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siRNA在肺损伤治疗中的研究进展
1
作者 刘福莉 胡寒冰 申捷 《复旦学报(医学版)》 北大核心 2025年第6期883-891,共9页
肺部是人体与外界环境直接接触的关键器官,极易受到多种外源性因素刺激,从而引发一系列炎症反应,并导致不同程度的组织损伤。随着基因工程技术的发展,通过RNA干扰沉默特定靶基因成为治疗肺损伤的新策略。小干扰RNA(small interfering RN... 肺部是人体与外界环境直接接触的关键器官,极易受到多种外源性因素刺激,从而引发一系列炎症反应,并导致不同程度的组织损伤。随着基因工程技术的发展,通过RNA干扰沉默特定靶基因成为治疗肺损伤的新策略。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)是RNA干扰技术的重要部分,可通过碱基互补配对的方式与靶基因结合以抑制其表达,进而产生相应的调控作用。因特异性靶向、低生物毒性等特点,siRNA正逐渐成为治疗肺损伤等肺部疾病的理想工具。本文综述了siRNA的作用机制及其在肺损伤治疗中的应用进展与研究现状。 展开更多
关键词 肺损伤 小干扰rna(sirna) 治疗 基因表达调控
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siRNA无载体递送研究进展
2
作者 刘珂瑶 罗应楠 +2 位作者 胡一雪 王东纳 张列峰 《南京师大学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期47-55,共9页
小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为一种能够特异性靶向基因沉默的重要分子,具有广阔的应用前景.然而,siRNA的有效递送一直是其临床应用的关键问题之一.传统的siRNA递送系统通常依赖于载体工具的辅助,但载体存在潜在的降解性... 小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为一种能够特异性靶向基因沉默的重要分子,具有广阔的应用前景.然而,siRNA的有效递送一直是其临床应用的关键问题之一.传统的siRNA递送系统通常依赖于载体工具的辅助,但载体存在潜在的降解性、长期毒性和免疫反应等问题,限制了其在临床中的应用.因此,无载体递送siRNA成为当前研究的热点之一.本综述旨在回顾siRNA无载体递送研究的最新进展,包括其作用机制、递送策略以及递送优势等方面. 展开更多
关键词 小干扰rna 无载体递送 rna干扰 修饰策略 sirna偶联物
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壳聚糖/透明质酸复合物纳米粒子的制备及其在siRNA递送中的应用 被引量：3
3
作者 刘怀艺 黄方茜 +1 位作者 陈柏求 燕云峰 《生物工程学报》 北大核心 2025年第4期1340-1353,共14页
发展高效安全的递送载体是提高siRNA药物体内稳定性、推进siRNA药物的临床应用的关键。壳聚糖(chitosan,CS)是一类天然阳离子聚合物,在核酸药物的递送中具有巨大的应用前景。为了优化CS/siRNA纳米粒子(nanoparticles, NPs)的物理化学性... 发展高效安全的递送载体是提高siRNA药物体内稳定性、推进siRNA药物的临床应用的关键。壳聚糖(chitosan,CS)是一类天然阳离子聚合物,在核酸药物的递送中具有巨大的应用前景。为了优化CS/siRNA纳米粒子(nanoparticles, NPs)的物理化学性质,提高其siRNA递送效率,本研究在CS中加入透明质酸(hyaluronicacid,HA),通过静电作用形成稳定的复合物纳米粒子,同时利用HA对肿瘤细胞表面CD44的靶向作用,实现siRNA的高效递送。首先,系统探究了CS和HA的分子量和质量比对CS/HA NPs的物理化学性质的影响。结果显示,混合体系在HA:CS的质量比为5:5和6:4左右可以形成粒径较小、粒径分布较窄且存储稳定性较高的复合物纳米粒子。在其他条件相同的情况下,CS/HANPs的尺寸随着CS和HA分子量的提高而增大。在此基础上,选择合适的条件制备CS/HA NPs用于siRNA的递送。细胞实验结果显示,通过引入HA可以有效降低CS递送体系的细胞毒性,提高了纳米粒子的细胞摄取,相关CS/HA/siRNANPs可以沉默HeLa-Luc细胞中50%–60%荧光素酶基因。与纯CS相比,CS/HANPs可以与siRNA形成更小的纳米粒子,并由HA介导与肿瘤细胞的特异性相互作用,从而实现siRNA的高效递送。研究结果为天然高分子复合物纳米粒子的构建及siRNA递送提供了有益的参考。 展开更多
关键词 rna干扰 壳聚糖 透明质酸 纳米粒子 sirna递送
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siRNA药物研发进展及趋势
4
作者 张霖 《上海医药》 2025年第2期85-89,共5页
