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弓形虫ME49株ROP8基因的原核表达优化及功能研究 被引量:1
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作者 余一然 姚余有 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期110-115,共6页
为了明确假激酶ROP8在弓形虫抵抗宿主免疫中的作用,我们成功构建弓形虫ROP8原核表达体系并研究了多克隆抗体对弓形虫增殖的影响。根据基因分析结果,在ME49虫株中获得ROP8-C的369 bp的截短片段并克隆入pET28a载体中。将此质粒转化入BL21(... 为了明确假激酶ROP8在弓形虫抵抗宿主免疫中的作用,我们成功构建弓形虫ROP8原核表达体系并研究了多克隆抗体对弓形虫增殖的影响。根据基因分析结果,在ME49虫株中获得ROP8-C的369 bp的截短片段并克隆入pET28a载体中。将此质粒转化入BL21(DE3)感受态大肠杆菌IPTG,诱导并筛选诱导条件,用纯化后的蛋白免疫新西兰兔后获得多克隆抗体。Western blot显示弓形虫裂解蛋白产生了两个条带,表明以ME49虫株为总DNA模板,成功扩增出369 bp的ROP8截短基因,构建出pET28a-ROP8质粒,经过测序和比对后与基因文库中的蛋白序列完全相同。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物显示,在20 kDa有特异性条带且在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达6 h时表达量最高。弓形虫增殖实验结果显示,该多克隆抗体能够抑制弓形虫的增殖,可为研究ROP8在弓形虫增殖过程中的作用及其机制奠定基础,并为其作为疫苗候选分子提供新线索。 展开更多
关键词 弓形虫 假激酶 rop8 多克隆抗体
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鸡毒害艾美耳球虫ROP30蛋白的原核表达及其对鸡免疫保护效果的观察
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作者 李慧中 张弛 +6 位作者 严丹丽 宋鹏慧 汪飞燕 冯茜茜 刘丹丹 许金俊 陶建平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1419-1430,共12页
旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP3... 旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP30表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3),重组菌经测序鉴定后诱导表达,并纯化重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗rEnROP30的多克隆抗体。利用多克隆抗体,分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测子孢子(S Z)和MZ-2中的天然EnROP30蛋白及其定位。最后,应用荧光定量PCR分析En ROP 30基因在SZ和MZ-2中的转录水平。用重组蛋白按高剂量(200μg·羽-1)、中剂量(100μg·羽-1)和低剂量(50μg·羽-1)免疫雏鸡,同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照,以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标,评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示:该基因全长1605 bp,编码534个氨基酸,推导相对分子质量为55.55 ku;重组蛋白大小约为65 ku,以可溶形式存在,能被小鼠抗His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别;在S Z和MZ-2中均检测到天然EnROP30蛋白,其分子质量大约为62 ku;EnROP30蛋白定位在S Z和MZ-2的顶端;MZ-2中En ROP 30转录水平显著高于S Z(P<0.05)。各试验组的成活率均为100%;免疫组的平均增重增加,病变记分显著降低(P<0.05);中剂量组的相对增重率(92.96%)、卵囊减少率(66.87%)和ACI值(158.96)均为最高。综上:成功克隆表达了En ROP 30基因,重组蛋白rEnROP30对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护力。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 En rop 30 克隆 表达 免疫保护力
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弓形虫TR与ROP5双基因缺失株的构建及其生物学功能研究
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作者 耿小玲 李瑞芳 +7 位作者 徐卫兵 杜晶莹 张曼玉 孙卿 蒋蔚 米荣升 陈兆国 王权 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3408-3422,共15页
为了探究弓形虫TR与ROP5在抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了TR与ROP5双基因缺失株(TR-ROP5-KO)弓形虫。通过体外增殖、入侵及小鼠体内毒力试验发现,与RH株、TR基因缺失株(TR-KO)及ROP5基因缺失株(R... 为了探究弓形虫TR与ROP5在抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用,本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了TR与ROP5双基因缺失株(TR-ROP5-KO)弓形虫。