目的 探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)通过Ras同源基因家族成员A(ras homolog gene family member A,RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(rho-associated protein kinase 1,ROCK1)信号通路调控尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)诱导的大鼠...目的 探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)通过Ras同源基因家族成员A(ras homolog gene family member A,RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(rho-associated protein kinase 1,ROCK1)信号通路调控尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(normal rat kidney cell-52E,NRK-52E)损伤的作用机制。方法 体外培养NRK-52E细胞,CCK8法检测不同浓度UⅡ对NRK-52E细胞的影响,并选择适宜的浓度进行后续实验。实验分组为:(1)对照组;(2)模型组;(3)UⅡ受体拮抗剂组;(4)AS-Ⅳ组;(5)RhoA激酶抑制剂(法舒地尔)组;(6)氯沙坦组。细胞免疫荧光法检测各组细胞中G蛋白偶联受体14、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、肾脏损伤因子1的表达情况;反转录聚合酶链反应法检测各组细胞中RhoA、ROCK1、α-SMA mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测每组细胞中RhoA、ROCK1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1蛋白的表达情况。结果(1)0 mol/L浓度UⅡ组的细胞活力为100%,10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6) mol/L浓度UⅡ组细胞活力分别为(51.52±0.15)%、(61.70±0.09)%、(71.90±0.17)%、(61.27±0.11)%、(52.73±0.13)%,说明UⅡ可对细胞造成一定的损伤,其中10~(-8) mol/L浓度的UⅡ对细胞损伤的影响低于其他4个组(P<0.05)。(2)免疫荧光结果显示:对照组、模型组、UⅡ受体拮抗剂组、AS-Ⅳ组、法舒地尔组、氯沙坦组α-SMA免疫荧光强度定量分析分别为(6.72±0.10)、(9.59±2.23)、(8.00±0.13)、(7.93±0.14)、(8.09±0.09)、(8.10±0.17);肾脏损伤因子1免疫荧光强度定量分析分别为(7.48±0.09)、(10.42±0.08)、(7.51±0.08)、(7.71±0.08)、(7.70±0.07)、(7.45±0.15);G蛋白偶联受体14免疫荧光强度定量分析分别为(4.05±0.07)、(8.00±0.06)、(5.04±0.02)、(6.03±0.07)、(6.02±0.08)、(6.02±0.09)。(3)反转录聚合酶链反应结果显示:对照组、模型组、UⅡ受体拮抗剂、AS-Ⅳ组、法舒地尔组、氯沙坦组α-SMA mRNA定量分析分别为(1.00±0.00)、(1.96±0.01)、(1.53±0.02)、(1.52±0.08)、(1.53±0.03)、(1.52±0.09);RhoA mRNA定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.10±0.02)、(1.44±0.02)、(1.55±0.03)、(1.53±0.07)、(1.66±0.04);ROCK1 mRNA定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.09±0.04)、(1.51±0.02)、(1.56±0.02)、(1.54±0.01)、(1.51±0.02)。(4)Western Blot结果显示:对照组、模型组、UⅡ受体拮抗剂、AS-Ⅳ组、法舒地尔组、氯沙坦组天冬氨酸蛋白水解酶1蛋白表达定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.53±0.03)、(1.57±0.01)、(1.55±0.09)、(1.56±0.06)、(1.56±0.01);RhoA蛋白表达定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.85±0.08)、(1.62±0.07)、(1.60±0.01)、(1.61±0.02)、(1.60±0.01);ROCK1蛋白表达定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.37±0.09)、(1.45±0.05)、(1.54±0.03)、(1.39±0.05)、(1.52±0.01)。结论 AS-Ⅳ可通过下调RhoA/ROCK1信号通路改善UⅡ诱导的NRK-52E细胞损伤。展开更多
