地区耐多药结核病的有效预防控制提供科学依据。方法从宁波市疾病预防控制中心共收集67例耐多药结核分枝杆菌临床分离株,包括耐链霉素(SM)菌株40株和SM敏感菌株27株。采用PC... 目的阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌rps L基因突变特征,为本地区耐多药结核病的有效预防控制提供科学依据。方法从宁波市疾病预防控制中心共收集67例耐多药结核分枝杆菌临床分离株,包括耐链霉素(SM)菌株40株和SM敏感菌株27株。采用PCR直接测序法分析rps L基因的分子突变特征。结果 40株耐SM菌株中有31株rps L发生突变,突变率为77.50%,突变类型主要为Lys43Arg和Lys88Arg;27株SM敏感菌株中有4株发生突变,突变率为14.81%,突变类型主要为Ala119Gly。耐多药结核分枝杆菌中SM耐药株rps L基因突变率明显高于SM敏感株,两者之间差异有统计学意义(χ^2=25.387,P〈0.05)。结论宁波地区耐多药结核分枝杆菌rps L基因突变与链霉素耐药高度相关,其中Lys43Arg突变是主要突变类型,耐药基因突变类型存在地区差异。 展开更多
关键词 耐多药结核分枝杆菌 链霉素 rpsl基因
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多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL的构建及其功能鉴定 被引量:1
15
作者 张万江 鲍朗 +3 位作者 邓喜玲 吴芳 曹旭东 王晓樱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期614-617,共4页
目的:构建多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL及其功能鉴定。方法:制备临床分离株多耐药结核杆菌基因组DNA,PCR扩增该株结核杆菌rpsL基因,构建及鉴定该株结核杆菌rpsL基因重组穿梭质粒PMV261/rp... 目的:构建多耐药临床分离株结核杆菌rpsL基因重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒pMV261/rpsL及其功能鉴定。方法:制备临床分离株多耐药结核杆菌基因组DNA,PCR扩增该株结核杆菌rpsL基因,构建及鉴定该株结核杆菌rpsL基因重组穿梭质粒PMV261/rpsL,重组穿梭质粒PMV261/rpsL电转化结核杆菌H37Rv株及其鉴定。结果:成功地构建了重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒PMV261/rpsL;重组大肠杆菌-结核杆菌穿梭质粒PMV261/rpsL电转化结核杆菌H37Rv株获得成功,并且重组质粒PMV261/rpsL电转化后的结核杆菌H37Rv株对链霉素耐药。结论:该临床分离株多耐药结核分支杆菌对链霉素耐药的机制仅仅是由于rpsL基因的93bp、94bp处碱基突变所致,耐药性是一个基因突变的结果,是单基因型。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 基因 rpsl
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甘肃省鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌耐链霉素基因rpsL突变位点的检测 被引量:1
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作者 郭丽民 袁育 +7 位作者 何爱伟 吴斌 苗克军 王鼎盛 徐大琴 席进孝 王扬扬 安文静 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2024年第6期559-563,共5页
目的分析甘肃省鼠疫疫源地鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)耐链霉素基因rpsL序列突变特征,为突发人间鼠疫病临床用药及鼠疫菌耐药监测提供依据。方法选取1962—2022年分离自甘肃省不同类型鼠疫疫源地376株鼠疫菌,提取DNA,根据鼠疫菌耐链霉素基因r... 目的分析甘肃省鼠疫疫源地鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)耐链霉素基因rpsL序列突变特征,为突发人间鼠疫病临床用药及鼠疫菌耐药监测提供依据。方法选取1962—2022年分离自甘肃省不同类型鼠疫疫源地376株鼠疫菌,提取DNA,根据鼠疫菌耐链霉素基因rpsL设计PCR引物和TaqMan-MGB荧光探针,采用PCR产物直接测序法分析rpsL基因的突变位点,实时荧光PCR技术对甘肃省不同疫源地鼠疫菌耐链霉素基因rpsL的128位点碱基突变进行检测。结果376条rpsL基因序列比对分析发现甘肃省不同类型鼠疫疫源地鼠疫菌rpsL基因全序列均未发生变异,不同年代的鼠疫菌rpsL基因碱基序列均相同,证实甘肃省鼠疫菌rpsL基因序列保守。376株甘肃省不同鼠疫疫源地鼠疫菌羧基荧光素(FAM)探针检测结果均为阳性,对应检测rpsL基因(128:A),ΔRn(normalized reporter)>3000000;所有鼠疫菌株亚磷酰胺(VIC)探针检测结果均为阴性,对应检测rpsL基因(128:G),ΔRn<100000。结论建议甘肃省喜马拉雅旱獭疫源地动物鼠疫持续流行的鼠疫监测点实验室进行鼠疫菌耐药性监测,及时发现本地鼠疫菌rpsL基因特征,为突发人间鼠疫诊疗提供依据。 展开更多
关键词 鼠疫菌 rpsl基因 TaqMan-MGB 检测
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PCR-SSCP法检测结核分枝杆菌L型rpsL耐药基因 被引量:1
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作者 陆军 叶松 金强 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期107-108,共2页