通过体外增殖、入侵及小鼠体内毒力试验发现,与RH株、TR基因缺失株(TR-KO)及ROP5基因缺失株(ROP5-KO)相比,TR-ROP5-KO株在体外细胞中入侵、增殖能力及小鼠体内毒力作用减弱,表明弓形虫TR与ROP5基因双缺失不仅导致虫体在体外细胞中的生存活力减弱,还降低对宿主的毒力作用;通过检测TR/ROP5基因缺失株的氧化应激水平以及感染RAW264.7细胞的活性氧(ROS)水平发现,TR-ROP5-KO株引发的氧化应激水平虽然显著高于RH株(P<0.05),但与TR-KO株无显著差异(P>0.05);利用RT-qPCR检测TR/ROP5基因缺失株感染RAW264.7细胞的NF-κB、IL-12、IFN-γmRNA水平和ELISA检测小鼠血清中IL-12的水平发现,TR-ROP5-KO株感染组虽显著高于RH株感染组(P<0.05),但却未显著高于TR-KO株感染组(P>0.05),表明弓形虫的TR与ROP5在抗宿主ROS损伤中不存在协同作用。本研究构建TR与ROP5的双基因缺失株的方法探究两者在抗宿主ROS损伤中并无协同作用,为后续解析弓形虫多个基因功能的研究提供了方法依据,为弓形虫免疫逃避机制的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 CRISPR/Cas9 TR rop5 ROS
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弓形虫RH株ROP16 I蛋白通过JAK-STAT3途径对MH-S细胞增殖及细胞周期影响的研究
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作者 李佳铭 党甜甜 +1 位作者 殷荷 赵志军 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期113-120,共8页
目的 探究I型弓形虫RH株ROP16蛋白对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞增殖及细胞周期的影响和机制。方法 将ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达ROP16 I的过表达细胞株。RT-qPCR和Western-blot验证过表达效果,cck-... 目的 探究I型弓形虫RH株ROP16蛋白对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞增殖及细胞周期的影响和机制。方法 将ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定表达ROP16 I的过表达细胞株。RT-qPCR和Western-blot验证过表达效果,cck-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期变化。Western-blot及RT-qPCR检测p53、p21、CDK6、Cyclin D1、STAT3、p-STAT3(Y705)及JAK1蛋白或基因的表达水平,免疫荧光检测ROP16 I与p-STAT3(Y705)在MH-S细胞中的亚细胞共定位。结果 ROP16 I过表达慢病毒感染MH-S细胞后可检测到ROP16 I蛋白及基因表达。cck-8检测发现ROP16 I可促进MH-S细胞增殖(P<0.01),提升细胞活力。流式细胞术检测发现ROP16 I过表达可使MH-S细胞细胞周期G0/G1期降低,G2期、S期升高。相较于MH-S细胞组、MH-S-vector组,MH-S-ROP16细胞组p53及p21蛋白表达降低,CDK6、Cyclin D1、p-STAT3(Y705)及JAK1蛋白表达升高,p53及p21 mRNA表达降低,CDK6及Cyclin D1 mRNA表达升高(均P<0.01)。免疫荧光检测发现ROP16 I与p-STAT3(Y705)共同定位于细胞核及其周围细胞质中。结论 I型弓形虫RH株ROP16蛋白可激活JAK-STAT3途径,诱导细胞周期G0/G1期缩短,G2/S期延长,促进细胞增殖,为揭示弓形虫的免疫逃避机制提供了理论依据,为弓形虫肺炎防治研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 rop16蛋白 MH-S细胞 细胞周期 STAT3 p-STAT3(Y705)
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基于Radioss的某平地机驾驶室ROPS和FOPS仿真及优化
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作者 王亮 李远辉 +1 位作者 覃康 潘智威 《建设机械技术与管理》 2025年第1期70-71,80,共3页
以某平地机驾驶室为研究对象,通过在Hypermesh的Radioss应用模块下,建立驾驶室的翻滚仿真模型和坠物冲击驾驶室顶部仿真模型,采用非线性的有限元分析方法对驾驶进行仿真风险识别[1],提取对驾驶室在侧向、垂向、纵向加载后的抵抗反力和... 以某平地机驾驶室为研究对象,通过在Hypermesh的Radioss应用模块下,建立驾驶室的翻滚仿真模型和坠物冲击驾驶室顶部仿真模型,采用非线性的有限元分析方法对驾驶进行仿真风险识别[1],提取对驾驶室在侧向、垂向、纵向加载后的抵抗反力和能量吸收值,以及落物击打驾驶室顶部产生形变[2]。仿真结果表明:初始方案ROPS满足要求,但是顶部被落物击穿,FOPS不合格。经过结构优化改进,优化方案保证了驾驶员的生存空间边界未被侵入,满足国标要求。 展开更多
关键词 平地机 驾驶室 ropS FOPS
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FOPS&ROPS翻滚试验台液压控制系统性能研究
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作者 陈淼 王西涛 +1 位作者 周建 吴金尘 《采矿技术》 2024年第4期305-309,共5页
为防止车辆侧翻和高空坠物对驾驶员造成伤害,矿山工程车辆普遍配备了FOPS&ROPS安全保护系统。这类车辆体积庞大、种类繁多,在优化改进FOPS&ROPS时多采用仿真技术,对其实际性能的检测需求也在不断增加。在中国,这类车辆必须经过... 为防止车辆侧翻和高空坠物对驾驶员造成伤害,矿山工程车辆普遍配备了FOPS&ROPS安全保护系统。这类车辆体积庞大、种类繁多,在优化改进FOPS&ROPS时多采用仿真技术,对其实际性能的检测需求也在不断增加。在中国,这类车辆必须经过有资质的检测机构对FOPS&ROPS进行检验并出具报告后才能投入使用。目前,国内外正积极开发FOPS&ROPS安全保护系统的试验平台,以进一步验证车辆的FOPS&ROPS性能是否符合标准规定,特别是当驾驶室变形时,DLV区域是否遭受侵犯。值得注意的是,国内搭建的ROPS试验台通常较为复杂,有的仍采用原始的油缸手动加载方式,这种方式载荷小且适用范围有限。因此,设计了一套基于FOPS试验台的ROPS液压控制系统,通过性能分析与试验验证来实现矿山工程车辆FOPS&ROPS的能力验证。结果表明:该ROPS液压控制系统能够满足矿山工程车辆ROPS安全保护系统性能验证分析的要求。 展开更多
