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重组RPLP0蛋白的表达、鉴定及评价 被引量：1
1
作者 卢小岚 王强 +6 位作者 杜琴 梁骑 罗文依 王舒琪 张国元 刘剑平 王东生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期1857-1861,共5页
目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质... 目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价。方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6*His融合基因表达载体;对该质粒载体进行酶切鉴定和测序验证,将鉴定正确的重组质粒载体转化至大肠杆菌并以IPTG诱导表达;经过尿素溶液纯化及复性以后得到复性的重组RPLP0蛋白;采用Western blot分析重组RPLP0蛋白的免疫原性;采用ELISA法对其抗体结合性、特异性进行分析。结果:酶切及测序结果显示,本实验成功克隆出重组RPLP0蛋白基因,将获得的目的基因构建至原核表达载体pET41a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示重组RPLP0蛋白为包涵体表达蛋白,分子量约为61 kD。Western blot检测显示重组RPLP0蛋白具有完全的免疫原性;ELISA检测显示重组RPLP0蛋白具有良好的抗体结合性和特异性。结论:表达、鉴定并分析了重组RPLP0蛋白,为深入研究RPLP0蛋白的功能及应用奠定基础。 展开更多
关键词 rplp0 重组质粒 重组蛋白 蛋白表达
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DLE和SLE患者血清中抗RPLP0抗体水平及临床意义
2
作者 杜艳瑜 谭国珍 +1 位作者 叶瑞心 陈娇霞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第16期2588-2591,共4页
目的:了解盘状红斑狼疮(DLE)和系统性红斑狼疮(SLE)抗RPLP0抗体的表达水平,分析其与各临床表现和实验室指标的关系。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗RPLP0抗体;直接免疫荧光(DIF)检测皮损部位的免疫复合物;常规方法检测自身抗体及补... 目的:了解盘状红斑狼疮(DLE)和系统性红斑狼疮(SLE)抗RPLP0抗体的表达水平,分析其与各临床表现和实验室指标的关系。方法:酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗RPLP0抗体;直接免疫荧光(DIF)检测皮损部位的免疫复合物;常规方法检测自身抗体及补体。结果:健康对照组、DLE组、SLE组的抗RPLP0-IgG抗体的吸光度(A.U.)均值分别为:0.72±0.16,0.53±0.18和1.23±0.62。DLE组患者的抗RPLP0-IgG抗体与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而SLE组高于DLE组和健康对照组(P<0.05)。SLE血清抗RPLP0抗体高水平组患者的关节炎、肾脏损害和特征性皮损的频率高于抗RPLP0抗体低水平组(P<0.05),而抗RPLP0抗体水平与其他临床表现、SLEDAI、CLASI评分无相关性(P>0.05)。结论:DLE患者与健康人血清抗RPLP0抗体水平无差异,SLE患者血清抗RPLP0抗体水平高于DLE患者,且与关节损害、肾损害及特征性皮损相关。 展开更多
关键词 盘状红斑狼疮 系统性红斑狼疮 皮肤损害 抗rplp0抗体
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核糖体蛋白基因RPLP0对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的调控作用
3
作者 郑晓燕 朱化超 《山西医科大学学报》 CAS 2022年第1期32-39,共8页
目的研究核糖体蛋白侧柄亚单位P0(ribosomal protein lateral stalk subunit P0,RPLP0)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和凋亡的调控作用。方法用qRT-PCR和Western blot检测健康者(n=15)和AML患者(n=30)骨髓标本、AML细胞系(THP-1)及PBM... 目的研究核糖体蛋白侧柄亚单位P0(ribosomal protein lateral stalk subunit P0,RPLP0)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和凋亡的调控作用。方法用qRT-PCR和Western blot检测健康者(n=15)和AML患者(n=30)骨髓标本、AML细胞系(THP-1)及PBMC细胞中RPLP0的表达。用Lipofectamine 2000分别将RPLP0的短发夹RNA(shRNA-RPLP0组)、shRNA阴性对照(shRNA-NC组)、过表达RPLP0的质粒(pcDNA3.1-RPLP0组)以及对照质粒(pcDNA3.1-NC组)转染到THP-1细胞中,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot检测细胞中p53、PTEN、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT的表达。结果与健康者相比,AML患者骨髓中RPLP0的mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.001)。与PBMC相比,THP-1细胞中RPLP0的mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.001)。与shRNA-NC组相比,shRNA-RPLP0组的相对细胞活力降低(P<0.001),而细胞凋亡率升高(P<0.001)。与shRNA-NC组相比,shRNA-RPLP0组的p53和PTEN蛋白表达量显著升高,而p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与pcDNA3.1-NC组相比,pcDNA3.1-RPLP0组相对细胞活力升高(P<0.05),p53和PTEN蛋白表达量降低(P<0.05),p-PI3K和p-AKT蛋白表达量升高(P<0.05)。结论下调RPLP0的表达可抑制AML细胞的增殖并诱导凋亡,RPLP0对AML细胞增殖和凋亡的影响是通过p53-PTEN-PI3K-AKT轴介导的。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 rplp0 细胞增殖 细胞凋亡 p53-PTEN-PI3K-AKT轴
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长链非编码RNA RPLP0P2在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖的影响研究 被引量：1
4
作者 张海强 陆蓉丹 +1 位作者 杨允奔 谭麟 《浙江医学》 CAS 2018年第24期2657-2660,共4页
目的探讨长链非编码RNA RPLP0P2在胃癌组织中的表达,及其对胃癌细胞增殖的影响。方法选取行手术切除治疗的胃癌患者56例,留取术中切除的胃癌组织与配对的癌旁正常组织,采用qRT-PCR法检测胃癌组织与癌旁正常组织RPLP0P2表达水平,并比较... 目的探讨长链非编码RNA RPLP0P2在胃癌组织中的表达,及其对胃癌细胞增殖的影响。方法选取行手术切除治疗的胃癌患者56例,留取术中切除的胃癌组织与配对的癌旁正常组织,采用qRT-PCR法检测胃癌组织与癌旁正常组织RPLP0P2表达水平,并比较不同临床病理特征的胃癌患者胃癌组织RPLP0P2表达水平。采用转染小干扰RNA RPLP0P2(si-RPLP0P2)的方法敲除RPLP0P2,比较转染si-RPLP0P2与转染si-NC的胃癌BGC-823、SGC-7901细胞与正常胃上皮GES-1细胞增殖情况。结果除Borrmann分型、肿瘤大小以及是否有神经侵犯外,不同临床病理特征的胃癌患者胃癌组织RPLP0P2表达水平比较均无统计学差异(均P>0.05)。即胃癌患者胃癌组织RPLP0P2表达水平不受患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤直径、肿瘤分化程度、TNM分期、Lauren分型、癌胚抗原、糖类抗原19-9等影响。与转染si-NC相比,转染si-RPLP0P2的胃癌BGC-823、SGC-7901细胞与正常胃上皮GES-1细胞增殖受抑制,即下调RPLP0P2会抑制细胞增殖。结论 RPLP0P2在胃癌组织中表达上调,下调RPLP0P2可抑制胃癌细胞增殖。RPLP0P2或可成为胃癌的生物标志物与潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 胃癌 长链非编码RNA rplp0P2 肿瘤标志物
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