期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到140篇文章
< 1 2 … 7 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
融合表达RHDV1 P2亚域和兔源C5a的重组早熟大型艾美耳球虫的构建与鉴定
1
作者 陈文轩 索静霞 +6 位作者 孔嘉华 葛晓敏 裘鑫珠 汤新明 余芳 索勋 刘贤勇 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第10期9-17,共9页
补体成分C5a作为免疫调节分子,近年已被证实可作为分子佐剂应用于新型疫苗开发。为了探索C5a作为球虫活载体疫苗分子佐剂的可行性,本试验通过同源序列比对和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增兔补体C5a基因,并通过生物信息学方法对兔C5... 补体成分C5a作为免疫调节分子,近年已被证实可作为分子佐剂应用于新型疫苗开发。为了探索C5a作为球虫活载体疫苗分子佐剂的可行性,本试验通过同源序列比对和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增兔补体C5a基因,并通过生物信息学方法对兔C5a序列和C5a蛋白质二、三级结构进行预测和分析;构建包含兔出血症病毒1型(RHDV1)的VP60蛋白P2亚域基因和C5a基因的质粒,通过子孢子核转染和在家兔体内连续传代获得转基因早熟大型艾美耳球虫,采用聚合酶链式反应(PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)对该转基因虫株进行鉴定。结果显示,兔C5a基因大小为222 bp,与人、猪和牛的C5a核苷酸序列同源性为71.2%~77.0%,与小鼠和大鼠的C5a核苷酸系列同源性为68.5%。预测结果显示,C5a是主要由4个α螺旋构成的单体蛋白,含有过敏毒素同源结构域。本试验获得了第1代发荧光的卵囊并连续传代至第15代,其中第9代转基因虫株的发光率最高(39.5%,满足鉴定阈值),对其鉴定结果显示,P2-C5a基因已成功插入并在虫株中表达,表达的P2-C5a融合蛋白主要定位于子孢子胞浆中。结果表明,转基因早熟大型艾美耳球虫初步构建成功,为后续进行C5a在转基因早熟大型艾美耳球虫中的佐剂效应研究提供了材料。 展开更多
关键词 早熟大型艾美耳球虫 兔出血症病毒1型(rhdv1) P2亚域 补体C5A
在线阅读 下载PDF
川南地区RHDV2的流行病学调查
2
作者 刘杰 《中国动物保健》 2025年第6期134-135,共2页
本研究针对川南地区兔出血症病毒Ⅱ型(RHDV2)的流行特征与分子进化开展系统调查。通过2023—2024年分层抽样采集规模化兔场及散养户的临床与环境样本,结合血凝试验、RT-PCR及全基因组测序技术,揭示RHDV2在该地区的时空分布规律:2024年... 本研究针对川南地区兔出血症病毒Ⅱ型(RHDV2)的流行特征与分子进化开展系统调查。通过2023—2024年分层抽样采集规模化兔场及散养户的临床与环境样本,结合血凝试验、RT-PCR及全基因组测序技术,揭示RHDV2在该地区的时空分布规律:2024年阳性率较2023年增长15.4%,宜宾72.3%和泸州65.8%为高发区。本研究首次证实川南地区存在RHDV1—RHDV2自然重组毒株,为疫苗研发和区域化防控策略制定提供关键分子流行病学依据。 展开更多
关键词 rhdv2 流行病学调查 川南地区
在线阅读 下载PDF
经典RHDV与RHDV2对家兔致病性和组织嗜性的比较研究 被引量：1
3
作者 肖璐 于吉锋 +11 位作者 谢晶 曹冶 叶勇刚 李兴玉 吴学婧 毛从剑 潘梦 叶健强 林毅 魏勇 杨竣雁 康润敏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第24期106-112,118,143,144,共10页
