川南地区RHDV2的流行病学调查

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作者 刘杰 《中国动物保健》 2025年第6期134-135,共2页

本研究针对川南地区兔出血症病毒Ⅱ型(RHDV2)的流行特征与分子进化开展系统调查。通过2023—2024年分层抽样采集规模化兔场及散养户的临床与环境样本,结合血凝试验、RT-PCR及全基因组测序技术,揭示RHDV2在该地区的时空分布规律:2024年... 本研究针对川南地区兔出血症病毒Ⅱ型(RHDV2)的流行特征与分子进化开展系统调查。通过2023—2024年分层抽样采集规模化兔场及散养户的临床与环境样本,结合血凝试验、RT-PCR及全基因组测序技术,揭示RHDV2在该地区的时空分布规律:2024年阳性率较2023年增长15.4%,宜宾72.3%和泸州65.8%为高发区。本研究首次证实川南地区存在RHDV1—RHDV2自然重组毒株,为疫苗研发和区域化防控策略制定提供关键分子流行病学依据。 展开更多

关键词 rhdv2 流行病学调查 川南地区

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密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析 被引量：2

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作者 于吉锋 谢晶 +8 位作者 黄勇 肖璐 林毅 曹冶 叶勇刚 魏勇 吴学婧 李江凌 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期668-677,共10页

[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据... [目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因,将双VP60基因插入真核载体pFastBacTMDual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞,通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗,通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示,重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示,感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光,表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示,VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右,呈现球形结构,表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白,该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 兔出血症病毒2型(rhdv2) 病毒样颗粒(VLP) 密码子偏好性 重组杆状病毒 免疫原性

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经典RHDV与RHDV2对家兔致病性和组织嗜性的比较研究 被引量：1

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作者 肖璐 于吉锋 +11 位作者 谢晶 曹冶 叶勇刚 李兴玉 吴学婧 毛从剑 潘梦 叶健强 林毅 魏勇 杨竣雁 康润敏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第24期106-112,118,143,144,共10页

为了比较经典兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)对家兔的致病性与组织嗜性差异,试验将15只45~50日龄家兔随机分成3组,分别为经典RHDV攻毒组、RHDV2攻毒组和对照组,每组5只,经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组每只家兔分别皮下注射含... 为了比较经典兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)对家兔的致病性与组织嗜性差异,试验将15只45~50日龄家兔随机分成3组,分别为经典RHDV攻毒组、RHDV2攻毒组和对照组,每组5只,经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组每只家兔分别皮下注射含2×10^(8)copies/μL经典RHDV和RHDV2的病毒悬液1 mL,对照组每只家兔皮下注射PBS 1 mL,持续观察并记录每组的精神状态、体重变化、采食情况、运动状况和死亡情况,并于攻毒36 h后处死并剖检各组未死亡家兔。无菌采集各组肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、心脏、脑、胃、肠、蚓突、圆小囊进行石蜡切片制作、H.E.染色和组织病变观察。各组无菌多点位采集等量心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,提取病毒RNA反转录成cDNA后采用实时荧光定量PCR方法检测各组织中病毒载量。结果表明:攻毒后第6~10小时,经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组均表现为精神沉郁、厌食、静卧、嗜睡、反应迟钝、体重下降等临床症状。经典RHDV攻毒组于攻毒后第24~25小时死亡3只,死亡率为60%(3/5);RHDV2攻毒组于攻毒后第8~21小时全部死亡,死亡率达100%(5/5);对照组5只家兔均存活且无异常表现。剖检可见经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组气管环状出血,且RHDV2攻毒组气管中出现大量泡沫;经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组肝脏质脆、肿大、出血,肺脏严重出血,心脏有明显出血点,脾脏明显肿大,经典RHDV攻毒组的组织匀浆中仅检出经典RHDV,RHDV2攻毒组的组织匀浆中仅检出RHDV2。经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组的组织切片中可见多组织器官变性、坏死、扩张或淤血,其中RHDV2攻毒组肝脏和脾脏的损伤程度大于经典RHDV攻毒组;而蚓突、圆小囊和脑部未见明显病理变化;对照组所有组织器官均未见明显病变与异常。经典RHDV攻毒组内脏病毒载量从高到低依次为肝脏、脾脏、肾脏、肺脏和心脏;RHDV2攻毒组内脏病毒载量从高到低依次为肝脏、脾脏、肺脏、心脏和肾脏。RHDV2攻毒组肝脏、脾脏、肺脏病毒载量高于经典RHDV攻毒组,而心脏、肾脏病毒载量低于经典RHDV攻毒组。说明家兔感染经典RHDV或RHDV2后临床症状相似,相比经典RHDV,RHDV2的致病性更强;肝脏是经典RHDV或RHDV2侵染和定植的主要组织。 展开更多