关键词 矿山工程车辆 FOPS&ropS安全保护系统 DLV ropS液压控制系统
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弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ蛋白激活STAT3磷酸化调节THP-1细胞周期、增殖及凋亡 被引量:1
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作者 殷荷 马磊 +4 位作者 党甜甜 李佳铭 田婷婷 马珊妮 赵志军 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期1115-1121,1127,共8页
目的探讨弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ蛋白通过激活STAT3磷酸化对THP-1细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法将ROP16空载体及重组慢病毒过表达载体分别转染至THP-1细胞,观察细胞荧光表达强度并验证过表达效果;通过Western blotting检测过表达ROP16Ⅰ/... 目的探讨弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ蛋白通过激活STAT3磷酸化对THP-1细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法将ROP16空载体及重组慢病毒过表达载体分别转染至THP-1细胞,观察细胞荧光表达强度并验证过表达效果;通过Western blotting检测过表达ROP16Ⅰ/Ⅲ的THP-1细胞中STAT3及P-STAT3蛋白的表达;利用STAT3磷酸化抑制剂-Stattic干预细胞,分为THP-1组、THP-1+Stattic组、THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ组及THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ+Stattic组;通过流式细胞术和CCK-8法检测各组细胞周期、增殖曲线以及凋亡率的改变;Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Cleaved Caspase3、Caspase9及Bcl-2蛋白表达水平。结果ROP16重组慢病毒过表达载体转染THP-1细胞后观察到强荧光信号,ROP16 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(FmRNA=314.1,F蛋白=758.7,均P<0.001),表明细胞稳转株构建成功,且THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ组细胞中P-STAT3蛋白的表达水平较THP-1组升高(F=606.1,P<0.001)。流式细胞术和CCK-8结果显示,与THP-1组比较,THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ组细胞周期被阻滞在G1期,细胞增殖能力降低(tⅠ组=19.2,tⅢ组=24.0,均P<0.01)、凋亡率增加(tⅠ组=175.1,tⅢ组=205.2,均P<0.001)。Western blotting结果显示,与THP-1组比较,THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ组细胞内促凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspases3、Caspase9的表达均显著升高(tBaxⅠ组=15.8,tBaxⅢ组=11.1,tCaspase9Ⅰ组=9.1,tCaspase9Ⅲ组=10.2,tCleaved Caspase3Ⅰ组=16.5,tCleaved Caspase3Ⅲ组=12.9,均P<0.001),抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低(tⅠ组=18.4,tⅢ组=26.2,均P<0.001)。但在Stattic干预后,THP-1-ROP16Ⅰ/Ⅲ+Stattic组细胞周期、增殖能力、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达均恢复至接近原水平。结论弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ蛋白通过激活STAT3磷酸化进而将THP-1细胞周期阻滞在G1期、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 rop16蛋白 THP-1细胞 细胞周期 细胞增殖 细胞凋亡
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辣椒小G蛋白CaROP的生物信息学分析
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作者 马思洁 朱天生 +1 位作者 何璐 杨叔青 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期165-175,共11页
【目的】研究辣椒内小G蛋白CaROP的生物学功能、蛋白理化性质、蛋白结构及系统发育关系。【方法】运用ProtParam、ProtScale、SignalP5.0、TMHMM、NetPhos3.1和NetCGlyc1.0等生物信息学软件分析9个CaROP蛋白的蛋白理化特性;运用SOPMA和S... 【目的】研究辣椒内小G蛋白CaROP的生物学功能、蛋白理化性质、蛋白结构及系统发育关系。【方法】运用ProtParam、ProtScale、SignalP5.0、TMHMM、NetPhos3.1和NetCGlyc1.0等生物信息学软件分析9个CaROP蛋白的蛋白理化特性;运用SOPMA和SWISS-MODEL等生物信息学软件预测分析9个CaROP蛋白的结构;运用生物信息学软件MEGA11分析9个CaROP蛋白的系统发育关系。【结果】9个CaROP蛋白的亲水性总平均值均小于0,均为亲水蛋白,其中6个为稳定的亲水蛋白;9个CaROP蛋白均无信号肽,即均为非分泌性蛋白;9个CaROP蛋白无跨膜结构域,即均非膜蛋白;9个CaROP蛋白均存在磷酸化位点,均无糖基化位点。9个CaROP蛋白的主要二级结构原件为无规则卷曲和α-螺旋,其次是β-折叠,最后是β-转角。9个CaROP蛋白聚为4个分支,其中分支Ⅰ和分支Ⅲ各包括1个CaROP蛋白。分支Ⅱ包括2个CaROP蛋白,其余5个CaROP蛋白均聚于分支Ⅳ中。【结论】9个CaROP蛋白具有完整的Rho功能域,均为非分泌性亲水蛋白。9个CaROP蛋白在系统进化树中共聚为了4个分支,其三级结构建模的预测结果也均较为理想,9个CaROP蛋白结构较稳定。 展开更多