为了比较经典兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)对家兔的致病性与组织嗜性差异,试验将15只45~50日龄家兔随机分成3组,分别为经典RHDV攻毒组、RHDV2攻毒组和对照组,每组5只,经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组每只家兔分别皮下注射含... 为了比较经典兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)对家兔的致病性与组织嗜性差异,试验将15只45~50日龄家兔随机分成3组,分别为经典RHDV攻毒组、RHDV2攻毒组和对照组,每组5只,经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组每只家兔分别皮下注射含2×10^(8)copies/μL经典RHDV和RHDV2的病毒悬液1 mL,对照组每只家兔皮下注射PBS 1 mL,持续观察并记录每组的精神状态、体重变化、采食情况、运动状况和死亡情况,并于攻毒36 h后处死并剖检各组未死亡家兔。无菌采集各组肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、心脏、脑、胃、肠、蚓突、圆小囊进行石蜡切片制作、H.E.染色和组织病变观察。各组无菌多点位采集等量心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,提取病毒RNA反转录成cDNA后采用实时荧光定量PCR方法检测各组织中病毒载量。结果表明:攻毒后第6~10小时,经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组均表现为精神沉郁、厌食、静卧、嗜睡、反应迟钝、体重下降等临床症状。经典RHDV攻毒组于攻毒后第24~25小时死亡3只,死亡率为60%(3/5);RHDV2攻毒组于攻毒后第8~21小时全部死亡,死亡率达100%(5/5);对照组5只家兔均存活且无异常表现。剖检可见经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组气管环状出血,且RHDV2攻毒组气管中出现大量泡沫;经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组肝脏质脆、肿大、出血,肺脏严重出血,心脏有明显出血点,脾脏明显肿大,经典RHDV攻毒组的组织匀浆中仅检出经典RHDV,RHDV2攻毒组的组织匀浆中仅检出RHDV2。经典RHDV攻毒组和RHDV2攻毒组的组织切片中可见多组织器官变性、坏死、扩张或淤血,其中RHDV2攻毒组肝脏和脾脏的损伤程度大于经典RHDV攻毒组;而蚓突、圆小囊和脑部未见明显病理变化;对照组所有组织器官均未见明显病变与异常。经典RHDV攻毒组内脏病毒载量从高到低依次为肝脏、脾脏、肾脏、肺脏和心脏;RHDV2攻毒组内脏病毒载量从高到低依次为肝脏、脾脏、肺脏、心脏和肾脏。RHDV2攻毒组肝脏、脾脏、肺脏病毒载量高于经典RHDV攻毒组,而心脏、肾脏病毒载量低于经典RHDV攻毒组。说明家兔感染经典RHDV或RHDV2后临床症状相似,相比经典RHDV,RHDV2的致病性更强;肝脏是经典RHDV或RHDV2侵染和定植的主要组织。 展开更多
关键词 兔瘟 兔出血症病毒(rhdv) 兔出血症病毒2型(rhdv2) 致病性 组织嗜性
原文传递
密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析 被引量：2
4
作者 于吉锋 谢晶 +8 位作者 黄勇 肖璐 林毅 曹冶 叶勇刚 魏勇 吴学婧 李江凌 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期668-677,共10页
[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据... [目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因,将双VP60基因插入真核载体pFastBacTMDual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞,通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗,通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示,重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示,感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光,表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示,VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右,呈现球形结构,表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白,该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒2型(rhdv2) 