目的研究昆明地区RhD初筛阴性献血者RHD基因的多态性及其分子机制,为建立区域性献血者RHD基因数据库提供数据支持。方法选择昆明地区2023年11月-2024年8月初筛RhD阴性标本218例,采用间接抗球蛋白试验法(IAT)进行RhD阴性确认,采用盐水试...目的研究昆明地区RhD初筛阴性献血者RHD基因的多态性及其分子机制,为建立区域性献血者RHD基因数据库提供数据支持。方法选择昆明地区2023年11月-2024年8月初筛RhD阴性标本218例,采用间接抗球蛋白试验法(IAT)进行RhD阴性确认,采用盐水试管法进行RhCE表型鉴定。提取全血基因组DNA,采用PCR-SSP法/SSP荧光PCR染料法进行RHD基因分型,对无法确定基因型的标本进行RHD基因1~10外显子Sanger测序分析。结果检出RhD真阴性表型179例(82.11%),其中RHD*01N.01(RHD全缺失)型154例(86.03%),表型以ccee为主(87.01%);携带非功能性RHD等位基因25例(13.97%),包括RHD*01N.0320例、RHD*01N.163例、RHD*01N.051例、RHD*01N.591例,表型以Ccee为主(64%)。检出D变异型39例(15.89%),其中RHD*DEL1(c.1227G>A)型34例,表型均为C抗原阳性(Ccee 27例,CCee 7例);弱D/部分D型4例,包括RHD*DVI.32例、RHD*weak D type 711例、RHD*weak D type1081例;另检出1例RHD*01/RHD*01N.01,基因型与血清学表型结果不一致。RHD*01N.01女性献血者不规则抗体(主要为抗-D)阳性率9.84%。结论昆明地区RhD初筛阴性献血者RHD基因多态性显著,RhD真阴性比例高于国内部分地区,D变异型以“亚洲型”DEL为主,比例低于国内部分地区。研究结果为本地区RhD阴性和D变异型个体精准输血提供了理论和数据支持。展开更多
目的使用我们前期建立的RhD变异型个体分型策略,对广州地区50例RhD变异型标本进行分型,为RhD变异型个体的输血和孕期检测策略提供指导。方法收集2024年6月至2024年8月在广州血液中心进行RhD阴性确认的RhD变异型标本50例,采用2种抗-D试剂...目的使用我们前期建立的RhD变异型个体分型策略,对广州地区50例RhD变异型标本进行分型,为RhD变异型个体的输血和孕期检测策略提供指导。方法收集2024年6月至2024年8月在广州血液中心进行RhD阴性确认的RhD变异型标本50例,采用2种抗-D试剂对Rh血型系统D抗原进行血清学检测,并使用包含9种单克隆抗-D的D-Screen试剂盒对D抗原表位进一步检测。提取基因组DNA,应用高分辨熔解曲线法(HRM)检测“亚洲型”DEL等位基因(RHD^(*)1227A),采用多重连接探针扩增技术(MLPA)和Sanger测序法对RHD基因进行基因分型。结果在50例RhD变异型标本中,应用HRM法检出17例基因型为“亚洲型”DEL的标本,占比34.0%(17/50),其中13例RHD^(*)DEL1/01N.01、4例RHD^(*)DEL1/DEL1。余下标本使用D-screen抗原表位检测试剂盒检出DVI格局标本11例,占比22.0%(11/50);通过D-screen抗原表位初筛联合6号外显子Sanger测序检出5例RHD^(*)weak partial 15/01N.01,占比10.0%(5/50);应用MLPA联合Sanger测序检出,2例RHD^(*)DVI.3/DEL1,占比4.0%(2/50),RHD^(*)weak D type18/01N.04、RHD^(*)weak D type 72/01N.01、RHD^(*)weak D type 95/DEL1、RHD^(*)weak D type 114/DEL1、RHD^(*)weak D type 136/DEL1、RHD^(*)weak D type 147/01N.01、RHD^(*)496G/496G、RHD^(*)536C/01N.01、RHD^(*)689A/689A、RHD^(*)689A/DEL1、RHD^(*)DEL32/DEL1、RHD^(*)DV.1/01N.01、RHD^(*)DV.5/01N.01、RHD^(*)01.01/01N.01和RHD^(*)01/01N.01各1例。结论采用我们前期建立的血型血清学与分子生物学相结合的方法对50例RhD变异型个体进行分型,为RhD变异型患者临床精准输血和RhD变异型孕妇是否需要注射抗-D免疫球蛋白提供指导。展开更多