关键词 辣椒 小G蛋白rop 蛋白理化特性 蛋白结构 系统发育关系
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A systematic review of machine learning modeling processes and applications in ROP prediction in the past decade 被引量:1
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作者 Qian Li Jun-Ping Li Lan-Lan Xie 《Petroleum Science》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第5期3496-3516,共21页
Fossil fuels are undoubtedly important, and drilling technology plays an important role in realizing fossil fuel exploration;therefore, the prediction and evaluation of drilling efficiency is a key research goal in th... Fossil fuels are undoubtedly important, and drilling technology plays an important role in realizing fossil fuel exploration;therefore, the prediction and evaluation of drilling efficiency is a key research goal in the industry. Limited by the unknown geological environment and complex operating procedures, the prediction and evaluation of drilling efficiency were very difficult before the introduction of machine learning algorithms. This review statistically analyses rate of penetration(ROP) prediction models established based on machine learning algorithms;establishes an overall framework including data collection, data preprocessing, model establishment, and accuracy evaluation;and compares the effectiveness of different algorithms in each link of the process. This review also compares the prediction accuracy of different machine learning models and traditional models commonly used in this field and demonstrates that machine learning models are the most effective technical means in current ROP prediction modeling. 展开更多
关键词 DRILLING Rate of penetration(rop)prediction Machine learning Accuracy evaluation
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弓形虫MIC1、MIC6和ROP18混合蛋白对小鼠的免疫保护作用
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作者 李虎 朱进进 +2 位作者 李婧旸 韩成建 余莉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期34-41,共8页
为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用,我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合,并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠血... 为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用,我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合,并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠血清特异性抗体,以及免疫蛋白刺激后脾细胞培养上清中各细胞因子的水平,通过脾淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞增殖情况。最后一次免疫后,用弓形虫WH3强毒株攻击,观察并记录小鼠的存活情况。结果表明,与对照PBS组相比,蛋白免疫组产生高滴度的IgG和IgG亚型(IgG1和IgG2a)抗体,滴度可高达1∶128000。细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平不同程度地升高,并且重组蛋白能够诱导淋巴细胞特异性增殖。免疫组小鼠的生存时间较对照组有所延长,其中MIC6-ROP18组延长时间最长(P<0.01)。MIC1、MIC6和ROP18组成的重组疫苗能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,其中MIC6-ROP18蛋白组合的免疫保护效果更为明显,但仍需进一步改进。本研究为弓形虫疫苗的研发提供了思路。 展开更多