病毒样颗粒(VLP) 密码子偏好性 重组杆状病毒 免疫原性
在线阅读 下载PDF
测定RHDV抗体的间接ELISA方法的建立 被引量：4
5
作者 陈兴祥 薛家宾 +2 位作者 徐为中 周永银 诸玉梅 《江苏农业学报》 CSCD 2003年第4期233-236,共4页
　通过氯仿和PEG6000处理,SephadexG 200层析纯化RHDV抗原,建立了检测RHDV抗体的间接ELISA试验方法。该方法的抗原最适包被浓度为10μg/ml,血清样品最佳稀释度为1∶400。与血凝抑制试验方法(HI)等相比,该方法具有快速、简单、特异性和... 　通过氯仿和PEG6000处理,SephadexG 200层析纯化RHDV抗原,建立了检测RHDV抗体的间接ELISA试验方法。该方法的抗原最适包被浓度为10μg/ml,血清样品最佳稀释度为1∶400。与血凝抑制试验方法(HI)等相比,该方法具有快速、简单、特异性和重复性好等优点。 展开更多
关键词 rhdv抗体 间接ELISA方法 测定技术 抗原 血清样品 兔 出血症病毒
在线阅读 下载PDF
RHDV VLPs单克隆抗体的制备及其识别表位的初步定位 被引量：1
6
作者 宋艳华 胡波 +5 位作者 范志宇 彭伟 魏后军 薛家宾 徐为中 王芳 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期65-70,共6页
为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,将重组杆状病毒r Ac V-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。将RH... 为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,将重组杆状病毒r Ac V-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。将RHDV VLPs作为免疫原与等量弗氏佐剂乳化,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次亚克隆后,获得11株能稳定分泌抗RHDV VLPs抗体的阳性杂交瘤细胞株。间接ELISA、IFA和Western Blot鉴定结果表明,这11株单克隆抗体均能够特异地识别RHDV VLPs和天然RHDV。11株单抗均为Ig G1,其中1D4和3F7的轻链为Lambda型,其余均为Kappa型。截短表达结果显示,单抗5A3针对RHDV VP60的NTA区,5F3针对RHDV VP60的S区,单抗1B8、1D4、3D11、3F7、4C2、4G2、5G2、5H3和6B2针对RHDV VP60的P区。研究为RHDV VLPs抗原表位的鉴定和RHDV结构功能的研究奠定了基础,同时为RHDV的检测和新型疫苗研究提供物质基础。 展开更多
关键词 rhdv VLPS 单克隆抗体 表位 初步定位
在线阅读 下载PDF
RHDV在多种属动物体内分布及细胞免疫水平 被引量：1
7
作者 金明兰 侯继波 +6 位作者 郑其升 鲁会军 刘春霞 南文龙 任静强 韩松 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期645-649,共5页