目的对广州地区收集的32例RhD变异型献血者进行基因分型,以了解RhD变异型在广州献血者中的分布情况。方法采用传统血清学方法,对2016年6月—2017年1月的RhD变异型献血者进行RhD表型鉴定。提取基因组DNA,采用MLPA检测试剂盒对收集的32例...目的对广州地区收集的32例RhD变异型献血者进行基因分型,以了解RhD变异型在广州献血者中的分布情况。方法采用传统血清学方法,对2016年6月—2017年1月的RhD变异型献血者进行RhD表型鉴定。提取基因组DNA,采用MLPA检测试剂盒对收集的32例RhD变异型标本进行RHD基因分型。对于不能明确分型的标本,使用Sanger测序法对RHD基因进行测序分析。使用D-Screen试剂盒对RhD变异型标本的RhD抗原表位行进一步检测。结果在32例RhD变异型标本中:检出RHD~*DVI.3/01N.01 8例、RHD~*DVI.3/DVI.3 1例、RHD~*weak partial 15/01N.01 7例、RHD~*960A/01N.01 3例、RHD~*weak D type 25/01N.01 3例、RHD~*weak D type 72/01N.01 2例、RHD~*D-CE(4)-D-CE(10)/01N.01 1例、RHD~*95A/01N.01 1例、RHD~*710T/01N.01 1例、RHD~*DVI.3/01EL.01 1例、RHD~*weak partial 15/01EL.01 1例、RHD~*weak D type 25/01EL.01 1例、RHD~*DVI.3/D-CE(3-9)-D 1例和RHD~*538A/D-CE(2-9)-D 1例。结论弱部分D15和部分DVI.3是广州地区献血者人群中最常见的RhD变异型。MLPA基因分型方法是1种有助于检出这2种不同RHD突变型等位基因的方法。展开更多
目的研究9例罕见RhD变异型的分子机制及其D抗原表位和蛋白结构。方法在深圳地区210644名无偿献血者中筛选得到RhD变异型标本9例。采用常规血清学方法对9例标本进行Rh分型,间接抗球蛋白试验(IAT)确认RhD抗原以及抗体筛查。D-screen试剂...目的研究9例罕见RhD变异型的分子机制及其D抗原表位和蛋白结构。方法在深圳地区210644名无偿献血者中筛选得到RhD变异型标本9例。采用常规血清学方法对9例标本进行Rh分型,间接抗球蛋白试验(IAT)确认RhD抗原以及抗体筛查。D-screen试剂分析标本的RhD抗原表位。分别利用序列特异性引物聚合酶联反应(PCR-SSP)法和Sanger测序方法分析RHD基因杂合性和RHD基因编码区及其侧翼区域序列。利用PROVEAN、SIFT、PolyPhen-2和MutationTaster软件分析预测突变对RhD蛋白质功能的影响。使用Robetta服务器和Swiss-PdbViewer 4.1.0进行RhD蛋白模型构建。结果9例标本的RHD基因型分别为:RHD^(*)weak D type 25、RHD^(*)weak D type 50、RHD^(*)weak D type 95、RHD*weak D type 12、RHD^(*)weak D type 128和4个新的RHD等位基因。生物信息学软件和三维结构预测结果显示突变影响了蛋白质的结构和功能。结论鉴定了5个罕见的RhD变异型和4个新的RHD等位基因。这些RhD变异型的表型和基因型结果丰富了RHD等位基因库的研究数据。通过对RhD抗原的生物信息学分析,有助于进一步研究RHD基因突变对蛋白结构和功能的影响。展开更多
目的研究1例RhD血型鉴定部分凝集结果个体及其家系血清学表现和RHD基因。方法通过血型微柱凝胶卡检测先证者ABO及RhD血型;盐水试管法检测先证者及其父母RhCcEe抗原;间接抗人球蛋白试验(indirect anti-human globulin test,IAT)及流式细...目的研究1例RhD血型鉴定部分凝集结果个体及其家系血清学表现和RHD基因。方法通过血型微柱凝胶卡检测先证者ABO及RhD血型;盐水试管法检测先证者及其父母RhCcEe抗原;间接抗人球蛋白试验(indirect anti-human globulin test,IAT)及流式细胞术检测先证者RhD抗原。PCR序列特异性引物(PCR sequence specific primer,PCR-SSP)检测RHD基因以及RhD杂合型分析,基因测序方法分析RHD基因编码区序列。结果血清学检测发现先证者血型为A型RhCcee,血型微柱凝胶卡、盐水试管法以及IAT法检测RhD抗原,结果呈部分凝集现象。流式细胞术结果显示先证者RhD抗原性减弱。经RHD基因编码序列分析发现,RHD基因第9外显子上的第1212位碱基发生C>A纯合突变,为RHD^(*)weak D type 72的特征性突变点。家系调查显示,先证者父亲为O型RhCCDee,母亲为A型RhCcDee。父亲携带RHD^(*)weak D type 72等位基因,基因型为RHD^(*)weak D type 72/RHD+;母亲一条染色体缺失了全部的RHD基因,基因型为RHD+/RHD-。证明先证者分别从父亲和母亲遗传RHD^(*)weak D type 72和RHD-等位基因,基因型为RHD^(*)weak D type 72/RHD-。结论发现了1例RHD^(*)weak D type 72/RHD-基因型个体,丰富了RHD^(*)weak D type 72变异型的研究数据。根据家系调查证明,RHD^(*)weak D type 72等位基因由遗传获得,而非由个体基因变异形成。展开更多