关键词 兔瘟 兔出血症病毒(RHDV) 兔出血症病毒2型(rhdv2) 致病性 组织嗜性

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中国首例兔出血症病毒2型(RHDV2/b/GI.2)的鉴定及病理学观察 被引量：13

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作者 肖璐 于吉锋 +11 位作者 林毅 周泷 郭志强 谢晶 岳建国 叶勇刚 曹冶 李兴玉 潘梦 叶健强 李敏 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期348-355,共8页

本试验旨在鉴定四川金堂某兔场疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)感染疫情的病原,并分析病兔的病理组织学变化。利用血凝试验和RT-PCR检测病死兔内脏组织中的病原,取病变组织制作病理切片,观察分析各组织的病理组织学变化,同时应用病兔肝脏悬... 本试验旨在鉴定四川金堂某兔场疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)感染疫情的病原,并分析病兔的病理组织学变化。利用血凝试验和RT-PCR检测病死兔内脏组织中的病原,取病变组织制作病理切片,观察分析各组织的病理组织学变化,同时应用病兔肝脏悬液感染幼兔,分析该毒株的致病力。血凝试验结果显示,所采集病死兔肝脏样品能凝集人“O”型血红细胞;RT-PCR扩增及测序结果显示,多对引物均能从样品中扩增出RHDV2特异性条带;病理组织学观察结果显示,病兔多脏器严重出血、肿胀,淋巴细胞和中性粒细胞大量浸润,气管黏膜、肝脏、肺脏出血尤为严重;动物试验结果显示,该毒株毒力较强,含毒肝脏悬液能在24 h内迅速致死幼兔。本研究经临床诊断、核酸检测及测序证实了此次疫情确由RHDV2感染引起,动物试验和病理组织学观察表明该毒株毒力较强,可引发脏器严重出血,造成病兔急性死亡,RHDV2的出现提示病毒的跨境传播情况不容乐观,应引起更大的重视。 展开更多

关键词 兔瘟 兔出血症病毒2型(rhdv2/b/GI.2) 病理组织学 致病力

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新型兔出血症病毒(RHDV2)VP60蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：3

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作者 谭永贵 朱杰 +4 位作者 郭慧敏 吴巧梅 陈宗艳 李传峰 刘光清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期332-337,共6页

为了表达含有新型兔出血症病毒(RHDV2)衣壳蛋白VP60基因的重组蛋白,利用合成的含VP1基因的质粒pUC-VP60为模板,通过PCR扩增获得VP60基因,并将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-32a(+)-VP60。转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株... 为了表达含有新型兔出血症病毒(RHDV2)衣壳蛋白VP60基因的重组蛋白,利用合成的含VP1基因的质粒pUC-VP60为模板,通过PCR扩增获得VP60基因,并将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-32a(+)-VP60。转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达VP60重组蛋白,纯化重组蛋白并免疫小鼠,制备抗VP60的多克隆抗体。Western-blot分析和间接免疫荧光试验检测结果显示,该抗体具有良好的免疫原性。本试验成功制备的VP60蛋白及多克隆抗体,为预防RHDV2及RHDV2 VP60的功能研究奠定了良好基础。 展开更多

关键词 新型兔出血症病毒 原核表达 多克隆抗体

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饲粮中添加兔瘟卵黄抗体对幼兔血清抗体效价影响研究

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作者 任永军 袁定胜 +2 位作者 杨泽晓 邝良德 郭志强 《中国养兔》 2025年第4期20-22,共3页