关键词 弓形虫疫苗 重组蛋白 MIC1 MIC6 rop18
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弓形虫ROP16蛋白与NKRF互作对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡和周期的影响
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作者 周毓宁 赵志军 +4 位作者 李光琪 李佳铭 党甜甜 林永仙 于欣 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期982-992,共11页
为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP1... 为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16的表达进行验证。利用免疫共沉淀与液相色谱-质谱联用技术获取同ROP16可能发生互作的蛋白,并利用Venn图、Score分值、Intensity分值筛选出评分较高的互作蛋白NKRF进行验证。设计并合成NKRF-siRNA,分别转染至过表达Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16细胞,并利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,利用RT-qPCR和Western-blot分别对凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白的m RNA和蛋白表达水平进行检测。此次试验成功构建了Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16过表达A549稳转细胞株。利用IP-MS及CO-IP技术筛选并验证ROP16互作蛋白NKRF。筛选并构建NKRF沉默的过表达各型ROP16蛋白A549细胞。在过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16的A549细胞中,促凋亡蛋白Bax表达水平上调,抑凋亡蛋白BCL-2、Caspase-9、p53表达水平明显下调;细胞周期抑制蛋白p21表达明显上调,而G1/S期相关蛋白CDK6和CyclinD1蛋白表达明显下调,提示Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白会引起细胞凋亡和周期停滞,而在沉默NKRF组中,过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的A549细胞中Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的促凋亡作用减弱,细胞周期无明显停滞,与Ⅱ型ROP16蛋白之间没有统计学差异。综上所述得出弓形虫Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白通过与NKRF互作,诱导A549细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制A549细胞增殖。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 rop16蛋白 刚地弓形虫 NF-ΚB通路 NF-κB抑制因子
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ROP信号途径调控花粉管极性生长的分子机理研究进展
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作者 毕泽楷 亓正聿 +1 位作者 金梦 李恩 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第22期7546-7555,共10页
细胞的极性生长可以作用于植物生长发育等一系列生物活动。其中花粉管的极性生长在被子植物有性生殖过程中发挥重要的作用。多种信号通路协同调控花粉管的极性生长,ROP (Rho-related GTPases of plants)所介导的信号途径是花粉管极性生... 细胞的极性生长可以作用于植物生长发育等一系列生物活动。其中花粉管的极性生长在被子植物有性生殖过程中发挥重要的作用。多种信号通路协同调控花粉管的极性生长,ROP (Rho-related GTPases of plants)所介导的信号途径是花粉管极性生长调控网络中的主要参与者,也是植物其他细胞极性生长的关键调节因子。本研究将以拟南芥等植物的花粉管作为对象,对ROP信号途径进行简要叙述,旨在更全面地展现ROP在花粉管极性生长中的分子机制,为植物小G蛋白ROP的功能研究提供借鉴。 展开更多
关键词 花粉管 极性生长 rop
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不同基因型弓形虫ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响
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作者 李光琪 田梅 +3 位作者 周毓宁 马少寒 马珊妮 赵志军 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2024年第12期1674-1682,共9页