目的研究深圳地区血清学弱D表型献血者RhCcEe表型与RHD基因型特点。方法收集38例献血者血液样本,抗-D抗体(IgM/IgG)检测RhD抗原。采用IgM抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗体检测RhCcEe抗原。利用PCR-SSP方法分析RHD基因10个外显子,必要时对RHD...目的研究深圳地区血清学弱D表型献血者RhCcEe表型与RHD基因型特点。方法收集38例献血者血液样本,抗-D抗体(IgM/IgG)检测RhD抗原。采用IgM抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗体检测RhCcEe抗原。利用PCR-SSP方法分析RHD基因10个外显子,必要时对RHD基因的所有外显子进行直接测序。统计学方法分析RhCcEe表型与RHD基因型之间的相关性。结果38例血清学弱D表型献血者中发现8种已报道的等位基因,RHD^(*)weak partial 15(15/38)、RHD^(*)DEL 1(11/38)、RHD^(*)DVI.3(5/38)、RHD^(*)weak D type 61(1/38)、RHD^(*)weak D type 95(1/38)、RHD^(*)DCC(1/38)、RHD^(*)DFR 1(1/38)、RHD^(*)weak D type 50(1/38)、RHD^(*)weak partial 15/RHD^(*)DEL 1杂合(1/38)。其中RHD^(*)weak D type 50在中国汉族人群中首次报道。另外,发现了1例新的RHD等位基因RHD^(*)IVS 9-1C(c.1228-1G>C)。该等位基因的序列数据已提交GenBank,登记号为MT755965。经相关性分析,RHD^(*)weak partial 15与RhE抗原相关系数为0.727(P<0.01),RHD^(*)DEL 1与RhC抗原相关系数为0.645(P<0.01)。结论深圳地区血清学弱D表型献血者的RHD基因结构呈现多态性,主要为RHD^(*)weak partial 15、RHD^(*)DEL 1、RHD^(*)DVI.3,并存在其他稀有的基因型;RHD^(*)weak partial 15与RhE抗原、RHD^(*)DEL 1与RhC抗原存在显著正相关。展开更多
文摘目的研究昆明地区RhD初筛阴性献血者RHD基因的多态性及其分子机制,为建立区域性献血者RHD基因数据库提供数据支持。方法选择昆明地区2023年11月-2024年8月初筛RhD阴性标本218例,采用间接抗球蛋白试验法(IAT)进行RhD阴性确认,采用盐水试管法进行RhCE表型鉴定。提取全血基因组DNA,采用PCR-SSP法/SSP荧光PCR染料法进行RHD基因分型,对无法确定基因型的标本进行RHD基因1~10外显子Sanger测序分析。结果检出RhD真阴性表型179例(82.11%),其中RHD*01N.01(RHD全缺失)型154例(86.03%),表型以ccee为主(87.01%);携带非功能性RHD等位基因25例(13.97%),包括RHD*01N.0320例、RHD*01N.163例、RHD*01N.051例、RHD*01N.591例,表型以Ccee为主(64%)。检出D变异型39例(15.89%),其中RHD*DEL1(c.1227G>A)型34例,表型均为C抗原阳性(Ccee 27例,CCee 7例);弱D/部分D型4例,包括RHD*DVI.32例、RHD*weak D type 711例、RHD*weak D type1081例;另检出1例RHD*01/RHD*01N.01,基因型与血清学表型结果不一致。RHD*01N.01女性献血者不规则抗体(主要为抗-D)阳性率9.84%。结论昆明地区RhD初筛阴性献血者RHD基因多态性显著,RhD真阴性比例高于国内部分地区,D变异型以“亚洲型”DEL为主,比例低于国内部分地区。研究结果为本地区RhD阴性和D变异型个体精准输血提供了理论和数据支持。