本研究选用无RHDV、RHDV2抗体35日龄断奶仔兔120只,分为4组,每组30只,分别为对照组与试验1、2、3组,试验1、2、3组每千克饲粮中分别添加兔病毒病出血症卵黄抗体0.4、0.6、0.8 g,对照组空白对照,每组设5个重复,每个重复6只(公母各半),在... 本研究选用无RHDV、RHDV2抗体35日龄断奶仔兔120只,分为4组,每组30只,分别为对照组与试验1、2、3组,试验1、2、3组每千克饲粮中分别添加兔病毒病出血症卵黄抗体0.4、0.6、0.8 g,对照组空白对照,每组设5个重复,每个重复6只(公母各半),在试验开始后第7、14、28、42天,分别耳缘静脉采集各组试验兔血液并分离血清,并检测RHDV、RHDV2抗体水平。试验结果显示,对照组在第7、14、28、42天抗RHDV、RHDV2抗体水平均为0;试验1组抗RHDV抗体水平分别为1∶50、1∶200、1∶500、1∶1000,抗RHDV2抗体水平分别为1∶50、1∶100、1∶500、1∶1000;试验2组抗RHDV抗体水平分别为1∶100、1∶300、1∶1000、1∶2000,抗RHDV2抗体水平分别为1∶50、1∶200、1∶1000、1∶1000;试验3组抗RHDV抗体水平分别为1∶200、1∶500、1∶2000、1∶2000,抗RHDV2抗体水平分别为1∶200、1∶500、1∶2000、1∶2000。结果表明,当每千克饲粮中添加兔病毒性出血症卵黄抗体添加量为0.8 g时,幼兔在第14天可获得较高的RHDV、RHDV2抗体水平,且随使用时间的增加,抗体效价呈上升趋势。 展开更多

关键词 RHDV rhdv2 卵黄抗体 抗体效价

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兔出血症病毒2型的分离鉴定与序列分析 被引量：27

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作者 魏后军 胡波 +5 位作者 范志宇 宋艳华 仇汝龙 陈萌萌 薛家宾 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期404-409,共6页

兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种具有高度传染性、急性致死性兔病。兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的RHD主要在欧洲流行,病兔的死亡率高达90%,而用经典RHDV... 兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种具有高度传染性、急性致死性兔病。兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的RHD主要在欧洲流行,病兔的死亡率高达90%,而用经典RHDV毒株制备的疫苗几乎不能预防家兔感染RHDV2,从而给世界养兔业造成了巨大的经济损失。2020年4月,中国四川省某兔场首次发生由疑似RHDV2引起的RHD,笔者所在实验室通过红细胞凝集试验(Hemagglutination,HA)、逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增、vp60基因序列分析和病毒复制试验,对采集的病死家兔肝脏样本进行病原鉴定。HA结果显示,部分病死家兔的肝脏样本不能引起血凝现象;RT-PCR结果显示,样品中出现了RHDV2的特异性条带。对新发现毒株cDNA的RT-PCR产物进一步分析发现,所扩增vp60基因核苷酸序列与经典RHDV vp60基因核苷酸序列的一致性为77.5%~80.1%,与RHDV2 vp60基因核苷酸序列的一致性为93.6%~96.1%,并且与RHDV2处于同一个进化分支。病毒复制试验结果显示,用病死家兔肝脏组织与磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffer saline,PBS)按1 g∶10 ml混合后制成的悬液分别人工感染5只非免疫25日龄未断奶仔兔和5只2月龄兔,在24~48 h全部死亡。基于以上试验结果,确定本研究新发现的RHDV毒株为RHDV2,并将其命名为SC2020,这是在中国首次发现RHDV2毒株,应引起高度重视。 展开更多

关键词 兔出血症 兔出血症病毒2型(rhdv2) VP60基因 鉴定 序列分析

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兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR鉴定 被引量：16

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作者 宋艳华 魏后军 +8 位作者 范志宇 左园园 胡波 仇汝龙 陈萌萌 李明勇 薛家宾 徐为中 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期1117-1121,共5页

本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-... 本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-2和p MD19-T-VP60为模板,进行RT-PCR体系退火温度的优化,优化后的退火温度为58.2℃。对优化后的RT-PCR体系进行RHDV和RHDV2的敏感性试验、特异性试验,并用于检测RHDV人工感染样品和疑似临床样品,结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95拷贝和76拷贝的靶基因片段,且对支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒p MD19-T-EBHSV的检测结果均为阴性。RHDV人工感染的组织样品检出率为100%,15份临床样品中3份为经典RHDV阳性,其他均为经典RHDV及RHDV2阴性。该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2,为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑。 展开更多

