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外泌体传递lncRNA RPL23AP82促进胰腺导管腺癌吉西他滨耐药 被引量：1
1
作者 孙运鹏 吴欢欢 +3 位作者 庄磊 陈浩然 徐博 黄侠鸣 《武汉大学学报(医学版)》 2025年第7期850-856,905,共8页
目的:探究外泌体传递lncRNA RPL23AP82促进胰腺导管腺癌(PDAC)吉西他滨(GEM)耐药。方法:(1)构建lncRNA RPL23AP82过表达载体并转染至SW1990细胞中后用GEM进行干扰、分组,对比细胞增殖活性、细胞凋亡。(2)SW1990细胞系转染shRNA‑RPL23AP8... 目的:探究外泌体传递lncRNA RPL23AP82促进胰腺导管腺癌(PDAC)吉西他滨(GEM)耐药。方法:(1)构建lncRNA RPL23AP82过表达载体并转染至SW1990细胞中后用GEM进行干扰、分组,对比细胞增殖活性、细胞凋亡。(2)SW1990细胞系转染shRNA‑RPL23AP82并分组,对比miR‑129、PFTK1 mRNA与PFTK1蛋白表达;SW1990细胞系转染miR‑129 mimics或miR‑129 inhibitor,对比PFTK1 mRNA、PFTK1蛋白表达。(3)SW1990细胞系诱导构建GEM耐受型PDAC细胞(SW1990‑GR)并提取外泌体与亲本细胞孵育,分别根据加入GEM、转染sh‑NC或sh‑RPL23AP82、转染sh‑NC或外泌体抑制剂GW4869,对比lncRNA RPL23AP82表达、GEM敏感性变化、细胞凋亡、细胞增殖活性。结果:(1)对比LV‑NC组,LV‑RPL23AP82组RPL23AP82相对表达量、细胞增殖活性更高且细胞凋亡更低,LV‑NC+GEM组细胞增殖活性更低,LV‑RPL23AP82+GEM组细胞增殖活性低于LV‑RPL23AP82组(均P<0.05)。(2)sh‑RPL23AP82组中RPL23AP82相对表达量低于sh‑NC组,对比sh‑NC组,sh‑RPL23AP82组miR‑129表达升高且PFTK1 mRNA、PFTK1蛋白均下降(均P<0.05);对比NC mimics组,miR‑129 mimics组miR‑129表达升高且miR‑129 inhibitor组miR‑129表达降低,miR‑129 mimics组PFTK1 mRNA和PFTK1蛋白水平降低,而miR‑129 inhibitor组PFTK1 mRNA和PFTK1蛋白水平升高(均P<0.05)。(3)SW1990‑GR组lncRNA RPL23AP82表达、SW1990‑GR组细胞增殖活性升高,对比SW1990‑GR组,SW1990‑GR+GEM组细胞增殖活性下调且细胞凋亡升高,耐药细胞SW1990‑GR与GEM共干扰后细胞凋亡下降(均P<0.05);敲低RPL23AP82后细胞增殖活性下调;GW4869抑制外泌体分泌后GW4869降低,抑制细胞增殖活性;抑制剂GW4869处理细胞增殖活性下降,细胞凋亡上升(均P<0.05)。结论:外泌体上调lncRNA RPL23AP82可降低miR‑129表达并通过刺激PFTK1表达促进吉西他滨耐药。 展开更多
关键词 胰腺导管癌 细胞周期蛋白依赖性激酶14 长链非编码RNA rpl23AP82 微小非编码RNA‑129 细胞增殖 细胞凋亡 吉西他滨 耐药
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下调RPL23对胃癌耐药细胞SGC7901/ADR药物敏感性的影响 被引量：6
2
作者 于海燕 张志勇 +2 位作者 王凯 刘刚 张德新 《现代肿瘤医学》 CAS 2015年第10期1340-1343,共4页
目的:检测人胃癌细胞系SGC7901及其阿霉素(ADR)耐药细胞系SGC7901/ADR中RPL23的表达差异,探讨胃癌细胞中RPL23表达对ADR耐药的影响。方法:q PCR检测RPL23在SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞系中的表达差异;MTT法检测下调RPL23后SGC7901/AD... 目的:检测人胃癌细胞系SGC7901及其阿霉素(ADR)耐药细胞系SGC7901/ADR中RPL23的表达差异,探讨胃癌细胞中RPL23表达对ADR耐药的影响。方法:q PCR检测RPL23在SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞系中的表达差异;MTT法检测下调RPL23后SGC7901/ADR细胞对ADR的敏感性;流式细胞仪检测下调RPL23后对细胞凋亡的影响;Western Blot检测凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果:q PCR结果显示,RPL23在SGC7901/ADR细胞系中的表达高于其在SGC7901细胞系中的表达(P<0.001)。MTT法结果显示,下调RPL23后,在SGC7901/ADR细胞系中ADR的IC50明显升高(P<0.001)。凋亡检测结果显示,下调RPL23后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加(P<0.001)。Western Blot结果显示,下调RPL23后,细胞中Caspase-3表达明显升高,Bcl-2表达明显降低。结论:RPL23在SGC7901/ADR中的表达高于SGC7901细胞,下调RPL23表达可提高其对ADR的敏感性并促进细胞凋亡,提示RPL23可能通过作用于Bcl-2调节细胞凋亡。 展开更多
关键词 胃癌 rpl23 耐药
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RPL23编码基因的克隆及其正反义核酸转染胃癌细胞
3
作者 翟惠虹 时永全 +4 位作者 郭新宁 王新 兰梅 杨力 樊代明 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第16期1507-1510,共4页