应用纯化兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV),接种小鼠、豚鼠、SPF鸡、仔猪4d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR,进行体内分布检测;同时将上述动物进行3次免疫,三免后10d分离外周血淋巴细胞进行IFN... 应用纯化兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV),接种小鼠、豚鼠、SPF鸡、仔猪4d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR,进行体内分布检测;同时将上述动物进行3次免疫,三免后10d分离外周血淋巴细胞进行IFN-γ、IL-4、WST检测病毒刺激指数(SI)。结果显示,通过电镜观察未见到病毒粒子;HA检测结果为肝脏的HA价最高,而肺脏最低;RT-PCR未检测到目的基因;WST检测结果免疫组刺激指数高于对照组;免疫组的IFN-γ和IL-4检测数高对照组。结果表明,RHDV在多种属动物分布规律相同,均能产生细胞免疫反应,为下一步试验奠定基础。 展开更多
关键词 rhdv 体内分布 IFN-Γ IL-4
原文传递
RHDV CD株VP60主要抗原表位基因的克隆与序列分析 被引量：3
8
作者 隋慧 杨金生 《中国动物检疫》 CAS 2010年第8期27-29,48,共4页
本实验用RHDV CD株人工感染家兔,发病死亡后,取肝脏匀浆,用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物,采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后,进行序列测定。测... 本实验用RHDV CD株人工感染家兔,发病死亡后,取肝脏匀浆,用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物,采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后,进行序列测定。测序结果表明,VP60主要抗原表位基因长525bp。该序列与已发表的其它13株RHDV VP60同一核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性比较。结果显示,CD株核酸序列与WX-84株同源性最高为97.5%,与其它毒株的同源性在92.0%～96.6%之间。氨基酸序列与WX-84株、墨西哥Mexi-co-89株同源性最高为99.4%,与其它毒株的同源性在96.6%～98.3%之间。 展开更多
关键词 rhdv VP60 主要抗原表位基因 克隆 同源性
在线阅读 下载PDF
几种提纯RHDV方法的比较研究
9
作者 杨龙圣 薛家宾 +4 位作者 丁国明 徐为中 陈兴祥 孔祥峰 胡元亮 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期13-16,41,共5页
运用离子交换层析法、凝胶过滤层析法和密度梯度离心法对已作初步处理的RHDV分别进行提纯,并通过血凝性鉴定、抗原蛋白含量检测、ELISA和SDS-PAGE凝胶电泳等方法检测其纯度。结果表明,通过Sephadex-200凝胶过滤层析法所提纯病毒的血凝... 运用离子交换层析法、凝胶过滤层析法和密度梯度离心法对已作初步处理的RHDV分别进行提纯,并通过血凝性鉴定、抗原蛋白含量检测、ELISA和SDS-PAGE凝胶电泳等方法检测其纯度。结果表明,通过Sephadex-200凝胶过滤层析法所提纯病毒的血凝性和蛋白浓度最高;稀释至相同的蛋白浓度之后,该法所提纯的病毒ELISA检测的OD值最大;SDS-PAGE电泳条带1条,经免疫转印分析证明,该条带为RHDV蛋白特异性条带。表明通过该法提纯的病毒,回收率最高、蛋白最纯。 展开更多
关键词 rhdv 凝胶过滤层析法 葡聚糖200 离子交换层析法 ELISA
在线阅读 下载PDF
家兔病毒性出血症病毒(RHDV)的研究进展 被引量：2
10
作者 任永军 《中国养兔》 2012年第8期13-16,共4页
兔病毒性出血症(RHD)是一种导致家兔急性、烈性、高度致死性的传染病,发病率和死亡率较高,是严重威胁家兔产业发展的传染病之一。本文综述RHDV的病原学、检测方法、遗传变异等方面的研究进展,同时对RHDV未来研究方面做一展望,旨在为深... 兔病毒性出血症(RHD)是一种导致家兔急性、烈性、高度致死性的传染病,发病率和死亡率较高,是严重威胁家兔产业发展的传染病之一。本文综述RHDV的病原学、检测方法、遗传变异等方面的研究进展,同时对RHDV未来研究方面做一展望,旨在为深入研究RHDV提供一定参考和信息。 展开更多
关键词 rhdv 病原学 检测方法 遗传变异
在线阅读 下载PDF
