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鸡毒害艾美耳球虫ROP30蛋白的原核表达及其对鸡免疫保护效果的观察
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作者 李慧中 张弛 +6 位作者 严丹丽 宋鹏慧 汪飞燕 冯茜茜 刘丹丹 许金俊 陶建平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1419-1430,共12页
旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP3... 旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP30表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3),重组菌经测序鉴定后诱导表达,并纯化重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗rEnROP30的多克隆抗体。利用多克隆抗体,分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测子孢子(S Z)和MZ-2中的天然EnROP30蛋白及其定位。最后,应用荧光定量PCR分析En ROP 30基因在SZ和MZ-2中的转录水平。用重组蛋白按高剂量(200μg·羽-1)、中剂量(100μg·羽-1)和低剂量(50μg·羽-1)免疫雏鸡,同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照,以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标,评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示:该基因全长1605 bp,编码534个氨基酸,推导相对分子质量为55.55 ku;重组蛋白大小约为65 ku,以可溶形式存在,能被小鼠抗His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别;在S Z和MZ-2中均检测到天然EnROP30蛋白,其分子质量大约为62 ku;EnROP30蛋白定位在S Z和MZ-2的顶端;MZ-2中En ROP 30转录水平显著高于S Z(P<0.05)。各试验组的成活率均为100%;免疫组的平均增重增加,病变记分显著降低(P<0.05);中剂量组的相对增重率(92.96%)、卵囊减少率(66.87%)和ACI值(158.96)均为最高。综上:成功克隆表达了En ROP 30基因,重组蛋白rEnROP30对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护力。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 En rop 30 克隆 表达 免疫保护力
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弓形虫ME49株ROP8基因的原核表达优化及功能研究 被引量:1
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作者 余一然 姚余有 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期110-115,共6页
为了明确假激酶ROP8在弓形虫抵抗宿主免疫中的作用,我们成功构建弓形虫ROP8原核表达体系并研究了多克隆抗体对弓形虫增殖的影响。根据基因分析结果,在ME49虫株中获得ROP8-C的369 bp的截短片段并克隆入pET28a载体中。将此质粒转化入BL21(... 为了明确假激酶ROP8在弓形虫抵抗宿主免疫中的作用,我们成功构建弓形虫ROP8原核表达体系并研究了多克隆抗体对弓形虫增殖的影响。根据基因分析结果,在ME49虫株中获得ROP8-C的369 bp的截短片段并克隆入pET28a载体中。将此质粒转化入BL21(DE3)感受态大肠杆菌IPTG,诱导并筛选诱导条件,用纯化后的蛋白免疫新西兰兔后获得多克隆抗体。Western blot显示弓形虫裂解蛋白产生了两个条带,表明以ME49虫株为总DNA模板,成功扩增出369 bp的ROP8截短基因,构建出pET28a-ROP8质粒,经过测序和比对后与基因文库中的蛋白序列完全相同。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物显示,在20 kDa有特异性条带且在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达6 h时表达量最高。弓形虫增殖实验结果显示,该多克隆抗体能够抑制弓形虫的增殖,可为研究ROP8在弓形虫增殖过程中的作用及其机制奠定基础,并为其作为疫苗候选分子提供新线索。 展开更多
关键词 弓形虫 假激酶 rop8 多克隆抗体
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弓形虫TR与ROP5双基因缺失株的构建及其生物学功能研究
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作者 耿小玲 李瑞芳 +7 位作者 徐卫兵 杜晶莹 张曼玉 孙卿 蒋蔚 米荣升 陈兆国 王权 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3408-3422,共15页
