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METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控结直肠癌SW480细胞的恶性生物学行为 被引量：3
1
作者 庄盛威 吴志荣 +2 位作者 张秀萍 黄哲昆 张勇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2023年第12期1051-1060,共10页
目的:探究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/膜联蛋白A2/Wnt/β-连环蛋白(BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin)轴调控结直肠癌细胞SW480恶性生物学行为的分子机制。方法:选取2022年6月至2022年11月间在复旦大学附属中山医... 目的:探究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/膜联蛋白A2/Wnt/β-连环蛋白(BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin)轴调控结直肠癌细胞SW480恶性生物学行为的分子机制。方法:选取2022年6月至2022年11月间在复旦大学附属中山医院厦门医院手术治疗的24例CRC患者,收集患者的CRC组织和对应的癌旁组织,用qPCR法检测其中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β mRNA的表达,用Pearson法分析CRC组织中RNASEH1-AS1表达分别与METTL3和BUD13表达的相关性。常规培养结直肠癌细胞SW480,分为sh-NC组、sh-RNASEH1-AS1组、NC组、sh-METTL组、si-NC组、si-BUD13组、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC组、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2组、sh-METTL+pc-NC组、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1组,用Lipofectamine?2000转染试剂将sh-NC、sh-RNASEH1-AS1、sh-NC、sh-METTL、si-NC、si-BUD13、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2、sh-METTL+pc-NC、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1分别转染SW480细胞,用qPCR法检测后SW480细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2的表达,细胞克隆形成实验检测转染后各组SW480细胞的增殖能力,FCM术检测转染后各组SW480细胞的凋亡情况,细胞划痕实验检测转染后各组SW480细胞的迁移能力,WB法检测转染后各组SW480细胞中ANXA2、β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白表达,RNA免疫沉淀(RIP)法检测RNASEH1-AS1与BUD1、BUD1与ANXA2的靶向关系。结果:数据库CRC数据分析和中国人CRC组织和癌旁组织的qPCR法检测结果均显示,与癌旁组织相比CRC组织中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β均呈明显高表达(均P<0.01),且RNASEH1-AS1表达与METTL3(r=0.698,P<0.01)、BUD13(r=0.784,P<0.01)的表达呈正相关。在结直肠癌各细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2 mRNA均呈高表达(均P<0.05);敲减RNASEH1-AS1或METTL3后SW480细胞中RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2表达显著降低(均P<0.05),而过表达RNASEH1-AS1后上述分子表达明显上调(均P<0.05);敲减RNASEH1-AS1或METTL3可抑制SW480的增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达,促进其凋亡(均P<0.05),而过表达RNASEH1-AS1则可促进SW480增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达和抑制其凋亡(均P<0.05);RNASEH1-AS1通过招募BUD13靶向促进ANXA2的表达(均P<0.05);过表达ANXA2可部分逆转敲减RNASEH1-AS1对SW480细胞的影响(均P<0.05)。结论:METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控SW480细胞的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 结直肠癌 SW480细胞 甲基转移酶样蛋白3 rnaseh1-AS1 BUD13 膜联蛋白A2
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依赖于c-Myc的R-loops结构对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的调控作用
2
作者 林家汉 陈彩燕 +2 位作者 陈申波 叶富跃 杨堃 《中华神经外科疾病研究杂志》 2026年第2期16-22,共7页
目的探讨转录因子c-Myc的R-loops结构及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的调控作用。方法采用DNA-RNA免疫沉淀PCR(DNA-RNA immunoprecipitation PCR,DRIP-PCR)法检测胶质瘤细胞(U251和U87-MG)中c-Myc的R-loops结构。分别将空载质粒、c-My... 目的探讨转录因子c-Myc的R-loops结构及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的调控作用。方法采用DNA-RNA免疫沉淀PCR(DNA-RNA immunoprecipitation PCR,DRIP-PCR)法检测胶质瘤细胞(U251和U87-MG)中c-Myc的R-loops结构。分别将空载质粒、c-Myc过表达质粒、RNASEH1过表达质粒转染至U251和U87-MG细胞,设立对照组(CTRL组)、核糖核酸内切酶H1(RNASEH1)过表达组(RNASEH1-OE组)、c-Myc过表达组(c-Myc-OE组)及共转染c-Myc与RNASEH1共转染组(c-Myc-OE+RNASEH1-OE组)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)实验检测细胞增殖能力;通过细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞迁移和侵袭水平;利用蛋白印迹法(Western blot)检测RNASEH1和c-Myc的蛋白表达水平。结果转录因子c-Myc在胶质瘤细胞中存在R-loops结构(P<0.05)。过表达RNASEH1可清除c-Myc依赖的R-loops结构,从而抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移(P<0.05)。c-Myc的过表达可提高核糖核酸内切酶H1(RNASEH1)的表达,从而挽救其R-loops结构,促进胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响(P<0.05)。结论转录因子c-Myc可能通过其R-loops结构促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移等恶性生物学行为。 展开更多
关键词 c-Myc 核糖核酸内切酶H1 R环 胶质瘤 增殖 侵袭 迁移
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