嵌合双串联OVA T细胞表位的RHDV VP60蛋白免疫特性研究
11
作者 宋艳华 张燕 +7 位作者 胡波 范志宇 魏后军 刘星 黄兵 薛家宾 徐为中 王芳 《安徽农业科学》 CAS 2015年第32期89-92,共4页
为研究RHDV VP60作为载体容纳外源片段以及递呈外源T细胞表位的能力,将双串联卵清蛋白T细胞表位插入N端、C端以及替代N端氨基酸的方式获得3种嵌合蛋白,进行免疫试验。3种嵌合蛋白分别命名为DN1、DN2和DC,将蛋白进行浓缩、纯化及定量,利... 为研究RHDV VP60作为载体容纳外源片段以及递呈外源T细胞表位的能力,将双串联卵清蛋白T细胞表位插入N端、C端以及替代N端氨基酸的方式获得3种嵌合蛋白,进行免疫试验。3种嵌合蛋白分别命名为DN1、DN2和DC,将蛋白进行浓缩、纯化及定量,利用透射电镜观察VLPs的形成,发现均可形成形态大小与VP60相似的VLPs。将3种嵌合蛋白分别腹腔注射C57BL/6雌性小鼠,利用间接ELISA检测首免后0、4和6周小鼠血清样品中VP60特异性抗体,结果表明嵌合蛋白组与VP60组均能够诱导产生较高水平的抗VP60特异性抗体,2组间无显著差异。首免后6周,利用合成的OVA多肽刺激脾淋巴细胞,ELISPOT检测特异性IFN-γ的分泌水平,结果表明3种嵌合蛋白均能诱导特异性IFN-γ的分泌。该研究扩展了VP60作为载体可携带的外源片段的耐受性及有效递呈T细胞表位的能力,为VP60-VLPs展示系统的研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 rhdv 衣壳蛋白 OVA T细胞表位 嵌合蛋白 免疫原性研究
在线阅读 下载PDF
基于重组截短RHDV VP60蛋白的间接ELISA抗体检测方法 被引量：3
12
作者 孙培姣 周迎春 +10 位作者 于雪 李本科 王辉暖 王雅雯 于新友 杨慧 王蓉 李振伟 王玉茂 沈志强 肖跃强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1264-1269,共6页
为了建立一种快速、特异、敏感的RHDV抗体检测方法,对VP60蛋白基因的抗原表位区域进行分析,截取VP60-1、VP60-2、VP60-3、VP60-semi1和VP60-semi2,大肠杆菌表达后纯化获得重组截短蛋白。经抗原、抗体结合反应比较,以VP60-semi1为包被抗... 为了建立一种快速、特异、敏感的RHDV抗体检测方法,对VP60蛋白基因的抗原表位区域进行分析,截取VP60-1、VP60-2、VP60-3、VP60-semi1和VP60-semi2,大肠杆菌表达后纯化获得重组截短蛋白。经抗原、抗体结合反应比较,以VP60-semi1为包被抗原检测效果最好,并建立了基于重组蛋白VP60-semi1的间接ELISA抗体检测方法。经优化,该方法的最佳条件:抗原包被质量浓度为0.1μg/孔,4℃包被过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭1 h;血清稀释度为1∶200,37℃孵育1 h;最后37℃作用显色15 min。该方法与血凝抑制(HI)检测相比,敏感性好,阳性血清稀释至1∶6 400仍可检出;批内、批间变异系数分别为0.46%~4.97%和2.68%~8.88%,重复性好;符合率检测显示,与HI法的符合率为89.29%,与免疫保护试验结果符合率为100%。结果表明,建立了一种基于重组蛋白VP60-semi1的间接ELISA抗体检测方法,可用于监测兔群免疫后抗体水平动态并指导疫苗免疫,以及该病的流行病学调查等。 展开更多
关键词 rhdv 截短VP60蛋白 间接ELISA方法 抗体检测
原文传递
中国首例兔出血症病毒2型(RHDV2/b/GI.2)的鉴定及病理学观察 被引量：13
13
作者 肖璐 于吉锋 +11 位作者 林毅 周泷 郭志强 谢晶 岳建国 叶勇刚 曹冶 李兴玉 潘梦 叶健强 李敏 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期348-355,共8页