为了探究弓形虫TR与ROP5在抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了TR与ROP5双基因缺失株(TR-ROP5-KO)弓形虫。通过体外增殖、入侵及小鼠体内毒力试验发现,与RH株、TR基因缺失株(TR-KO)及ROP5基因缺失株(R... 为了探究弓形虫TR与ROP5在抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了TR与ROP5双基因缺失株(TR-ROP5-KO)弓形虫。通过体外增殖、入侵及小鼠体内毒力试验发现,与RH株、TR基因缺失株(TR-KO)及ROP5基因缺失株(ROP5-KO)相比,TR-ROP5-KO株在体外细胞中入侵、增殖能力及小鼠体内毒力作用减弱,表明弓形虫TR与ROP5基因双缺失不仅导致虫体在体外细胞中的生存活力减弱,还降低对宿主的毒力作用;通过检测TR/ROP5基因缺失株的氧化应激水平以及感染RAW264.7细胞的活性氧(ROS)水平发现,TR-ROP5-KO株引发的氧化应激水平虽然显著高于RH株(P<0.05),但与TR-KO株无显著差异(P>0.05);利用RT-qPCR检测TR/ROP5基因缺失株感染RAW264.7细胞的NF-κB、IL-12、IFN-γmRNA水平和ELISA检测小鼠血清中IL-12的水平发现,TR-ROP5-KO株感染组虽显著高于RH株感染组(P<0.05),但却未显著高于TR-KO株感染组(P>0.05),表明弓形虫的TR与ROP5在抗宿主ROS损伤中不存在协同作用。本研究构建TR与ROP5的双基因缺失株的方法探究两者在抗宿主ROS损伤中并无协同作用,为后续解析弓形虫多个基因功能的研究提供了方法依据,为弓形虫免疫逃避机制的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 CRISPR/Cas9 TR rop5 ROS
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弓形虫RH株ROP16 I蛋白通过JAK-STAT3途径对MH-S细胞增殖及细胞周期影响的研究
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作者 李佳铭 党甜甜 +1 位作者 殷荷 赵志军 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期113-120,共8页
目的 探究I型弓形虫RH株ROP16蛋白对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞增殖及细胞周期的影响和机制。方法 将ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达ROP16 I的过表达细胞株。RT-qPCR和Western-blot验证过表达效果,cck-... 目的 探究I型弓形虫RH株ROP16蛋白对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞增殖及细胞周期的影响和机制。方法 将ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达ROP16 I的过表达细胞株。RT-qPCR和Western-blot验证过表达效果,cck-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期变化。Western-blot及RT-qPCR检测p53、p21、CDK6、Cyclin D1、STAT3、p-STAT3(Y705)及JAK1蛋白或基因的表达水平,免疫荧光检测ROP16 I与p-STAT3(Y705)在MH-S细胞中的亚细胞共定位。结果 ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后可检测到ROP16 I蛋白及基因表达。cck-8检测发现ROP16 I可促进MH-S细胞增殖(P<0.01),提升细胞活力。流式细胞术检测发现ROP16 I过表达可使MH-S细胞细胞周期G0/G1期降低,G2期、S期升高。相较于MH-S细胞组、MH-S-vector组,MH-S-ROP16细胞组p53及p21蛋白表达降低,CDK6、Cyclin D1、p-STAT3(Y705)及JAK1蛋白表达升高,p53及p21 mRNA表达降低,CDK6及Cyclin D1 mRNA表达升高(均P<0.01)。免疫荧光检测发现ROP16 I与p-STAT3(Y705)共同定位于细胞核及其周围细胞质中。结论 I型弓形虫RH株ROP16蛋白可激活JAK-STAT3途径,诱导细胞周期G0/G1期缩短,G2/S期延长,促进细胞增殖,为揭示弓形虫的免疫逃避机制提供了理论依据,为弓形虫肺炎防治研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 rop16蛋白 MH-S细胞 细胞周期 STAT3 p-STAT3(Y705)
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基于Radioss的某平地机驾驶室ROPS和FOPS仿真及优化
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作者 王亮 李远辉 +1 位作者 覃康 潘智威 《建设机械技术与管理》 2025年第1期70-71,80,共3页