为探讨弓形虫Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制,本研究构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16慢病毒载体并转染至人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达3种不同基因型ROP16细胞株,培养细胞... 为探讨弓形虫Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对人肺上皮细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制,本研究构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16慢病毒载体并转染至人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达3种不同基因型ROP16细胞株,培养细胞并提取全蛋白及总RNA,通过RT-qPCR及Western-blot检测Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型ROP16对细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase9(CAS9)、P53及细胞周期相关蛋白CDK6、P21、Cyclin D1在m RNA和蛋白水平表达量的影响,并进一步探究不同基因型ROP16对细胞STAT3磷酸化水平的影响。Western-blot及RT-qPCR检测结果显示,3种不同基因型慢病毒过表达载体转染BEAS-2B细胞后其ROP16 m RNA和蛋白均明显表达,提示细胞模型构建成功;针对细胞凋亡及细胞周期相关蛋白的检测结果显示,与空白对照组及阴性对照组相比3种基因型ROP16均可引起细胞凋亡相关蛋白BAX和BCL-2下调,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16可以引起CAS9及P53表达水平降低,且有统计学差异;Western-blot结果显示,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16均可引起细胞周期相关蛋白P21、Cyclin D1及CDK6表达下调,并有统计学差异;此外,Ⅰ型和Ⅲ型ROP16过表达组BEAS-2B细胞中STAT3表达下调,而在Ⅱ型ROP16的BEAS-2B细胞中P-STAT3表达下调,且均有统计学意义。综上所述,Ⅰ型和Ⅲ型弓形虫ROP16相比于Ⅱ型可更显著的调节BEAS-2B细胞凋亡和细胞周期相关因子的表达及细胞STAT3磷酸化程度。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 rop16 肺上皮细胞 细胞周期 凋亡
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Optimization of Extraction Methods of ROP GTPase from Young Leaves of Wheat 被引量:2
14
作者 安旭亮 韩榕 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第2期44-47,共4页
All of the Rho GTPase seems to form a special sub-family,because such a sub-family has so far only found in plants,and then named Rop GTPase,which directly involved in and regulated of muscle actin cytoskeletal reorga... All of the Rho GTPase seems to form a special sub-family,because such a sub-family has so far only found in plants,and then named Rop GTPase,which directly involved in and regulated of muscle actin cytoskeletal reorganization,such as a series of signal transductions.The efficient purification technology and the means of ROP GTPase in wheat are the key basis of the studies on its functions and prosperities.And it has a very important theoretical and practical significance in the signal transduction and F-act... 展开更多
关键词 ELECTropHORESIS Gel filtration chromatography Non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis rop GTPase
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Toxoplasma ROP16Ⅰ/Ⅲ ameliorated inflammatory bowel diseases via inducing M2 phenotype of macrophages 被引量:10
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作者 Yong-Wei Xu Rui-Xin Xing +7 位作者 Wen-Hui Zhang Lu Li Yi Wu Jing Hu Cong Wang Qing-Li Luo Ji-Long Shen Xi Chen 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2019年第45期6634-6652,共19页
BACKGROUND Inflammatory bowel disease(IBD) is characterized by chronic and non-specific inflammation of the intestinal mucosa and mainly includes ulcerative colitis and Crohn’s disease.AIM To explore the beneficial... BACKGROUND Inflammatory bowel disease(IBD) is characterized by chronic and non-specific inflammation of the intestinal mucosa and mainly includes ulcerative colitis and Crohn’s disease.AIM To explore the beneficial effect of Toxo ROP16Ⅰ/Ⅲ-induced M2 phynotype macrophages in homeostasis of IBDs