小干扰RNA(siRNA)是基于RNA干扰(RNAi)技术通过沉默疾病相关基因的表达最终达到治疗效果的一种新型治疗手段,具有治疗效率高、特异性强等特点。自2018年首款siRNA药物上市以来,已成为最受关注的小RNA药物之一,被视为制药领域一次新技术... 小干扰RNA(siRNA)是基于RNA干扰(RNAi)技术通过沉默疾病相关基因的表达最终达到治疗效果的一种新型治疗手段,具有治疗效率高、特异性强等特点。自2018年首款siRNA药物上市以来,已成为最受关注的小RNA药物之一,被视为制药领域一次新技术革命。目前siRNA药物的研发正处于快速发展期,吸引众多制药企业纷纷加入赛道。本文简要概述siRNA药物的作用机制、优势及面临的挑战、关键技术突破、在研情况及趋势等,希望为制药企业相关研发人员或项目管理人员提供参考。 展开更多
关键词 小rna 小干扰rna(sirna) rna干扰(rnaI) 化学修饰 递送系统
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siRNA基因治疗在肌腱损伤修复中的研究进展
5
作者 邱冰月 施家腾 金静 《生物技术进展》 2025年第3期411-417,共7页
肌腱损伤是创伤外科的常见病症之一,临床上主要采用手术缝合方式进行治疗,但是术后存在再次断裂和粘连形成的风险。近些年多款基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的核酸药物上市,基因治疗受到广泛关注。然而,由于小干扰RNA(small inter... 肌腱损伤是创伤外科的常见病症之一,临床上主要采用手术缝合方式进行治疗,但是术后存在再次断裂和粘连形成的风险。近些年多款基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的核酸药物上市,基因治疗受到广泛关注。然而,由于小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)药物易降解,体内存在核酸内切酶问题,载体的选择至关重要。相较于易导致突变的病毒载体,纳米载体具备更高的生物安全性和可修饰性。系统总结了siRNA的作用机制、基因治疗载体的优化策略及其在肌腱修复中的应用进展,并展望了纳米载体在临床转化中的潜力,以期为肌腱损伤的治疗提供参考。 展开更多
关键词 rna干扰 小干扰rna 基因治疗 肌腱修复 纳米颗粒
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Ad-VEGF-siRNA抑制荷人骨肉瘤裸鼠血管生成的形态学研究 被引量：11
6
作者 王家骐 高悠水 +3 位作者 梅炯 薛华明 王树青 蔡宣松 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期581-586,共6页
背景与目的:血管内皮生长因子是骨肉瘤血管形成重要的促进因子,本研究通过抗血管生成方法,观察其抑制荷人骨肉瘤裸鼠血管生成的形态学表现。方法:取4～8周龄的Balb/c裸鼠作为实验动物,人骨肉瘤细胞株MG63皮下接种法构建骨肉瘤的动物模... 背景与目的:血管内皮生长因子是骨肉瘤血管形成重要的促进因子,本研究通过抗血管生成方法,观察其抑制荷人骨肉瘤裸鼠血管生成的形态学表现。方法:取4～8周龄的Balb/c裸鼠作为实验动物,人骨肉瘤细胞株MG63皮下接种法构建骨肉瘤的动物模型。建模成功后将荷人骨肉瘤的裸鼠随机分为3组,每组15只。A组使用自行构建的Ad-VEGF-siRNA干扰新生血管形成;B、C组分别使用等剂量的Ad-EGFP或PBS作为对照。实验维持19d,药物使用后隔日测量肿瘤体积和体重,绘制肿瘤生长曲线;采用常规HE染色、VEGF和CD31相关抗原免疫组化染色观察各组肿瘤标本;各组随机抽取一个标本在透射电镜下观察仿血管发生的超微结构。结果:实验结束时,A组裸鼠瘤体体积为(0.31±0.18)cm3,重量为(0.75±0.21)g,微血管密度(microvessed density,MVD)为5.79±0.34,VEGF表达为235228.09±123244.41,B、C照组裸鼠瘤体积分别为(1.21±0.29)cm3、(1.43±0.95)cm3;瘤重分别为(1.19±0.27)g、(1.19±0.35)g;MVD分别为11.00±0.68、10.42±0.10;VEGF表达分别为9641992.40±90479.62、981298.00±213590.50。A组肿瘤体积、重量、MVD和VEGF表达均显著低于B、C组。MVD和VEGF呈正相关关系,相关系数为0.9989。Ad-VEGF-siRNA组仿血管发生数量1.4000±0.5477,明显小于Ad-EGFP和PBS对照组。透射电镜可见肿瘤细胞形成的仿血管。结论:通过宏观和微观的形态学观察,证实Ad-VEGF-siRNA介导的以VEGF为靶向的抗血管生成能够抑制荷人骨肉瘤裸鼠的血管生成。 展开更多
关键词 骨肉瘤 血管内皮生长因子 腺病毒 小干扰rna 血管生成抑制
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siRNA敲除STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的抑制 被引量：8
7
作者 范钰 张尤历 +6 位作者 张宇川 吴莺 魏金文 程兆明 何亚龙 王银环 李华 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2007年第1期46-48,共3页