关键词 兔出血症病毒经典毒株(RHDV) 兔出血症病毒变异毒株(rhdv2) RT-PCR鉴定

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四川省兔出血症病毒2型流行病学调查及遗传变异分析 被引量：6

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作者 李丽 陈弟诗 +5 位作者 陈斌 张毅 邓飞 邵靓 周莉媛 任永军 《中国动物检疫》 CAS 2022年第5期42-48,共7页

为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品... 为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品3825份,采用商品化荧光RT-PCR试剂盒,对以上样品进行RHDV2检测;对筛选出的12份肝组织阳性样品进行RHDV2 VP60基因RT-PCR扩增、测序和遗传进化分析。结果显示:RHDV2流行无明显季节性,各养殖品系家兔均有RHDV2感染,哺乳仔兔、幼兔、怀孕哺乳母兔死亡率分别为25%~60%、18%~45%、9%~30%。发病兔场肝脏样品RHDV2阳性检出率为88.89%(104/117),环境样品为46.09%(112/243);受监测兔场全血样品RHDV2阳性检出率为25.99%(868/3340),环境样品为16.29%(623/3825)。12份阳性样品的RHDV2 VP60基因序列长度均为1740 bp,核苷酸序列同源性为98.4%~100%,在系统发生进化树上独成一簇;与国内外参照毒株的VP60基因序列核苷酸同源性为93.7%~100%,编码的氨基酸序列同源性为95.7%~99.8%。结果表明:RHDV2已开始在四川省流行,需要加强检疫,重视饲养管理工作;其VP60基因序列出现了一定程度的变异,但遗传演化相对稳定。本研究补充了国内RHDV2的分子流行病学信息,也为该病的相关防控研究和控制对策制定提供了参考。 展开更多

关键词 兔出血症病毒2型(rhdv2) 流行病学调查 遗传变异分析 四川省

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兔出血症病毒2型的VP60基因保守区人工合成及RT-PCR检测方法初探 被引量：3

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作者 杨泽晓 赵希仑 +6 位作者 李岩 王波 姚学萍 王印 耿毅 蒙正群 白瑜 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第10期1650-1656,共7页

为建立用于兔出血症病毒2型(RHDV2)的快速检测方法,根据Gen Bank已公布的RHDV和RHDV2VP60基因,设计合成2对特异性引物和10条末端重叠引物,通过重叠PCR人工合成RHDV2 VP60基因中保守区片段,构建重组质粒,并以其为模板,经过反应条件优化... 为建立用于兔出血症病毒2型(RHDV2)的快速检测方法,根据Gen Bank已公布的RHDV和RHDV2VP60基因,设计合成2对特异性引物和10条末端重叠引物,通过重叠PCR人工合成RHDV2 VP60基因中保守区片段,构建重组质粒,并以其为模板,经过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验和35份样品检测应用,初步建立RHDV2 RT-PCR检测方法。实验成功合成RHDV2 VP60基因的435 bp保守片段并构建了p MD-19T-RHDV2重组质粒,初步建立的RHDV2 RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,RHDV2的检测限度可达到230个拷贝的靶基因片段,检测RHDV、p GM-T-EBHSV(已构建)、兔巴氏杆菌、兔源大肠埃希菌和沙门氏菌均无特异性扩增,样品检测结果显示样品中RHDV2核酸阴性。该研究为中国及时进行RHDV2的防控提供技术储备。 展开更多

关键词 兔病毒性出血症 rhdv2 RT-PCR 重叠PCR

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Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型VP60蛋白重组腺病毒的构建及鉴定 被引量：3

11

作者 肖璐 于吉锋 +11 位作者 罗燕 谢晶 叶勇刚 吴学婧 毛从剑 李兴玉 曹冶 林毅 潘梦 叶健强 魏勇 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3336-3344,共9页