目的　扩增人核糖体蛋白 L 2 3(RPL 2 3)编码基因序列 ,构建其正、反义真核表达载体 ,分别转染胃癌细胞SGC790 1及胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR,以进一步研究 RPL2 3基因与胃癌多药耐药的关系 .方法　按文献报道的 RPL 2 3核苷... 目的　扩增人核糖体蛋白 L 2 3(RPL 2 3)编码基因序列 ,构建其正、反义真核表达载体 ,分别转染胃癌细胞SGC790 1及胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR,以进一步研究 RPL2 3基因与胃癌多药耐药的关系 .方法　按文献报道的 RPL 2 3核苷酸序列设计合成 PCR引物 ,利用总 RNA抽取试剂盒从人胃癌长春新碱耐药细胞 SGC790 1 /VCR中提取细胞总 RNA,反转录合成 c DNA,再用 PCR方法扩增目的基因序列 .PCR产物经 DNA序列测定证实后 ,通过双酶切 ,将所获目的基因分别按正、反两个方向定向克隆入真核表达载体 pc DNA3.1 (+)中 ,酶切电泳鉴定 .采用脂质体介导的方法将 pc DNA3.1 (+) - RPL 2 3转染 SGC790 1细胞 ,pc DNA3.1(+) - an RPL2 3转染 SGC790 1 /VCR细胞 ,经 G41 8筛选后 ,随机挑选细胞克隆 .通过斑点杂交检测正、反义转染后 RPL2 3m RNA表达水平的变化 .结果　应用 RT- PCR反应扩增获得大小约 0 .5 kb的特异性片段 .经 DNA序列分析 ,证实与文献报道的人 RPL2 3编码区序列一致 .重组正义真核表达载体 pc DNA3.1 (+) - RPL2 3双酶切产生大小约 5.4kb,0 .5kb的片段 ;重组反义真核表达载体 pc DNA3.1 (+) - an RPL2 3双酶切产生大小约 5.4kb,0 .5kb的片段 ,均与预期结果相符 .转染细胞经筛选后 ,随机挑选 。 展开更多
关键词 rpl23编码基因 反义核酸转染 基因克隆 聚合酶链反应 胃癌细胞
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中国荷斯坦牛RPL23A和ACACB基因对产奶性状的遗传效应分析 被引量：1
4
作者 杨宇泽 黄金峰 +7 位作者 唐韶青 刘林 刘亚楠 彭朋 吕小青 韩博 赵春颖 孙东晓 《中国牛业科学》 2022年第5期4-8,共5页
作者所在团队前期通过奶牛乳腺上皮组织转录组测序及荷斯坦公牛全基因组重测序研究发现RPL23A和ACACB基因是奶牛乳蛋白和乳脂性状的候选功能基因,[目的]本研究旨在探究这两个基因是否对奶牛产奶性状具有显著遗传效应。[方法]以北京地区... 作者所在团队前期通过奶牛乳腺上皮组织转录组测序及荷斯坦公牛全基因组重测序研究发现RPL23A和ACACB基因是奶牛乳蛋白和乳脂性状的候选功能基因,[目的]本研究旨在探究这两个基因是否对奶牛产奶性状具有显著遗传效应。[方法]以北京地区7个牧场的1 059头中国荷斯坦母牛为试验群体,采集尾根静脉血并提取基因组DNA,通过飞行时间质谱方法检测SNP位点基因型,利用SAS 9.4软件的MIXED过程进行关联分析。[结果]结果表明,RPL23A基因的SNP位点g.20146771C>T与第1泌乳期5个产奶性状达到显著或极显著关联(P=0.000 1~0.041 6),其优势等位基因为T;ACACB基因的g.63878254T>C位点与第1泌乳期产奶量、乳脂量和乳蛋白量呈极显著关联(P<0.01),其优势等位基因为C;g.63962768G>A位点与第1泌乳期产奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白率关联显著或极显著(P=0.000 1~0.039 1),其优势等位基因为A。[结论]综上,RPL23A基因主要影响中国荷斯坦牛产奶量和乳蛋白,ACACB基因对产奶量和乳脂具有显著遗传效应,3个SNP位点可考虑作为遗传标记用于标记辅助选择培育奶牛高乳蛋白乳脂新品系和选育提高。 展开更多
关键词 产奶性状 rpl23A基因 ACACB基因 SNP 遗传效应 中国荷斯坦牛
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RPL23-siRNA干扰片段的构建及筛选 被引量：1
5
作者 彭文苗 张志敏 +4 位作者 胡萌 余丽芳 章必成 饶智国 秦传蓉 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2016年第6期487-491,共5页
目的构建并筛选RPL23-siRNA干扰片段,为RPL23在胃癌防治中作用的研究提供基础。方法利用RNA干扰技术选择3条靶序列,通过脂质体转染化学合成的RPL23-siRNA干扰片段,用Real-time PCR及Western blot方法鉴定RPL23-siRNA对胃癌MKN45细胞中RP... 目的构建并筛选RPL23-siRNA干扰片段,为RPL23在胃癌防治中作用的研究提供基础。方法利用RNA干扰技术选择3条靶序列,通过脂质体转染化学合成的RPL23-siRNA干扰片段,用Real-time PCR及Western blot方法鉴定RPL23-siRNA对胃癌MKN45细胞中RPL23的干扰效率。结果实验分为5组,与Normal cell组、RPL23 control组相比,筛选出的3个RPL23-siRNA片段转染后,细胞中RPL23 mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.01),多重比较发现,RPL23-siRNA1组干扰效率明显高于RPL23-siRNA2、RPL23-siRNA3组(P<0.01)。结论成功构建并筛选出RPL23-siRNA干扰片段,为后续研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 核糖体蛋白L23 小干扰RNA RNA干扰
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