目的:了解RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的可能作用。方法:根据STAT3基因特点,设计合成STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并转染人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3mRNA,采用软琼脂集落培养试验检测癌细... 目的:了解RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的可能作用。方法:根据STAT3基因特点,设计合成STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并转染人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3mRNA,采用软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭能力。结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关。结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的侵袭。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 STAT3 rna干扰 sirna 侵袭
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VEGF基因特异性siRNA转染后对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量：7
8
作者 张晓 徐文华 +2 位作者 葛银林 侯琳 李泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期14-17,共4页
目的:探讨利用干扰RNA(RNAi)抑制血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法:设计针对VEGF基因的小干扰RNA(siRNA),合成DNA模板,体外转录siRNA。以脂质体转染法将双链siRNA导入MCF-7细胞后,用MTT比色法检... 目的:探讨利用干扰RNA(RNAi)抑制血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法:设计针对VEGF基因的小干扰RNA(siRNA),合成DNA模板,体外转录siRNA。以脂质体转染法将双链siRNA导入MCF-7细胞后,用MTT比色法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。通过Hoechst33258染色观察MCF-7细胞的凋亡。用流式细胞术检测细胞周期的改变,RT-PCR检测VEGFmRNA表达的变化,免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达。结果:所设计的两个靶位点siRNA,均能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,VEGFmRNA及其蛋白的表达明显减少;而作为阴性对照的错义序列组siRNASCR则没有上述效应。结论:体外转录合成的siRNA可抑制MCF-7细胞中VEGF基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 rna干扰 小干扰rna MCF-7细胞 血管内皮生长因子 基因治疗
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siRNA阻断NF-κB信号通路对食管鳞癌细胞增殖、耐药的影响 被引量：8
9
作者 田芳 田卫红 +2 位作者 许培荣 刘红涛 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第1期41-44,共4页
目的:通过RNA干扰(RNAi)阻断食管鳞癌细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药的关系。方法:使用NF-κB p65 siRNA分别转染人食管鳞癌Eca109和EC9706细胞72h,以未转染的Eca109和EC9706细胞为对照,采用Western blot检测p65蛋白... 目的:通过RNA干扰(RNAi)阻断食管鳞癌细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药的关系。方法:使用NF-κB p65 siRNA分别转染人食管鳞癌Eca109和EC9706细胞72h,以未转染的Eca109和EC9706细胞为对照,采用Western blot检测p65蛋白的表达;MTT法检测转染NF-κBp65siRNA24h、48h、72h后Eca109和EC9706细胞的增殖情况及转染同时联合应用不同质量浓度5-Fu(0mg/L,16.35mg/L,32.7mg/L,327mg/L,3270mg/L,6540mg/L)对Eca109和EC9706细胞增殖的影响。结果:①NF-κB亚单位p65在Eca109和EC9706细胞质中高表达,p65siRNA可有效阻断p65蛋白表达。②MTT实验表明,转染组细胞存活率较未转染组明显下降(P<0.05);与化疗药5-Fu联用,转染组和未转染组细胞的增殖活性随着5-Fu浓度的增加有下降趋势,但在同一浓度,转染p65siRNA的细胞与未转染组相比,细胞增殖活性明显下降(P<0.05)。结论:应用RNAi技术可有效干扰p65的表达,抑制食管鳞癌细胞的增殖,增强对化疗药5-Fu的敏感性。因此,可将阻断NF-κB信号通路作为基因治疗的靶点。 展开更多