以某平地机驾驶室为研究对象,通过在Hypermesh的Radioss应用模块下,建立驾驶室的翻滚仿真模型和坠物冲击驾驶室顶部仿真模型,采用非线性的有限元分析方法对驾驶进行仿真风险识别[1],提取对驾驶室在侧向、垂向、纵向加载后的抵抗反力和... 以某平地机驾驶室为研究对象,通过在Hypermesh的Radioss应用模块下,建立驾驶室的翻滚仿真模型和坠物冲击驾驶室顶部仿真模型,采用非线性的有限元分析方法对驾驶进行仿真风险识别[1],提取对驾驶室在侧向、垂向、纵向加载后的抵抗反力和能量吸收值,以及落物击打驾驶室顶部产生形变[2]。仿真结果表明:初始方案ROPS满足要求,但是顶部被落物击穿,FOPS不合格。经过结构优化改进,优化方案保证了驾驶员的生存空间边界未被侵入,满足国标要求。 展开更多
关键词 平地机 驾驶室 ropS FOPS
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基于Return-Oriented Programming的程序攻击与防护 被引量:6
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作者 黄志军 郑滔 《计算机科学》 CSCD 北大核心 2012年第B06期1-5,23,共6页
随着W⊕X等技术的引入,传统的代码注入攻击几乎被消除,return-to-lib攻击受到很大程度的抑制。在此背景下,Hovav Shacham提出了Return-Oriented Programming(ROP)的思想,该思想基于栈溢出的原理,通过使用程序库中有效的以ret指令结尾的... 随着W⊕X等技术的引入,传统的代码注入攻击几乎被消除,return-to-lib攻击受到很大程度的抑制。在此背景下,Hovav Shacham提出了Return-Oriented Programming(ROP)的思想,该思想基于栈溢出的原理,通过使用程序库中有效的以ret指令结尾的短指令序列构建gadget集合,使之具有图灵完备特性,来完成计算和攻击。讲述ROP思想自提出以来的一些研究成果和其实际的攻击能力,阐述ROP自动化的当前成果与未来可能的发展方向,进而分析和预测ROP自动化的下一步的研究方向。同时,也将从ROP的几个特征分析消除这种攻击的策略和方法,并介绍目前已有的防护思想和成果,论述这些方法的优缺点和改进方向。综合阐述ROP攻击与ROP防护这一矛与盾的问题,力争使读者理解ROP的思想,知悉当前的发展状态,并在此基础上能够进一步推进ROP攻击及其防范的研究。 展开更多
关键词 rop 程序自动化 地址随机化 栈溢出 程序控制流 程序安全
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一种有效的Return-Oriented-Programming攻击检测方法 被引量:1
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作者 刘智 张小松 吴跃 《小型微型计算机系统》 CSCD 北大核心 2013年第7期1625-1630,共6页
Returned-Oriented-Programming(ROP)攻击能突破传统防御机制如DEP和W⊕X.目前ROP攻击检测误报率较高,无法准确区分ROP攻击与正常指令执行.ROP攻击需执行系统调用完成攻击,执行系统调用前寄存器须设置为正确的值,并且每条x86指令对应一... Returned-Oriented-Programming(ROP)攻击能突破传统防御机制如DEP和W⊕X.目前ROP攻击检测误报率较高,无法准确区分ROP攻击与正常指令执行.ROP攻击需执行系统调用完成攻击,执行系统调用前寄存器须设置为正确的值,并且每条x86指令对应一个或多个gadget.基于上述特点,提出一种有效的二进制代码级ROP攻击检测方法:截获返回指令并作为起始点计算gadget数目,并在系统调用执行前判断寄存器是否被修改为与其参数类型相同的值.该方法不依赖启发式学习,能准确检测栈溢出的ROP攻击.通过动态插桩工具实现原型系统,对ROP攻击和正常程序进行了测试,实验结果表明系统漏报率和误报率较低,且性能损失较小. 展开更多
关键词 rop GADGET 系统调用 动态插桩
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弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ蛋白激活STAT3磷酸化调节THP-1细胞周期、增殖及凋亡 被引量:1
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作者 殷荷 马磊 +4 位作者 党甜甜 李佳铭 田婷婷 马珊妮 赵志军 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期1115-1121,1127,共8页
目的探讨弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ蛋白通过激活STAT3磷酸化对THP-1细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法将ROP16空载体及重组慢病毒过表达载体分别转染至THP-1细胞,观察细胞荧光表达强度并验证过表达效果;通过Western blotting检测过表达ROP16Ⅰ/... 目的探讨弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ蛋白通过激活STAT3磷酸化对THP-1细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法将ROP16空载体及重组慢病毒过表达载体分别转染至THP-1细胞,观察细胞荧光表达强度并验证过表达效果;通过Western blotting检测过表达ROP16Ⅰ/Ⅲ的THP-1细胞中STAT3及P-STAT3蛋白的表达;利用STAT3磷酸化抑制剂-Stattic干预细胞,分为THP-1组、THP-1+Stattic组、THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ组及THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ+Stattic组;通过流式细胞术和CCK-8法检测各组细胞周期、增殖曲线以及凋亡率的改变;Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Cleaved Caspase3、Caspase9及Bcl-2蛋白表达水平。