【目的】试验旨在以复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体,构建Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型(RHDV2)VP60蛋白的重组腺病毒,为RHDV2新型疫苗研究提供依据。【方法】修饰、合成带有Kozak序列的VP 60基因序列,将其与腺病毒穿梭质粒进... 【目的】试验旨在以复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体,构建Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型(RHDV2)VP60蛋白的重组腺病毒,为RHDV2新型疫苗研究提供依据。【方法】修饰、合成带有Kozak序列的VP 60基因序列,将其与腺病毒穿梭质粒进行重组,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,构建重组腺病毒穿梭质粒,并利用酶切与测序对重组腺病毒穿梭质粒进行鉴定;采用Ad Max腺病毒包装系统,基于HEK293细胞进行穿梭质粒与腺病毒骨架质粒的定点同源重组,构建重组腺病毒Ad5-RHDV2-VP60并感染HEK293细胞,通过RT-PCR、Western blotting及间接免疫荧光试验(IFA)对重组腺病毒进行表达验证;利用Reed-Muench方法测定重组腺病毒的病毒滴度。【结果】重组腺病毒穿梭质粒酶切鉴定结果可见2条大小分别为3895和1752 bp的条带,测序比对结果显示,其与GenBank中公布的相应序列相似性>99%,表明穿梭质粒构建成功。RT-PCR结果可见大小约为515 bp的特异性条带;Western blotting结果显示,大小约为60 ku的VP60蛋白特异性条带;IFA观察结果显示,感染重组腺病毒的HEK293细胞产生了绿色荧光,表明重组病毒能在HEK293细胞中表达VP60蛋白,且该蛋白具有良好的抗原性;病毒滴度测定结果显示,初代重组腺病毒的TCID_(50)为10^(5.5)/0.1 mL。【结论】本试验构建了含RHDV2 VP 60基因的重组腺病毒,并成功表达了RHDV2 VP60蛋白,为进一步研究开发RHDV2疫苗提供了病毒模型。 展开更多

关键词 兔瘟 兔出血症病毒2型(rhdv2) 重组腺病毒 HEK293细胞 KOZAK序列

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兔出血症病毒与兔出血症病毒2型复合RT-PCR检测方法的初步研究 被引量：8

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作者 杨泽晓 赵希仑 +6 位作者 李岩 姚学萍 王印 刘亚东 蒙正群 耿毅 白瑜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期710-716,共7页

为建立用于兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)鉴别诊断的检测方法。根据Gen Bank已公布的RHDV和RHDV2的VP60基因,设计合成6对特异性引物和10条搭桥引物,采用RT-PCR和搭桥PCR技术分别获取RHDV和RHDV2的VP60基因中保守区片段,... 为建立用于兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)鉴别诊断的检测方法。根据Gen Bank已公布的RHDV和RHDV2的VP60基因,设计合成6对特异性引物和10条搭桥引物,采用RT-PCR和搭桥PCR技术分别获取RHDV和RHDV2的VP60基因中保守区片段,构建重组质粒p MD-19T-RHDV2、p MD-19T-RHDV441和p MD-19T-RHDV294,并以其为模板,经过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及人工感染RHDV样品和临床样品的应用,对RHDV与RHDV2的复合RT-PCR检测方法进行了初步研究。结果显示,建立的RHDV与RHDV2复合RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可分别扩增出RHDV和RHDV2的VP60保守区基因片段大小为294 bp和435 bp,RHDV与RHDV2的检测限度分别为160和230个拷贝的靶基因片段,而p GM-T-EBHSV(已构建)、兔巴氏杆菌、兔源大肠杆菌和沙门菌等病原的检测结果均为阴性。样品检测结果显示,人工感染样品的RHDV检出率为100%(5/5),30份临床检样RHDV和RHDV2检测结果均为阴性。 展开更多

关键词 兔出血症病毒 兔出血症病毒2型 RT-PCR 搭桥PCR

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兔出血症病毒2型检测技术的研究进展

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作者 肖璐 邬旭龙 +3 位作者 王印 江地科 张鹏飞 杨蓉 《四川畜牧兽医》 2022年第8期40-43,共4页

本文针对近年来国内外兔出血症病毒2型(RHDV2)检测方法和诊断技术的研究进展进行综述,旨在为RHDV2的早诊、监测和预防提供技术参考。

关键词 兔出血症病毒2型(rhdv2) 检测方法 研究进展

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一株兔出血症病毒2型鉴定与vp60基因序列分析 被引量：2

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作者 李敏 黄云川 +5 位作者 黄迪 李原野 周立新 石湉 叶斌 岳建国 《畜牧兽医科学（电子版）》 2020年第14期1-4,共4页