through downregulation of M1 inflammatory cells.METHODS RAW264.7 macrophages stimulated by lipopolysaccharide(LPS)(M1 cells) were co-cultured with Caco-2 cells as an inflammatory model of IBD in vitro.The expression of Toxo ROP16Ⅰ/Ⅲ was observed in RAW264.7 macrophages that were transfected with p EGFP-rop16Ⅰ/Ⅲ.The phenotypes of M2 and M1 macrophage cells were assessed by quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction and the expression of tumor necrosis factor(TNF)-α,interleukin(IL)-1β,IL-6,transforming growth factor(TGF)-β1,IL-10,inducible nitric oxide synthase(i NOS),and arginase-1(Arg-1) was detected.The expression of i NOS,Arg-1,signal transducer and activator of transcription 3(Stat3),p-Stat3,Stat6,pStat6,programmed death ligand-2(PD-L2),caspase-3,-8,and-9 was analyzed by Western blotting,and Griess assays were performed to detect nitric oxide(NO).TNF-α,IL-1β,IL-6,TGF-β1,and IL-10 expression in the supernatants was detected by enzyme-linked immunosorbent assay,and Caco-2 cell apoptosis was determined by flow cytometry after mixing M1 cells with M2 cells in a Caco-2 cell co-culture system.RESULTS M1 cells exhibited significantly increased production of i NOS,NO,TNF-α,IL-1β,and IL-6,while Toxo ROP16Ⅰ/Ⅲ induced macrophage bias to M2 cells in vitro,showing increased expression of Arg-1,IL-10 and TGF-β1 and elevated production of p-Stat3 and p-Stat6.The mixed M1 and M2 cell culture induced by Toxo ROP16 Ⅰ/Ⅲ exhibited decreased production of NO and i NOS and upregulated expression of Arg-1 and PD-L2.Accordingly,Caco-2 cells became apoptotic,and apoptosis-associated proteins such as caspase-3,-8 and-9 were dampened during co-culture of M1 and M2 cells.Flow cytometry analysis showed that co-culture of M1 cells with Caco-2 cells facilitated the apoptosis of Caco-2 cells,but co-culture of M1 and M2 cells alleviated Caco-2 cell apoptosis.CONCLUSION Toxo ROP16 Ⅰ/Ⅲ-induced M2 macrophages inhibited apoptosis of Caco-2 cells caused by M1 macrophages.This finding may help gain a better understanding of the underlying mechanism and represent a promising therapeutic strategy for IBDs. 展开更多
关键词 Toxoplasma rop16Ⅰ/Ⅲ CACO-2 Inflammatory bowel disease IMMUNITY Classically activated macrophages Alternatively activated macrophages
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拟南芥RopGEFs家族基因在外源脱落酸处理下的表达分析 被引量:4
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作者 王会 金宇騑 +5 位作者 卢曼曼 葛光君 向芬 李杜 朱咏华 郑巧林 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2010年第8期817-823,共7页
ABA不同浓度和不同时间处理拟南芥野生型7天龄幼苗,采用实时荧光定量PCR方法,分析小G蛋白ROP10和ROP乌苷酸交换因子RopGEFs基因的表达水平差异。结果表明,RopGEF7~10,12及13没有检测到表达,而RopGEF1~61,11,14及ROP10在ABA处理下表现... ABA不同浓度和不同时间处理拟南芥野生型7天龄幼苗,采用实时荧光定量PCR方法,分析小G蛋白ROP10和ROP乌苷酸交换因子RopGEFs基因的表达水平差异。结果表明,RopGEF7~10,12及13没有检测到表达,而RopGEF1~61,11,14及ROP10在ABA处理下表现出不同的应答趋势,其中RopGEF5基因的表达变化与ROP10的变化相似。推测RopGEF5有可能在ROP10介导的ABA信号转导途经中起调控作用。 展开更多
关键词 拟南芥 脱落酸 rop10 ropGEFs