结果ROP16重组慢病毒过表达载体转染THP-1细胞后观察到强荧光信号,ROP16 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(FmRNA=314.1,F蛋白=758.7,均P<0.001),表明细胞稳转株构建成功,且THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ组细胞中P-STAT3蛋白的表达水平较THP-1组升高(F=606.1,P<0.001)。流式细胞术和CCK-8结果显示,与THP-1组比较,THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ组细胞周期被阻滞在G1期,细胞增殖能力降低(tⅠ组=19.2,tⅢ组=24.0,均P<0.01)、凋亡率增加(tⅠ组=175.1,tⅢ组=205.2,均P<0.001)。Western blotting结果显示,与THP-1组比较,THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ组细胞内促凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspases3、Caspase9的表达均显著升高(tBaxⅠ组=15.8,tBaxⅢ组=11.1,tCaspase9Ⅰ组=9.1,tCaspase9Ⅲ组=10.2,tCleaved Caspase3Ⅰ组=16.5,tCleaved Caspase3Ⅲ组=12.9,均P<0.001),抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低(tⅠ组=18.4,tⅢ组=26.2,均P<0.001)。但在Stattic干预后,THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ+Stattic组细胞周期、增殖能力、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达均恢复至接近原水平。结论弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ蛋白通过激活STAT3磷酸化进而将THP-1细胞周期阻滞在G1期、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 rop16蛋白 THP-1细胞 细胞周期 细胞增殖 细胞凋亡
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辣椒小G蛋白CaROP的生物信息学分析
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作者 马思洁 朱天生 +1 位作者 何璐 杨叔青 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期165-175,共11页
【目的】研究辣椒内小G蛋白CaROP的生物学功能、蛋白理化性质、蛋白结构及系统发育关系。【方法】运用ProtParam、ProtScale、SignalP5.0、TMHMM、NetPhos3.1和NetCGlyc1.0等生物信息学软件分析9个CaROP蛋白的蛋白理化特性;运用SOPMA和S... 【目的】研究辣椒内小G蛋白CaROP的生物学功能、蛋白理化性质、蛋白结构及系统发育关系。【方法】运用ProtParam、ProtScale、SignalP5.0、TMHMM、NetPhos3.1和NetCGlyc1.0等生物信息学软件分析9个CaROP蛋白的蛋白理化特性;运用SOPMA和SWISS-MODEL等生物信息学软件预测分析9个CaROP蛋白的结构;运用生物信息学软件MEGA11分析9个CaROP蛋白的系统发育关系。【结果】9个CaROP蛋白的亲水性总平均值均小于0,均为亲水蛋白,其中6个为稳定的亲水蛋白;9个CaROP蛋白均无信号肽,即均为非分泌性蛋白;9个CaROP蛋白无跨膜结构域,即均非膜蛋白;9个CaROP蛋白均存在磷酸化位点,均无糖基化位点。9个CaROP蛋白的主要二级结构原件为无规则卷曲和α-螺旋,其次是β-折叠,最后是β-转角。9个CaROP蛋白聚为4个分支,其中分支Ⅰ和分支Ⅲ各包括1个CaROP蛋白。分支Ⅱ包括2个CaROP蛋白,其余5个CaROP蛋白均聚于分支Ⅳ中。【结论】9个CaROP蛋白具有完整的Rho功能域,均为非分泌性亲水蛋白。9个CaROP蛋白在系统进化树中共聚为了4个分支,其三级结构建模的预测结果也均较为理想,9个CaROP蛋白结构较稳定。 展开更多
关键词 辣椒 小G蛋白rop 蛋白理化特性 蛋白结构 系统发育关系
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A systematic review of machine learning modeling processes and applications in ROP prediction in the past decade 被引量:1