本试验旨在鉴定四川金堂某兔场疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)感染疫情的病原,并分析病兔的病理组织学变化。利用血凝试验和RT-PCR检测病死兔内脏组织中的病原,取病变组织制作病理切片,观察分析各组织的病理组织学变化,同时应用病兔肝脏悬... 本试验旨在鉴定四川金堂某兔场疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)感染疫情的病原,并分析病兔的病理组织学变化。利用血凝试验和RT-PCR检测病死兔内脏组织中的病原,取病变组织制作病理切片,观察分析各组织的病理组织学变化,同时应用病兔肝脏悬液感染幼兔,分析该毒株的致病力。血凝试验结果显示,所采集病死兔肝脏样品能凝集人“O”型血红细胞;RT-PCR扩增及测序结果显示,多对引物均能从样品中扩增出RHDV2特异性条带;病理组织学观察结果显示,病兔多脏器严重出血、肿胀,淋巴细胞和中性粒细胞大量浸润,气管黏膜、肝脏、肺脏出血尤为严重;动物试验结果显示,该毒株毒力较强,含毒肝脏悬液能在24 h内迅速致死幼兔。本研究经临床诊断、核酸检测及测序证实了此次疫情确由RHDV2感染引起,动物试验和病理组织学观察表明该毒株毒力较强,可引发脏器严重出血,造成病兔急性死亡,RHDV2的出现提示病毒的跨境传播情况不容乐观,应引起更大的重视。 展开更多
关键词 兔瘟 兔出血症病毒2型(rhdv2/b/GI.2) 病理组织学 致病力
在线阅读 下载PDF
兔肝细胞中与RHDV VP60 P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定 被引量：1
14
作者 李腾 姜平 +6 位作者 王芳 宋艳华 胡波 范志宇 魏后军 仇汝龙 刘星 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期549-558,共10页
兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用... 兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质。经分析选取层黏连蛋白受体(LamR)蛋白做进一步研究。提取兔肝细胞总RNA,反转录扩增LamR基因,将其插入pGEX-6p-1载体,经IPTG诱导表达,获得GST-LamR融合蛋白,并通过GST pull-down试验验证LamR蛋白与P2蛋白的结合。结果显示,以P2蛋白为诱饵蛋白质,免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到26个与P2存在相互作用的肝细胞蛋白质,其中LamR蛋白是多种病毒的受体。通过原核表达系统表达了LamR蛋白,经pull-down试验验证了LamR蛋白与P2蛋白有直接的相互作用。本研究证实兔肝细胞LamR蛋白与RHDV VP60P2蛋白的相互作用,为深入研究RHDV的感染过程、揭示RHDV的致病机制提供了线索。 展开更多
关键词 兔出血症病毒(rhdv) VP60P2亚区 免疫共沉淀 层黏连蛋白受体(LamR)
在线阅读 下载PDF
兔出血症病毒(RHDV)WHNRH株的分离鉴定及基因组全序列的测定与分析 被引量：9
15
作者 李建文 王红宁 +2 位作者 田浪 黄勇 张夏兰 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期720-725,共6页
从发病长毛兔中分离鉴定了兔病毒性出血症病毒WHNRH株。参考GenBank中已登录的RHDV毒株序列对RHDV WHNRH分离株进行了全基因组序列测定与分析。设计5对扩增区段相互重叠的RHDV特异性引物，扩增除5’和3’末端以外的序列，采用设计锚引物... 从发病长毛兔中分离鉴定了兔病毒性出血症病毒WHNRH株。参考GenBank中已登录的RHDV毒株序列对RHDV WHNRH分离株进行了全基因组序列测定与分析。设计5对扩增区段相互重叠的RHDV特异性引物，扩增除5’和3’末端以外的序列，采用设计锚引物的5’RACE方法以及针对RHDV 3’末端的polyA结构设计引物获得了RHDV WHNRH株的5’和3’末端序列。胶回收各PCR产物，连接pMD18-T克隆载体，测得RHDV WHNRH分离株的基因组全长为7437nt（不包括polyA），与GenBank公布的全部共6株RHDV全基因序列进行同源性比较分析，同源性在89．0％～97．1％之间，ORF1同源性为89．0％～97．1％，编码氨基酸序列的同源性为95．2％～98．7％；ORF2的核酸苷序列同源性为92．1％～97．7％，编码氨基酸序列的同源性为94．1％～96．6％。 展开更多