兔病毒性出血症2型是由兔病毒属兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的一种剧烈性、高度致死性兔传染病,主要病变为以实质器官出血。2010年该病在法国首次被发现,主要在欧洲流行,病兔死亡率高达80%以上。2020年4月,四川金堂县某兔场发生急性死... 兔病毒性出血症2型是由兔病毒属兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的一种剧烈性、高度致死性兔传染病,主要病变为以实质器官出血。2010年该病在法国首次被发现,主要在欧洲流行,病兔死亡率高达80%以上。2020年4月,四川金堂县某兔场发生急性死亡病例,死亡率高达56.3%,初步怀疑为RHDV2感染。实验室对采集病料进行RT-PCR扩增、基因序列分析和病毒复制试验,结果显示其vp60基因核苷酸序列与经典RHDV的vp60基因核苷酸序列一致性为77.85%~80.94%,与RHDV2的vp60基因核苷酸序列的一致性为93.81%~97.77%,与RHDV2位于同一个进化分支。病毒复制试验显示,用病死家兔内脏组织悬液人工感染2月龄家兔(已免疫RHDV vp60株灭活苗),5只家兔在24~36 h内全部死亡,提取其内脏混合物RNA进行RT-PCR扩增并测序,结果显示其与发病兔场分离毒株一致。鉴定本次分离得到的毒株为RHDV2,并将其命名为CD202004,该毒株的发现为RHDV2检测试剂的研发和疫苗的研制提供基础。 展开更多

关键词 兔病毒性出血症2型(rhdv2) VP60基因 RT-PCR 序列分析

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1例兔出血症病毒2型感染疫情的诊断 被引量：6

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作者 常赵阳 刘玉梅 +3 位作者 刘潍萁 王佳宁 位兰 张自强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1886-1894,共9页

旨在了解河南疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)的感染情况,并对RHDV2的致病性进行初步分析。本研究采集病死兔的肝组织,利用微量血凝试验、RT-PCR扩增及测序、VP60基因系统进化树分析和动物回归试验进行病原鉴定。微量血凝试验结果显示,组织... 旨在了解河南疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)的感染情况,并对RHDV2的致病性进行初步分析。本研究采集病死兔的肝组织,利用微量血凝试验、RT-PCR扩增及测序、VP60基因系统进化树分析和动物回归试验进行病原鉴定。微量血凝试验结果显示,组织样本悬液能够凝集人“O”型血红细胞;RT-PCR扩增、测序及序列分析结果显示,检测到RHDV2特异性条带,片段大小为829 bp;系统进化树分析结果发现,分离的病毒与我国四川发现的首例RHDV2毒株SC2020/04的VP60基因相似性高达98.2%;临床病例的剖检显示病死兔胸腺、气管、肺、肝、脾、肾等实质性器官出血较为严重;动物回归试验发现攻毒组家兔死亡率为100%,平均死亡时间为65.8 h,RT-PCR扩增均检测到RHDV2特异性条带。本研究首次在河南兔场检测到RHDV2,为RHDV2的防控提供了科学参考。 展开更多

关键词 兔出血症病毒1型 兔出血症病毒2型 VP60基因 RT-PCR 致病力

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兔病毒性出血症卵黄抗体对育肥兔抗体效价变化研究

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作者 任永军 袁定胜 +2 位作者 杨泽晓 邝良德 郭志强 《中国养兔》 2024年第5期13-15,共3页