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作者 Qian Li Jun-Ping Li Lan-Lan Xie 《Petroleum Science》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第5期3496-3516,共21页
Fossil fuels are undoubtedly important, and drilling technology plays an important role in realizing fossil fuel exploration;therefore, the prediction and evaluation of drilling efficiency is a key research goal in th... Fossil fuels are undoubtedly important, and drilling technology plays an important role in realizing fossil fuel exploration;therefore, the prediction and evaluation of drilling efficiency is a key research goal in the industry. Limited by the unknown geological environment and complex operating procedures, the prediction and evaluation of drilling efficiency were very difficult before the introduction of machine learning algorithms. This review statistically analyses rate of penetration(ROP) prediction models established based on machine learning algorithms;establishes an overall framework including data collection, data preprocessing, model establishment, and accuracy evaluation;and compares the effectiveness of different algorithms in each link of the process. This review also compares the prediction accuracy of different machine learning models and traditional models commonly used in this field and demonstrates that machine learning models are the most effective technical means in current ROP prediction modeling. 展开更多
关键词 DRILLING Rate of penetration(rop)prediction Machine learning Accuracy evaluation
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弓形虫MIC1、MIC6和ROP18混合蛋白对小鼠的免疫保护作用
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作者 李虎 朱进进 +2 位作者 李婧旸 韩成建 余莉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期34-41,共8页
为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用,我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合,并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠血... 为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用,我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合,并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠血清特异性抗体,以及免疫蛋白刺激后脾细胞培养上清中各细胞因子的水平,通过脾淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞增殖情况。最后一次免疫后,用弓形虫WH3强毒株攻击,观察并记录小鼠的存活情况。结果表明,与对照PBS组相比,蛋白免疫组产生高滴度的IgG和IgG亚型(IgG1和IgG2a)抗体,滴度可高达1∶128000。细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平不同程度地升高,并且重组蛋白能够诱导淋巴细胞特异性增殖。免疫组小鼠的生存时间较对照组有所延长,其中MIC6-ROP18组延长时间最长(P<0.01)。MIC1、MIC6和ROP18组成的重组疫苗能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,其中MIC6-ROP18蛋白组合的免疫保护效果更为明显,但仍需进一步改进。本研究为弓形虫疫苗的研发提供了思路。 展开更多