目的探索尘肺结核患者感染的结核分枝杆菌(MT)L型的耐药基因rpsL突变与耐受链霉素(SM)的关系。方法用PCR-SSCP方法检测rpsL基因,与采用常规SM药敏试验(AST法)的结果进行对比分析。结果采用AST法检测,52株结核分枝杆菌L型临床分离株中共... 目的探索尘肺结核患者感染的结核分枝杆菌(MT)L型的耐药基因rpsL突变与耐受链霉素(SM)的关系。方法用PCR-SSCP方法检测rpsL基因,与采用常规SM药敏试验(AST法)的结果进行对比分析。结果采用AST法检测,52株结核分枝杆菌L型临床分离株中共有26株(50.0%)耐SM;PCR-SSCP法检出rpsL基因突变率为40.4%(21/52),2种方法检测耐药株的符合率为80.8%。结论结核杆菌L型对SM的耐药与rpsL基因突变有关。 展开更多
关键词 尘肺 结核分枝杆菌L型 耐药 rpsl基因 聚合酶链反应-单链构象多态性分析
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荧光显微观测Rpsl基因突变DNA分子探针杂交研究 被引量:1
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作者 陈庆海 匡红 +3 位作者 府伟灵 华兴 边志衡 向阳 《西部医学》 2009年第2期178-181,共4页
目的选择结核杆菌耐链霉素(Sm)Rpsl基因包含88codon突变位点的序列设计分子信标,建立扩增体系及分子信标芯片检测方法。方法运用软件:Beacon designer设计Rpsl基因包含88codon突变位点的分子信标及及其单侧延长臂分子信标,建立其扩增体... 目的选择结核杆菌耐链霉素(Sm)Rpsl基因包含88codon突变位点的序列设计分子信标,建立扩增体系及分子信标芯片检测方法。方法运用软件:Beacon designer设计Rpsl基因包含88codon突变位点的分子信标及及其单侧延长臂分子信标,建立其扩增体系及分子信标芯片检测方法,应用荧光显微镜观测荧光信号。结果通过荧光显微镜观测到标准株及耐SM株PCR产物与分子信标杂交后荧光信号区别明显;51株耐链霉素(SM)与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,P(0.05和P(0.01的耐SM组Rpsl基因88codon突变检出率为61%。结论分子信标技术是一种具有高灵敏核酸点突变检测技术。单侧延长臂分子信标对解决分子信标在芯片表面固定难题提供了一种有效方法,采用荧光显微镜观测荧光信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。 展开更多
关键词 分子信标 耐链霉素rpsl基因 荧光显微镜
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结核分支杆菌rpsL基因突变的快速检测 被引量:2
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作者 宋艳斌 马文丽 郑文岭 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期469-470,共2页
目的 建立快速检测结核分支杆菌rpsL基因突变的方法。方法 用聚合酶链反应(PCR)直接从结核分支杆菌基因组扩增rpsL基因,并直接进行测序鉴定。结果 用引物P1,P2 扩增H3 7RvDNA获得约4 6 0bp片段,经序列测定后,显示与GeneBank中公布的... 目的 建立快速检测结核分支杆菌rpsL基因突变的方法。方法 用聚合酶链反应(PCR)直接从结核分支杆菌基因组扩增rpsL基因,并直接进行测序鉴定。结果 用引物P1,P2 扩增H3 7RvDNA获得约4 6 0bp片段,经序列测定后,显示与GeneBank中公布的序列一致(同源性99% )。2 8株结核分支杆菌耐SM分离株中,2 0株rpsL基因突变位于4 3位密码子,另8株分离株未出现rpsL基因突变。结论 rpsL基因突变是SM耐药性的重要分子机制,本研究为进一步研究链霉素作用方式和耐药机制提供了有力手段。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 rpsl基因 基因突变 快速检测 基因测序
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武汉地区结核分枝杆菌链霉素耐药分离株rpsL基因分子特征研究 被引量:1
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作者 芦莲 陈高瞻 +5 位作者 黄小琴 雷航 胡申才 李睿 刘志国 余晓丽 《武汉轻工大学学报》 CAS 2014年第3期23-26,共4页
探讨武汉地区结核分枝杆菌链霉素(SM)耐药临床分离株rpsL基因分子特征。收集71株临床分离株,采用刃天青法测定临床分离株对SM的最低抑菌浓度(MIC),同时用直接测序法分析rpsL基因的突变情况;用RD105基因缺失检测法鉴定71株临床分离株中&q... 探讨武汉地区结核分枝杆菌链霉素(SM)耐药临床分离株rpsL基因分子特征。收集71株临床分离株,采用刃天青法测定临床分离株对SM的最低抑菌浓度(MIC),同时用直接测序法分析rpsL基因的突变情况;用RD105基因缺失检测法鉴定71株临床分离株中"北京基因型"菌株。结果显示20株SM敏感株rpsL基因未发现突变(MICs<0.25 mg/L);51株SM耐药株中,35株(68.6%)检测到rpsL基因突变,主要发生在第43位和88位密码子,MIC1 mg/L的SM耐药株(低水平耐药株)总突变率低于MIC2mg/L(高水平耐药株);北京基因型与耐药株的相关性不大。研究表明SM耐药菌株rpsL基因突变类型存在地域差异;rpsL突变与SM高水平耐药的相关性在本研究中关联度不大;"北京基因型"菌株在武汉地区呈流行趋势。 展开更多
关键词 武汉地区 结核分枝杆菌 rpsl基因 耐药
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