关键词 食管肿瘤 NF-KAPPAB rna干扰 sirna
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siRNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达 被引量：12
10
作者 饶林 詹林盛 +1 位作者 彭剑淳 王全立 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期38-43,共6页
以HCVIRES为靶位 ,应用T7RNA多聚酶体外转录合成了 5条小干扰RNA(siRNA) .脂质体转染法将其导入HCVIRES介导萤光素酶表达的转基因细胞 (HepG2 .970 6 )中 ,通过测定萤光素酶的量 ,评价T7siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用 .结果表明 ,... 以HCVIRES为靶位 ,应用T7RNA多聚酶体外转录合成了 5条小干扰RNA(siRNA) .脂质体转染法将其导入HCVIRES介导萤光素酶表达的转基因细胞 (HepG2 .970 6 )中 ,通过测定萤光素酶的量 ,评价T7siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用 .结果表明 ,所合成的 5条T7siRNAs ,均能特异性地抑制萤光素酶基因的表达 ,抑制率分别为 94 31%、80 0 1%、78 0 1%、80 33%、85 6 4% ,其中以靶向HCVIRES第二茎环结构的T7siRNA1抑制率最高 ,且对HCV基因的抑制作用有剂量依赖性 ,随T7siRNA1量的增加 ,抑制率逐渐增强 .siRNA抑制HCV基因的作用具有良好的特异性 ,改变其中 1个核苷酸即无显著抑制作用 . 展开更多
关键词 rna干涉 T7 sirna 萤光素酶 内部核糖体进入位点 丙型肝炎病毒
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hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用 被引量：5
11
作者 张志宏 曾永秋 +3 位作者 税青林 田强 黄燕 赵小平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期561-564,共4页
目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径。方法设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTC... 目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径。方法设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTCAGCGTGCTCAACTA,构建重组siRNA表达质粒pGenesil-hTERT,同时构建不针对任何基因的阴性对照重组pGenesil-HK。两种重组质粒经酶切、电泳分析和测序鉴定后,用脂质体转染法分别转染乳腺癌MCF-7细胞,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功。转染pGenesil-hTERT的MCF-7细胞,凝胶电泳见端粒酶特征性条带明显减少,端粒酶活性受到明显抑制;pGenesil-hTERT转染细胞后凋亡率较对照组明显升高(P<0.01),且转染48h凋亡率最高,达54.7%±2.41%。结论hTERT-siRNA可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性、促进细胞凋亡,此法有望应用于肿瘤基因治疗。 展开更多
关键词 rna干扰 sirna表达载体 基因 hTERT 细胞凋亡
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PCR扩增的shRNA表达盒快速筛选PRRSV有效siRNA序列 被引量：3
12
作者 贺云霞 华荣虹 +4 位作者 周艳君 安同庆 仇华吉 王云峰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期376-380,共5页
有效siRNA的筛选是RNAi研究的关键点之一。本研究选取猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核衣壳蛋白(N)作为靶基因,使用http://www.ambion.com的靶位点筛选和设计工具,选取4个siRNA序列(siRNA95、siRNA179、siRNA218和siRNA294),利用一步... 有效siRNA的筛选是RNAi研究的关键点之一。本研究选取猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核衣壳蛋白(N)作为靶基因,使用http://www.ambion.com的靶位点筛选和设计工具,选取4个siRNA序列(siRNA95、siRNA179、siRNA218和siRNA294),利用一步PCR法产生包含U6启动子的短发夹RNA表达盒技术快速筛选高效siRNA,PCR法制备的shRNA表达盒(PCR-shRNA95、PCR-shRNA179、PCR-shRNA218和PCR-shRNA294)分别与表达N-EGFP融合蛋白的重组质粒pEN-ORF7共转染至293T细胞,48 h后荧光显微镜下检测细胞表达EGFP阳性率,筛选有效siRNA片段,将筛选的PCR-shRNA179的PCR产物转染N-EGFP融合蛋白稳定表达293T细胞系和PRRSV感染的Marc-145细胞,结果表明PCR-shRNA179可明显减少N蛋白的表达、有效减轻PRRSV引起的细胞病变及减少感染PRRSV的Marc-145细胞中的N蛋白阳性细胞。本研究证明一步PCR扩增shRNA表达盒法可用于筛选特异性基因表达抑制的siRNA。 展开更多