关键词 弓形虫疫苗 重组蛋白 MIC1 MIC6 rop18
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弓形虫ROP16蛋白与NKRF互作对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡和周期的影响
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作者 周毓宁 赵志军 +4 位作者 李光琪 李佳铭 党甜甜 林永仙 于欣 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期982-992,共11页
为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP1... 为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16的表达进行验证。利用免疫共沉淀与液相色谱-质谱联用技术获取同ROP16可能发生互作的蛋白,并利用Venn图、Score分值、Intensity分值筛选出评分较高的互作蛋白NKRF进行验证。设计并合成NKRF-siRNA,分别转染至过表达Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16细胞,并利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,利用RT-qPCR和Western-blot分别对凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白的m RNA和蛋白表达水平进行检测。此次试验成功构建了Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16过表达A549稳转细胞株。利用IP-MS及CO-IP技术筛选并验证ROP16互作蛋白NKRF。筛选并构建NKRF沉默的过表达各型ROP16蛋白A549细胞。在过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16的A549细胞中,促凋亡蛋白Bax表达水平上调,抑凋亡蛋白BCL-2、Caspase-9、p53表达水平明显下调;细胞周期抑制蛋白p21表达明显上调,而G1/S期相关蛋白CDK6和CyclinD1蛋白表达明显下调,提示Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白会引起细胞凋亡和周期停滞,而在沉默NKRF组中,过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的A549细胞中Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的促凋亡作用减弱,细胞周期无明显停滞,与Ⅱ型ROP16蛋白之间没有统计学差异。综上所述得出弓形虫Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白通过与NKRF互作,诱导A549细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制A549细胞增殖。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 rop16蛋白 刚地弓形虫 NF-ΚB通路 NF-κB抑制因子
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ROP信号途径调控花粉管极性生长的分子机理研究进展
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作者 毕泽楷 亓正聿 +1 位作者 金梦 李恩 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第22期7546-7555,共10页
细胞的极性生长可以作用于植物生长发育等一系列生物活动。其中花粉管的极性生长在被子植物有性生殖过程中发挥重要的作用。多种信号通路协同调控花粉管的极性生长,ROP (Rho-related GTPases of plants)所介导的信号途径是花粉管极性生... 细胞的极性生长可以作用于植物生长发育等一系列生物活动。其中花粉管的极性生长在被子植物有性生殖过程中发挥重要的作用。多种信号通路协同调控花粉管的极性生长,ROP (Rho-related GTPases of plants)所介导的信号途径是花粉管极性生长调控网络中的主要参与者,也是植物其他细胞极性生长的关键调节因子。本研究将以拟南芥等植物的花粉管作为对象,对ROP信号途径进行简要叙述,旨在更全面地展现ROP在花粉管极性生长中的分子机制,为植物小G蛋白ROP的功能研究提供借鉴。 展开更多
关键词 花粉管 极性生长 rop
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不同基因型弓形虫ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响
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作者 李光琪 田梅 +3 位作者 周毓宁 马少寒 马珊妮 赵志军 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2024年第12期1674-1682,共9页