关键词 分离鉴定 兔出血症病毒 全基因组测序 WHNRH
在线阅读 下载PDF
RHDV VLPs对口蹄疫病毒B细胞表位的展示效果 被引量：3
16
作者 胡波 盛蓉 +4 位作者 宋艳华 范志宇 魏后军 薛家宾 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期1362-1370,共9页
为研究兔出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLPs)携带外源表位的能力及其免疫原性,以兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60为载体,分别在RHDV VP60蛋白质的C端、N端和306位插入FMDV VP1双串联B细胞表位[GS-(200~213 aa)-GS-(141~160 aa)],得到嵌... 为研究兔出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLPs)携带外源表位的能力及其免疫原性,以兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60为载体,分别在RHDV VP60蛋白质的C端、N端和306位插入FMDV VP1双串联B细胞表位[GS-(200~213 aa)-GS-(141~160 aa)],得到嵌合蛋白质,分别命名为VP60-2FB、VP60-306FB和VP60-578FB。经IFA、SDS-PAGE和Western blot鉴定,嵌合VP60蛋白质在杆状病毒表达系统中均得到有效表达;通过电镜观察发现嵌合蛋白质可自聚成病毒样颗粒。将嵌合蛋白质免疫小鼠,检测产生的免疫应答情况,结果显示,嵌合蛋白质可以产生针对VP60特异的免疫应答,且在插入长度为42 aa外源氨基酸片段的情况下,嵌合蛋白质免疫的小鼠仍能诱导产生较高水平的针对外源表位的特异性应答。在进一步扩展了载体的容纳性后,序列的增加不影响VLPs的形成以及对外源表位的递呈效果,说明VP60-VLPs作为外源B细胞表位展示载体是可行性的。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 病毒样颗粒 口蹄疫病毒 B细胞表位 载体
在线阅读 下载PDF
不同日月龄兔感染RHDV后圆小囊的比较病理学观察 被引量：1
17
作者 佘锐萍 杨汉春 +3 位作者 马毅新 陈艳红 查振林 高齐瑜 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期49-53,共5页
为探讨圆小囊在兔体全身抗感染免疫中的功能作用 ,采用组织病理学及免疫组织化学方法 ,对比观察了 2日龄、1月龄及 2月龄实验兔感染RHDV后圆小囊的病理变化 ,同时采用ELISA方法对实验兔的血清及肝、肾、脾中的RHDV含量进行了测定 ,重点... 为探讨圆小囊在兔体全身抗感染免疫中的功能作用 ,采用组织病理学及免疫组织化学方法 ,对比观察了 2日龄、1月龄及 2月龄实验兔感染RHDV后圆小囊的病理变化 ,同时采用ELISA方法对实验兔的血清及肝、肾、脾中的RHDV含量进行了测定 ,重点对实验兔圆小囊黏膜上皮内淋巴细胞 (IEL)进行了统计比较。结果显示 :2月龄以内兔人工感染RHDV后 ,临症表现、剖检及组织病理学观察均未见异常。血清及RHDV的靶器官肝、脾、肾中均未检测出RHDV抗原。 2月龄以上兔感染RHDV后 ,无论从临床症状 ,还是大体剖检 ,组织病理学观察 ,均出现了明显的病理学改变 ,而且感染后血清RHDV抗原检测呈阳性反应。圆小囊、肝、脾、肾等组织器官都呈现RHDV免疫组化强阳性反应。 2月龄以内的乳兔及仔兔感染RHDV后 ,圆小囊虽未出现明显的形态结构改变 ,免疫组化染色也未见RHDV抗原阳性反应物 ,但IEL明显增多 ,2日龄兔IEL由 1 2 %增加到 4 2 % ;1月龄兔的IEL由10 1%增加到 2 6 1%。 展开更多
关键词 兔 圆小囊 组织病理学 免疫组织化学 病理变化 病毒性出血症 日龄 黏膜免疫
在线阅读 下载PDF
RHDV VP60“通用型”T细胞表位预测 被引量：1
18
作者 金明兰 侯继波 +6 位作者 郑其升 鲁会军 韩松 南文龙 任静强 刘春霞 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期545-554,共10页