关键词 rna干扰 sirna 短发夹rna(shrna) 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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siRNA对肺癌细胞株NCI-H460 bcl-2基因表达的影响 被引量：6
13
作者 胡海燕 张洹 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期174-179,共6页
目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转... 目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和Bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组Bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。 展开更多
关键词 小干扰rna BCL-2基因 大细胞肺癌细胞株 NCI—H460
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siRNA阻断NF-κB信号通路抑制宫颈癌HeLa229细胞的增殖及侵袭 被引量：4
14
作者 田卫红 田芳 +2 位作者 许培荣 刘红涛 薛乐勋 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2008年第10期1044-1047,共4页
目的通过RNA干扰阻断宫颈癌HeLa229细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药和侵袭力的关系。方法利用RNAi技术,将HeLa229分为转染组和对照组,MTT法检测细胞增殖,Boyden chamber体外侵袭实验检测细胞体外侵袭力。结果MTT实验表... 目的通过RNA干扰阻断宫颈癌HeLa229细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药和侵袭力的关系。方法利用RNAi技术,将HeLa229分为转染组和对照组,MTT法检测细胞增殖,Boyden chamber体外侵袭实验检测细胞体外侵袭力。结果MTT实验表明,转染组细胞存活率比对照组明显下降,联合应用化疗药,转染组和对照组细胞的存活率均随着5-Fu浓度的增加而下降,但在同一浓度,siRNA与5-Fu联合应用可明显提高HeLa229细胞对化疗药的敏感性。体外侵袭实验结果表明,和对照组相比,转染P65siRNA组穿越Matrigel胶的细胞数明显减少(P<0.05)。结论应用RNAi技术可有效阻断NF-κB信号通路,抑制宫颈癌细胞的增殖和体外侵袭力,增强对5-Fu的敏感性。因此,可将NF-κB信号通路作为宫颈癌基因治疗的靶点。 展开更多
关键词 宫颈癌 NF-KAPPAB rna干扰 sirna
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抑制CYP4A11基因表达的siRNAs优选及对血管收缩相关因子的影响 被引量：3
15
作者 李晋 胡静 +2 位作者 李健 石磊 赵树进 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第1期41-45,54,共6页
为了考察人细胞中细胞色素P450 4A11(CYP4A11)表达受抑制之后是否会影响血管相关收缩因子的表达,在线设计多个抑制细胞中代谢酶编码基因CYP4A11表达的siRNAs并通过BLAST验证;选择效果好的3对siRNAs合成并转染至EA.hy926细胞株,通过荧光... 为了考察人细胞中细胞色素P450 4A11(CYP4A11)表达受抑制之后是否会影响血管相关收缩因子的表达,在线设计多个抑制细胞中代谢酶编码基因CYP4A11表达的siRNAs并通过BLAST验证;选择效果好的3对siRNAs合成并转染至EA.hy926细胞株,通过荧光染色和定量多聚酶链反应(quantitative polumerase chain reaction,qPCR)初步检测后,再采用表达量相对更高的MG63细胞系进行验证,发现25 nmol/L的siRNA2抑制效果最好;随后使用25 nmol/L siRNA2抑制CYP4A11在EA.hy926细胞株中的表达,并通过qPCR与Western-blot检测血管收缩相关因子的表达情况,发现促血管收缩相关因子内皮素1受体(endothelin 1 receptor,ET1R)、血管紧张素1型受体(angiotensin type 1 receptor,AT1R)表达下调(P<0.05),而内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达显著上调(P<0.001)。因此,siRNA2能通过显著抑制EA.hy926细胞中CYP4A11的表达,调节血管紧张的相关指标,有促血管松弛作用的趋势。 展开更多