为探讨弓形虫Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制,本研究构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16慢病毒载体并转染至人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达3种不同基因型ROP16细胞株,培养细胞... 为探讨弓形虫Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制,本研究构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16慢病毒载体并转染至人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达3种不同基因型ROP16细胞株,培养细胞并提取全蛋白及总RNA,通过RT-qPCR及Western-blot检测Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase9(CAS9)、P53及细胞周期相关蛋白CDK6、P21、Cyclin D1在m RNA和蛋白水平表达量的影响,并进一步探究不同基因型ROP16对细胞STAT3磷酸化水平的影响。Western-blot及RT-qPCR检测结果显示,3种不同基因型慢病毒过表达载体转染BEAS-2B细胞后其ROP16 m RNA和蛋白均明显表达,提示细胞模型构建成功;针对细胞凋亡及细胞周期相关蛋白的检测结果显示,与空白对照组及阴性对照组相比3种基因型ROP16均可引起细胞凋亡相关蛋白BAX和BCL-2下调,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16可以引起CAS9及P53表达水平降低,且有统计学差异;Western-blot结果显示,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16均可引起细胞周期相关蛋白P21、Cyclin D1及CDK6表达下调,并有统计学差异;此外,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16过表达组BEAS-2B细胞中STAT3表达下调,而在Ⅱ型ROP16的BEAS-2B细胞中P-STAT3表达下调,且均有统计学意义。综上所述,Ⅰ型和Ⅲ型弓形虫ROP16相比于Ⅱ型可更显著的调节BEAS-2B细胞凋亡和细胞周期相关因子的表达及细胞STAT3磷酸化程度。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 rop16 肺上皮细胞 细胞周期 凋亡
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FOPS&ROPS翻滚试验台液压控制系统性能研究
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作者 陈淼 王西涛 +1 位作者 周建 吴金尘 《采矿技术》 2024年第4期305-309,共5页
为防止车辆侧翻和高空坠物对驾驶员造成伤害,矿山工程车辆普遍配备了FOPS&ROPS安全保护系统。这类车辆体积庞大、种类繁多,在优化改进FOPS&ROPS时多采用仿真技术,对其实际性能的检测需求也在不断增加。在中国,这类车辆必须经过... 为防止车辆侧翻和高空坠物对驾驶员造成伤害,矿山工程车辆普遍配备了FOPS&ROPS安全保护系统。这类车辆体积庞大、种类繁多,在优化改进FOPS&ROPS时多采用仿真技术,对其实际性能的检测需求也在不断增加。在中国,这类车辆必须经过有资质的检测机构对FOPS&ROPS进行检验并出具报告后才能投入使用。目前,国内外正积极开发FOPS&ROPS安全保护系统的试验平台,以进一步验证车辆的FOPS&ROPS性能是否符合标准规定,特别是当驾驶室变形时,DLV区域是否遭受侵犯。值得注意的是,国内搭建的ROPS试验台通常较为复杂,有的仍采用原始的油缸手动加载方式,这种方式载荷小且适用范围有限。因此,设计了一套基于FOPS试验台的ROPS液压控制系统,通过性能分析与试验验证来实现矿山工程车辆FOPS&ROPS的能力验证。结果表明:该ROPS液压控制系统能够满足矿山工程车辆ROPS安全保护系统性能验证分析的要求。 展开更多
关键词 矿山工程车辆 FOPS&ropS安全保护系统 DLV ropS液压控制系统
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大宁-吉县区块三气合采多目的层钻井综合提速研究
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作者 祝效华 刘伟吉 +3 位作者 邓开创 刘洪涛 李柯 王勇 《钻采工艺》 北大核心 2025年第3期70-76,共7页
大宁-吉县区块多储层(煤层气、致密气、页岩气)共存,可在同一井筒实现3类天然气资源的开采。本文针对地层特性设计了多只PDC钻头,基于实测钻井轨迹建立考虑地层深度和岩性的钻柱动力学模型,对比机械钻速、振动和扭矩等方面表现确定最佳... 大宁-吉县区块多储层(煤层气、致密气、页岩气)共存,可在同一井筒实现3类天然气资源的开采。本文针对地层特性设计了多只PDC钻头,基于实测钻井轨迹建立考虑地层深度和岩性的钻柱动力学模型,对比机械钻速、振动和扭矩等方面表现确定最佳钻头设计方案,并对其进行水力结构优化。建立三维全井钻柱动力学模型对选用钻头开展钻井参数优化、钻具组合优选及选配套提速工具评价。最终设计研制的PDC钻头在二开井段的石盒子组至太原组地层开展钻井提速任务,累计进尺达422 m,整体机械钻速为6.62 m/h,钻头在钻遇高强度灰岩地层、致密砂岩和泥页岩地层时仍具有较高的机械钻速。文章形成了针对钻遇多气种、多目的层开展以钻井参数优化、钻头优化设计、钻具组合优化为核心的钻井提速方案。 展开更多