兔病毒性出血症核衣壳蛋白VP60是兔出血症病毒的主要结构蛋白,具有很强的抗原性和免疫原性,可诱导细胞免疫,在抗病毒免疫中起着关键作用。确定T细胞所识别抗原分子上的短肽序列对T细胞表位进行定位,对于研究特异性免疫应答有着重要意义... 兔病毒性出血症核衣壳蛋白VP60是兔出血症病毒的主要结构蛋白,具有很强的抗原性和免疫原性,可诱导细胞免疫,在抗病毒免疫中起着关键作用。确定T细胞所识别抗原分子上的短肽序列对T细胞表位进行定位,对于研究特异性免疫应答有着重要意义。本研究应用T细胞抗原表位分析的研究方法,预测VP60T细胞蛋白质抗原表位,为后期试验奠定了基础。 展开更多
关键词 兔病毒性出血症 结构蛋白VP60 T细胞表位{预测
原文传递
兔出血症病毒(RHDV)全基因组克隆与分子流行病学分析
19
作者 向华 宣华 +4 位作者 隋慧 王贵平 王文成 李尚波 卫广森 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期592-595,共4页
根据GenBank已发表的多株RHDV全基因组序列,设计3对扩增RHDVCD株的特异性引物,扩增了RHDVCD株包含全序列的3个片段,并分别克隆到pMD18-T载体上。根据引物上唯一的交叉酶切位点,把三个克隆片段同时克隆到pUC18载体上,获得了RHDVCD株全基... 根据GenBank已发表的多株RHDV全基因组序列,设计3对扩增RHDVCD株的特异性引物,扩增了RHDVCD株包含全序列的3个片段,并分别克隆到pMD18-T载体上。根据引物上唯一的交叉酶切位点,把三个克隆片段同时克隆到pUC18载体上,获得了RHDVCD株全基因组克隆,测定了全基因组序列(GenBankaccessionnumberAY523410)。进行了CD株全序列与GenBank上已发布的其他6株全序列比较及基因进化树分析。发现除CD株外,其余6株(西班牙AST-89株、法国SD株、意大利BS89株、德国分离1株、德国分离2株、澳大利亚CzechV351株)之间的同源性均很高,在93.9%～100%之间,而CD株与其他6株之间的同源性均较低,在89.0%～89.6%之间。德国的2个分离株序列完全相同,应为同一毒株。进化树分析表明,此7株病毒可形成2个明显的分支,中国CD株形成一个分支,其余欧洲、澳大利亚分离株开成一个分支,具有明显地域差异特征。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 基因组 序列分析
在线阅读 下载PDF
猪体内筛选RHDV VP60 T细胞表位的优势区
20
作者 金明兰 侯继波 +5 位作者 郑其升 鲁会军 任静强 南文龙 韩松 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1089-1093,共5页
应用戊二醛醛化的人"O"型红细胞纯化兔出血症病毒(RHDV),对非免猪进行3次免疫后,分离外周血淋巴细胞经不同段重组杆状病毒(共分5段表达)、纯化的病毒、Con A刺激后进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测。结果显示,纯化病毒的血凝... 应用戊二醛醛化的人"O"型红细胞纯化兔出血症病毒(RHDV),对非免猪进行3次免疫后,分离外周血淋巴细胞经不同段重组杆状病毒(共分5段表达)、纯化的病毒、Con A刺激后进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测。结果显示,纯化病毒的血凝效价为28,与未纯化的RHDV毒价相差1个滴度;WST检测结果为免疫组经3段重组杆状病毒刺激的值最高;IFN-γ和IL-2检测结果也是3段重组杆状病毒刺激的值最高;IL-4检测结果为3段重组杆状病毒刺激的值最低。由此表明病毒经纯化后效果好,3段重组杆状病毒区域为T细胞表位优势区,这为RHDV T细胞表位的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪 兔出血症病毒 VP60 T细胞表位 IFN-Γ IL-2 IL-4 WST
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 7 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部