关键词 CYP4A11 小干扰rna(si rna) 血管收缩因子 内皮素1受体(ET1R) 血管紧张素1型受体(AT1R)
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siRNA干扰CHRNA5基因的表达抑制尼古丁对人肺癌细胞的促增殖作用 被引量：2
16
作者 赵云 马晓丽 +4 位作者 汪运山 郏雁飞 张雪萍 郑燕 肖东杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期604-608,共5页
目的:研究siRNA干扰尼古丁乙酰胆碱受体α5(cholinergic receptor nicotinic alpha5,CHRNA5)基因表达后对尼古丁促人肺癌A549细胞增殖作用的影响。方法:设计并合成CHRNA5-siRNA片段,并经脂质体介导转染A549细胞。荧光定量PCR、Western b... 目的:研究siRNA干扰尼古丁乙酰胆碱受体α5(cholinergic receptor nicotinic alpha5,CHRNA5)基因表达后对尼古丁促人肺癌A549细胞增殖作用的影响。方法:设计并合成CHRNA5-siRNA片段,并经脂质体介导转染A549细胞。荧光定量PCR、Western blotting检测转染后A549细胞中CHRNA5 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测CHRNA5-siRNA对尼古丁促A549细胞增殖作用的影响。结果:成功构建了CHRNA5-siRNA并成功转染A549细胞。CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的CHRNA5mRNA表达量明显低于si-NC转染对照组(0.196±0.044vs0.944±0.027,P<0.01),CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的CHRNA5蛋白表达量明显低于si-NC转染组(0.267±0.031vs0.745±0.035,P<0.01)。在无尼古丁作用时,CHRNA5-siRNA的转染不能抑制A549细胞的增殖。在尼古丁作用下,A549细胞增殖显著增加(P<0.01),CHRNA5-siRNA转染可明显抑制尼古丁的促增殖作用(P<0.01)。结论:siRNA下调肺癌A549细胞中CHRNA5的表达可以抑制尼古丁促细胞增殖作用,CHRNA5可能是肺癌治疗的潜在靶点之一。 展开更多
关键词 α5-尼古丁乙酰胆碱受体(CHrna5) sirna 肺癌 尼古丁 增殖
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siRNA对胆管癌细胞自分泌运动因子表达的影响 被引量：3
17
作者 刘斌 寇昌华 +4 位作者 谢应海 王人颢 李文美 任泽强 李向农 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2006年第5期291-293,共3页
目的研究针对自分泌运动因子(autotaxin,ATX)的小干扰RNA(siRNA)对人胆管癌细胞ATX基因表达的影响,探讨RNA干扰技术治疗胆管癌的前景。方法参考人黑色素瘤ENPP2基因序列,设计合成ATX-siRNA及随机阴性对照。在阳离子脂质体的介导下转染... 目的研究针对自分泌运动因子(autotaxin,ATX)的小干扰RNA(siRNA)对人胆管癌细胞ATX基因表达的影响,探讨RNA干扰技术治疗胆管癌的前景。方法参考人黑色素瘤ENPP2基因序列,设计合成ATX-siRNA及随机阴性对照。在阳离子脂质体的介导下转染人胆管癌细胞HCCC-9810。分别于转染后24,48,72h收集细胞,用半定量RT-PCR方法检测转染后ATXmRNA表达的变化,并与对照组及ATX表达抑制剂IL-1β的作用进行比较。结果体外合成的siRNA在转染胆管癌细胞24h后ATXmRNA的表达降低,48h抑制作用最为明显,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),并明显强于IL-1β(P<0.01)。结论siRNA可有效地抑制胆管癌细胞ATX的表达,从而有可能阻断ATX对肿瘤细胞运动的促进作用。 展开更多
关键词 sirna 人HCCC-9810胆管癌细胞 ATX 胆管肿瘤
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慢病毒介导uPA-siRNA重组表达载体的构建及促进兔软骨细胞增殖 被引量：5
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作者 史晨辉 王维山 +3 位作者 李长俊 张振东 郭风劲 陈安民 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第5期602-609,共8页