选用无RHDV、RHDV2母源抗体35日龄断奶仔兔120只,分为4组,每组30只,分别为对照组与试验1、2、3组,试验1、2、3组每千克饲粮中分别添加兔病毒病出血症卵黄抗体0.4、0.6、0.8 g,对照组空白对照,每组设5个重复,每个重复6只(公母各半),在试... 选用无RHDV、RHDV2母源抗体35日龄断奶仔兔120只,分为4组,每组30只,分别为对照组与试验1、2、3组,试验1、2、3组每千克饲粮中分别添加兔病毒病出血症卵黄抗体0.4、0.6、0.8 g,对照组空白对照,每组设5个重复,每个重复6只(公母各半),在试验开始后第7、14、28、42天,分别耳缘静脉采集各组试验兔血液并分离血清,并检测RHDV、RHDV2抗体水平。试验结果显示:对照组在第7、14、28、42天抗RHDV、RHDV2抗体水平均为0;试验1组抗RHDV抗体水平分别为1∶50、1∶200、1∶500、1∶1000,抗RHDV2抗体水平分别为1:50、1∶100、1∶500、1∶1000;试验2组抗RHDV抗体水平分别为1∶100、1∶300、1∶1000、1∶2000,抗RHDV2抗体水平分别为1∶50、1∶200、1∶1000、1∶1000;试验3组抗RHDV抗体水平分别为1∶200、1∶500、1∶2000、1∶2000,抗RHDV2抗体水平分别为1∶200、1∶500、1∶2000、1∶2000。说明当每千克饲粮中添加兔病毒性出血症卵黄抗体添加量为0.8 g时,育肥兔在14 d就可获得较高的RHDV、RHDV2抗体水平。 展开更多

关键词 RHDV rhdv2 卵黄抗体 抗体效价

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兔病毒性出血症二价口服疫苗免疫抗体水平测定

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作者 任永军 杨泽晓 +1 位作者 袁定胜 邝良德 《中国养兔》 2024年第4期18-20,24,共4页

为验证兔病毒性出血症二价口服疫苗(AN301,R301-1)饮水免疫的免疫效果,分别选择母兔和商品兔进行了饮水免疫1次,取免疫后7、14、21、28、42 d等时间点采集血清样品,并按照一定浓度梯度稀释后分别采用间接ELISA和阻断ELISA进行了RHDV1和R... 为验证兔病毒性出血症二价口服疫苗(AN301,R301-1)饮水免疫的免疫效果,分别选择母兔和商品兔进行了饮水免疫1次,取免疫后7、14、21、28、42 d等时间点采集血清样品,并按照一定浓度梯度稀释后分别采用间接ELISA和阻断ELISA进行了RHDV1和RHDV2的抗体水平检测。结果显示,受试母兔免疫后14、28 d、产仔后7和14 d期间RHDV1和RHDV2抗体效价都在1∶1000~1∶8000之间,抗体水平增加并趋于稳定;商品兔免疫7、14、28、42 d期间RHDV1和RHDV2抗体水平都在1∶1000~1∶8000之间,抗体水平增加并趋于稳定。说明兔病毒性出血症二价口服疫苗(AN301,R301-1)饮水免疫后可刺激母兔和商品兔产生相对稳定的RHDV1和RHDV2的抗体水平,为该疫苗的进一步推广应用提供了科学参考。 展开更多

关键词 RHDV1 rhdv2 二价口服疫苗

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兔出血症病毒2型感染的病例诊断

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作者 常赵阳 刘玉梅 +3 位作者 刘潍淇 王佳宁 位兰兰 张自强 《中国养兔》 2022年第3期4-9,共6页

为了解河南疑似兔出血症病毒2型(RHDV)的感染情况,并对RHDV的致病性进行初步分析。研究采集病死兔的肝组织,利用微量血凝试验、RT-PCR扩增及测序、VP60基因系统进化树分析和动物回归试验进行病原鉴定。微量血凝试验结果显示,组织样本悬... 为了解河南疑似兔出血症病毒2型(RHDV)的感染情况,并对RHDV的致病性进行初步分析。研究采集病死兔的肝组织,利用微量血凝试验、RT-PCR扩增及测序、VP60基因系统进化树分析和动物回归试验进行病原鉴定。微量血凝试验结果显示,组织样本悬液能够凝集人“O”型血红细胞;RT-PCR扩增、测序及序列分析结果显示,检测到RHDV特异性条带,片段大小为829 bp;系统进化树分析结果发现,分离的病毒与我国四川发现的首例RHDV毒株SC2020/04的VP60基因相似性高达98.2%;临床病例的剖检显示病死兔胸腺、气管、肺、肝、脾、肾等实质性器官出血较为严重;动物回归试验发现攻毒组家兔病死率为100%,平均死亡时间为65.8 h,RT-PCR扩展均检测到RHDV特异性条带。该研究是首次在河南兔场检测到RHDV,为RHDV的防控提供科学参考。 展开更多

关键词 兔出血症病毒1型 兔出血症病毒2型 VP60基因 RT-PCR 致病力

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