关键词 三气合采 PDC钻头 钻柱动力学 提速工具 钻井提速
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基于岩石塑脆性临界破碎理论的高效破岩PDC钻头研制与应用
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作者 祝效华 胡海 +4 位作者 刘伟吉 冯少波 何灵 田万顷 梁红军 《天然气工业》 北大核心 2025年第5期102-112,共11页
塔里木盆地作为中国最大的含油气盆地,油气资源丰富,勘探开发潜力巨大。然而,塔里木盆地寒武系发育巨厚白云岩,其岩石强度大、可钻性极差,导致传统PDC(Polycrystalline Diamond Compact)钻头在白云岩地层中的机械钻速低、单只钻头进尺... 塔里木盆地作为中国最大的含油气盆地,油气资源丰富,勘探开发潜力巨大。然而,塔里木盆地寒武系发育巨厚白云岩,其岩石强度大、可钻性极差,导致传统PDC(Polycrystalline Diamond Compact)钻头在白云岩地层中的机械钻速低、单只钻头进尺少。为此,针对塔里木盆地寒武系白云岩地层进行了包括内部结构、力学特性、研磨性与可钻性的综合研究和分析,然后结合已有的白云岩地层钻头结构,优选了主切削齿类型、冠部曲线及刀翼参数,在岩石塑—脆性临界破碎理论的指导下,优化了布齿参数、水力结构,最终形成了适用于寒武系白云岩地层的新型高效PDC钻头并开展了现场试验。研究结果表明:①白云岩地层非均质性强、结构致密、强度大,单轴压缩强度达221.51 MPa,具有中等研磨性并且在高围压条件下的可钻性极差;②PDC钻头采用“浅锥型冠部+长保径段”结构,能够有效降低扭矩波动,进而提升钻头在白云岩地层中的钻进稳定性;③基于塑—脆性临界破碎理论设计的高效破岩PDC钻头在寒武系白云岩层段的提速效果显著,总进尺为603 m,机械钻速为2.87 m/h。结论认为,设计的DS675H钻头经现场应用打破了目前塔里木盆地白云岩地层单只钻头进尺最长和机械钻速最快纪录,为后续寒武系及其以下地层高效钻井提供了技术储备,为深部难钻地层钻井提速提效提供了技术支撑。 展开更多
关键词 塔里木盆地 寒武系 白云岩 PDC钻头 异形齿 塑—脆性 高效破岩 钻井提速
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深层页岩气提速钻头定制设计与应用
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作者 祝效华 邓开创 +4 位作者 刘伟吉 李柯 李元军 陈伟 严俊涛 《石油机械》 北大核心 2025年第10期1-7,共7页
随着页岩气开发规模的扩大,深层页岩气钻井提速成为提高开发效率的关键,其中针对地层特点设计更具有针对性的钻头是提高钻井效率的有效手段。根据渝西区块某页岩气井的钻井提速需求,分析目标层位特点,考虑钻头需穿越多个层位,应保证钻... 随着页岩气开发规模的扩大,深层页岩气钻井提速成为提高开发效率的关键,其中针对地层特点设计更具有针对性的钻头是提高钻井效率的有效手段。根据渝西区块某页岩气井的钻井提速需求,分析目标层位特点,考虑钻头需穿越多个层位,应保证钻头的地层适应性和抗冲击性。基于全局力平衡模型优化布齿方法,设计了五刀翼双排齿的PDC钻头,采用混合布齿策略(平面齿与三平面齿结合)提升钻头钻进效率并增强抗冲击能力。现场应用结果表明,该PDC钻头在φ311.2 mm井眼三开中实现单趟进尺868 m,平均机械钻速12.67 m/h,机械钻速同比邻井至少提高了16.65%,在深层页岩气开发中具有良好的适应性。该PDC钻头融合混合布齿设计与力平衡优化模型,形成适用于深层页岩气复杂地层的PDC钻头定制化方案,可为降低钻井成本、提高开发效率提供技术支撑。 展开更多
关键词 深层页岩气钻井 PDC钻头 个性化设计 钻井提速 混合布齿设计
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吉木萨尔页岩地层PDC钻头破岩模拟及优选
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作者 臧传贞 《石油机械》 北大核心 2025年第9期29-36,共8页
常规平面齿PDC钻头在钻井时问题突出,如磨损严重、崩齿频繁、进尺短,导致钻井效率低、成本高。为了提高吉木萨尔页岩油钻井勘探开发速度,降低成本,开展了新型多棱齿PDC钻头研究。页岩地层层理性特征较为明显,岩性硬度较高。在建模时,不... 常规平面齿PDC钻头在钻井时问题突出,如磨损严重、崩齿频繁、进尺短,导致钻井效率低、成本高。为了提高吉木萨尔页岩油钻井勘探开发速度,降低成本,开展了新型多棱齿PDC钻头研究。页岩地层层理性特征较为明显,岩性硬度较高。在建模时,不考虑岩石孔隙和钻井液所产生的影响,忽略切削过程中温度和磨损情况,以简化计算条件;考虑页岩各向异性,采用Drucker-Prager屈服准则描述页岩力学行为构建有限元模型。切削破岩仿真结果表明,多棱齿相较于平面齿优势明显,其接触应力分布均匀,所受应力更小,载荷波动幅度低,能有效解决岩石“抱团”问题,大幅提升破岩效率。在吉木萨尔页岩地区实钻应用中,新型多棱齿的PDC钻头在单只钻头进尺和平均机械钻速等方面均表现优异。与常规平面齿钻头相比,平均机械钻速提高35%,平均单只钻头进尺提高81%。新型多棱齿PDC钻头的良好破岩效果可为页岩地层钻头优选提供重要参考。 展开更多
关键词 PDC钻头 页岩地层 切削齿 多棱齿 钻井提速 破岩 吉木萨尔
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