目的构建筛选出靶向特异uPA-siRNA慢病毒表达载体,感染软骨细胞后观察其对软骨细胞增殖及代谢的影响。方法根据siRNA原理设计、构建4对靶向兔uPA siRNA序列(P1、P2、P3和P4),用RT-PCR筛选出高效靶向的P2序列。各序列经慢病毒包装后,通过... 目的构建筛选出靶向特异uPA-siRNA慢病毒表达载体,感染软骨细胞后观察其对软骨细胞增殖及代谢的影响。方法根据siRNA原理设计、构建4对靶向兔uPA siRNA序列(P1、P2、P3和P4),用RT-PCR筛选出高效靶向的P2序列。各序列经慢病毒包装后,通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞后,用RT-PCR和Western blot法分别检测uPA-siRNA对细胞内uPA mRNA和蛋白表达水平的抑制效果,用CCK-8法检测uPA-siRNA对软骨细胞增殖的影响。结果成功构建4对uPA-siRNA序列并筛选出用于后续实验的高效靶向P2序列,各序列经慢病毒载体包装并成功转染到原代软骨细胞中,在感染复数(MOI)为100时感染率达到85%以上。P1、P2、P3和P4均可抑制软骨细胞中uPA基因及蛋白的表达,但P2沉默效果最好,基因抑制率达到70%,感染后软骨细胞的增殖受到促进。结论成功构建高效靶向uPA-siRNA慢病毒载体,证实其可稳定转染软骨细胞并高效抑制uPA基因表达并促进软骨细胞增殖。 展开更多
关键词 sirna rna干扰 慢病毒载体 软骨细胞 增殖
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siRNA CD31沉默PECAM-1对鼠源血管内皮瘤细胞VEGF表达的影响 被引量：2
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作者 欧阳金生 陈成水 +4 位作者 李玉苹 蔡畅 叶民 林全 陈俊杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期160-164,共5页
目的:研究siRNA CD31靶向沉默血管内皮细胞中血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule 1,PECAM-1)基因对鼠源性血管内皮瘤(murine hemangioendothelioma,EOMA)细胞增殖及其VEGF表达的影响。方法:实验分为... 目的:研究siRNA CD31靶向沉默血管内皮细胞中血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule 1,PECAM-1)基因对鼠源性血管内皮瘤(murine hemangioendothelioma,EOMA)细胞增殖及其VEGF表达的影响。方法:实验分为裸siRNA CD31组、siRNA CD31-FAM组、稳定阴性对照(SNC)组、空白对照(Opti-Med)组,以阳离子脂质体(RNAi-mate)为载体将化学合成的2'-O-甲基修饰的siRNA CD31转染体外培养的EOMA细胞,以激光共聚焦显微镜观察siRNA CD31的转染效果,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测siRNA CD31对EOMA细胞增殖的影响,以RT-PCR、Western blotting分别检测EOMA细胞中PECAM-1、VEGF的表达水平。结果:与SNC组和空白对照组比较,裸siRNA CD31和siRNA CD31-FAM转染的EOMA细胞中的PECAM-1 mRNA和蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表达量均显著降低(均P<0.01)。与SNC组比较,裸siRNA CD31组、siRNA CD31-FAM组的EOMA细胞增殖抑制率明显上升[(18.82±1.46)%、(18.91±2.21)%vs(0.61±1.06)%,均P<0.01]。结论:采用siRNA CD31-脂质体复合物沉默EOMA细胞中的PECAM-1基因可抑制VEGF mRNA和蛋白的表达,从而抑制EOMA细胞的增殖。 展开更多
关键词 小分子干扰rna 血小板内皮细胞黏附分子 血管内皮细胞生长因子 血管内皮瘤 细胞增殖
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烟草花叶病毒siRNA设计及其植物表达载体构建(英文) 被引量：2
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作者 马欣荣 谈心 +1 位作者 刘华玲 张义正 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期151-154,共4页
RNA干扰技术已广泛应用于沉默基因表达的研究.本文分析烟草花叶病毒(TMV)基因序列,选择设计编码小分子发卡结构RNA(hpRNA)的cDNA;并根据农杆菌双元载体质粒p2355多克隆位点区限制性酶切位点,两端分别加入XbaI和BamHI酶切位点;分别合成单... RNA干扰技术已广泛应用于沉默基因表达的研究.本文分析烟草花叶病毒(TMV)基因序列,选择设计编码小分子发卡结构RNA(hpRNA)的cDNA;并根据农杆菌双元载体质粒p2355多克隆位点区限制性酶切位点,两端分别加入XbaI和BamHI酶切位点;分别合成单链DNA复性后插入到p2355上,经PCR、测序验证,表明已成功构建了具有潜在表达烟草花叶病毒siRNA的植物表达载体. 展开更多
关键词 rna干扰(rnaI) 发卡rna(hprna) 小分子干扰rna(sirna) 烟草花叶病毒(TMV) 植物表达载体
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