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采后玉露桃果实冷害发生与ROP基因的表达调控 被引量:11
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作者 金微微 徐昌杰 +4 位作者 李鲜 王平 张波 孙崇德 陈昆松 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期608-613,共6页
以软溶质玉露桃果实为材料,于8℃、5℃、0℃和LTC(8℃锻炼3d再转到0℃贮藏)下贮藏30d后转至货架(20℃)2d,对各个处理果实的腐烂和冷害程度、果实品质变化规律以及ROP基因的表达模式进行了比较,以探讨ROP基因与低温胁迫的关系。结果表明,... 以软溶质玉露桃果实为材料,于8℃、5℃、0℃和LTC(8℃锻炼3d再转到0℃贮藏)下贮藏30d后转至货架(20℃)2d,对各个处理果实的腐烂和冷害程度、果实品质变化规律以及ROP基因的表达模式进行了比较,以探讨ROP基因与低温胁迫的关系。结果表明,经5℃和0℃贮藏30d的玉露桃果实在货架期间褐变加重,经5℃处理的果实褐变最重,经0℃处理果实表现后熟障碍;经8℃贮藏30d以及后续2d货架期的果实不出现冷害症状,但果实腐烂严重;LTC处理果实经冷藏后在货架期后熟正常,且果实冷害和腐烂均被明显抑制。各处理桃果实在采后低温贮藏过程中总可溶性糖和总有机酸质量分数均趋下降,其中5℃处理果实总可溶性糖质量分数下降幅度最大。结合应用EST检索和RT-PCR克隆扩增,分离出桃ROP基因(PpROP)。实时定量PCR结果显示,PpROP在5℃下表达迅速增强,第5天达到高峰,其丰度明显高于其他处理,LTC处理使PpROP表达维持较低水平。 展开更多
关键词 玉露桃 果实 低温胁迫 rop基因表达
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弓形虫ROP5与ROP18的双基因缺失株构建及表型鉴定 被引量:3
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作者 陈芸 刘旗 +3 位作者 张曼玉 耿小玲 蒋蔚 王权 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期1-11,共11页
ROP5与ROP18都是弓形虫重要的毒力因子,本研究旨在构建弓形虫RH株ROP5单基因缺失株,在此基础上构建ROP5与ROP18的双基因缺失株,并研究ROP5基因、ROP18基因的表型功能,为探究两个基因的协同作用奠定基础。首先构建质粒pSAG1:CAS9::TgU6:s... ROP5与ROP18都是弓形虫重要的毒力因子,本研究旨在构建弓形虫RH株ROP5单基因缺失株,在此基础上构建ROP5与ROP18的双基因缺失株,并研究ROP5基因、ROP18基因的表型功能,为探究两个基因的协同作用奠定基础。首先构建质粒pSAG1:CAS9::TgU6:sgROP5、pROP5::DHFR-D质粒,并将质粒电转至弓形虫RH株速殖子,经息疟定筛选及PCR鉴定;再将质粒pSAG1:CAS9::TgU6:sgROP18、pROP18::CAT-D电转至鉴定正确的ROP5单基因缺失株(ROP5-KO)速殖子中,经氯霉素筛选并进行PCR鉴定。结果显示:本试验成功获得ROP5-KO株及ROP5与ROP18的双基因缺失株(ROP5/ROP18-KO);两个基因同时缺失可明显降低弓形虫的入侵能力及生长速度;此外,双基因缺失后,弓形虫对小鼠的毒力明显减弱。本研究表明,同时敲除ROP5基因与ROP18基因后,弓形虫毒力显著降低,为进一步探究ROP5与ROP18的协同作用奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 CRISPR/Cas9 基因敲除 rop5基因 rop18基因
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弓形虫ROPs DNA疫苗对小鼠急性感染弓形虫的免疫保护作用
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作者 杜荣起 李丹若 +5 位作者 何金灵 龙芯 赵瑞利 赵伟 金天明 张东超 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第21期11-17,25,共8页
为了评价弓形虫棒状体蛋白(ROPs)DNA疫苗对小鼠急性感染弓形虫的免疫保护作用,试验将获取的ROP5、ROP17和ROP18基因分别与pVAX1载体连接,获得重组质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP17和pVAX1-ROP18。将重组质粒转染至HEK293A细胞中,利用Western... 为了评价弓形虫棒状体蛋白(ROPs)DNA疫苗对小鼠急性感染弓形虫的免疫保护作用,试验将获取的ROP5、ROP17和ROP18基因分别与pVAX1载体连接,获得重组质粒pVAX1-ROP5、pVAX1-ROP17和pVAX1-ROP18。将重组质粒转染至HEK293A细胞中,利用Western-blot方法检测目的蛋白在真核细胞内的表达情况。将获得的重组质粒等摩尔比混合后通过腿部肌肉注射免疫小鼠作为混合疫苗组,同时设置空载体组及生理盐水组,免疫后检测小鼠血清IgG抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况、细胞因子水平及T淋巴细胞分型,加强免疫后第14天对小鼠腹腔接种弓形虫RH株并观察其生存情况。结果表明:重组质粒经PCR扩增、测序及双酶切验证,分别在1686,1863,1701 bp处出现特异性条带,与目的基因大小一致且无碱基增加、缺失和突变情况;重组质粒经Western-blot检测在62,68,63 ku处成功表达;与空载体组、生理盐水组相比,混合疫苗组血清IgG抗体水平、脾淋巴细胞增殖指数、IFN-γ和IL-6细胞因子、CD4^(+)T淋巴细胞占比和CD4^(+)/CD8^(+)均极显著升高(P<0.01),免疫小鼠攻虫后的生存时间[(18.4±1.4)d]极显著延长(P<0.01)。说明构建的弓形虫ROPs DNA疫苗pVAX1-ROP5/ROP17/ROP18能够刺激小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,并能增强小鼠抵抗弓形虫感染的能力。 展开更多
关键词 弓形虫 DNA疫苗 rop5 rop17 rop18
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