文摘目的使用我们前期建立的RhD变异型个体分型策略,对广州地区50例RhD变异型标本进行分型,为RhD变异型个体的输血和孕期检测策略提供指导。方法收集2024年6月至2024年8月在广州血液中心进行RhD阴性确认的RhD变异型标本50例,采用2种抗-D试剂对Rh血型系统D抗原进行血清学检测,并使用包含9种单克隆抗-D的D-Screen试剂盒对D抗原表位进一步检测。提取基因组DNA,应用高分辨熔解曲线法(HRM)检测“亚洲型”DEL等位基因(RHD^(*)1227A),采用多重连接探针扩增技术(MLPA)和Sanger测序法对RHD基因进行基因分型。结果在50例RhD变异型标本中,应用HRM法检出17例基因型为“亚洲型”DEL的标本,占比34.0%(17/50),其中13例RHD^(*)DEL1/01N.01、4例RHD^(*)DEL1/DEL1。余下标本使用D-screen抗原表位检测试剂盒检出DVI格局标本11例,占比22.0%(11/50);通过D-screen抗原表位初筛联合6号外显子Sanger测序检出5例RHD^(*)weak partial 15/01N.01,占比10.0%(5/50);应用MLPA联合Sanger测序检出,2例RHD^(*)DVI.3/DEL1,占比4.0%(2/50),RHD^(*)weak D type18/01N.04、RHD^(*)weak D type 72/01N.01、RHD^(*)weak D type 95/DEL1、RHD^(*)weak D type 114/DEL1、RHD^(*)weak D type 136/DEL1、RHD^(*)weak D type 147/01N.01、RHD^(*)496G/496G、RHD^(*)536C/01N.01、RHD^(*)689A/689A、RHD^(*)689A/DEL1、RHD^(*)DEL32/DEL1、RHD^(*)DV.1/01N.01、RHD^(*)DV.5/01N.01、RHD^(*)01.01/01N.01和RHD^(*)01/01N.01各1例。结论采用我们前期建立的血型血清学与分子生物学相结合的方法对50例RhD变异型个体进行分型,为RhD变异型患者临床精准输血和RhD变异型孕妇是否需要注射抗-D免疫球蛋白提供指导。
文摘目的对广州地区收集的32例RhD变异型献血者进行基因分型,以了解RhD变异型在广州献血者中的分布情况。方法采用传统血清学方法,对2016年6月—2017年1月的RhD变异型献血者进行RhD表型鉴定。提取基因组DNA,采用MLPA检测试剂盒对收集的32例RhD变异型标本进行RHD基因分型。对于不能明确分型的标本,使用Sanger测序法对RHD基因进行测序分析。使用D-Screen试剂盒对RhD变异型标本的RhD抗原表位行进一步检测。结果在32例RhD变异型标本中:检出RHD~*DVI.3/01N.01 8例、RHD~*DVI.3/DVI.3 1例、RHD~*weak partial 15/01N.01 7例、RHD~*960A/01N.01 3例、RHD~*weak D type 25/01N.01 3例、RHD~*weak D type 72/01N.01 2例、RHD~*D-CE(4)-D-CE(10)/01N.01 1例、RHD~*95A/01N.01 1例、RHD~*710T/01N.01 1例、RHD~*DVI.3/01EL.01 1例、RHD~*weak partial 15/01EL.01 1例、RHD~*weak D type 25/01EL.01 1例、RHD~*DVI.3/D-CE(3-9)-D 1例和RHD~*538A/D-CE(2-9)-D 1例。结论弱部分D15和部分DVI.3是广州地区献血者人群中最常见的RhD变异型。MLPA基因分型方法是1种有助于检出这2种不同RHD突变型等位基因的方法。
文摘目的研究9例罕见RhD变异型的分子机制及其D抗原表位和蛋白结构。方法在深圳地区210644名无偿献血者中筛选得到RhD变异型标本9例。采用常规血清学方法对9例标本进行Rh分型,间接抗球蛋白试验(IAT)确认RhD抗原以及抗体筛查。D-screen试剂分析标本的RhD抗原表位。分别利用序列特异性引物聚合酶联反应(PCR-SSP)法和Sanger测序方法分析RHD基因杂合性和RHD基因编码区及其侧翼区域序列。利用PROVEAN、SIFT、PolyPhen-2和MutationTaster软件分析预测突变对RhD蛋白质功能的影响。使用Robetta服务器和Swiss-PdbViewer 4.1.0进行RhD蛋白模型构建。结果9例标本的RHD基因型分别为:RHD^(*)weak D type 25、RHD^(*)weak D type 50、RHD^(*)weak D type 95、RHD*weak D type 12、RHD^(*)weak D type 128和4个新的RHD等位基因。生物信息学软件和三维结构预测结果显示突变影响了蛋白质的结构和功能。结论鉴定了5个罕见的RhD变异型和4个新的RHD等位基因。这些RhD变异型的表型和基因型结果丰富了RHD等位基因库的研究数据。通过对RhD抗原的生物信息学分析,有助于进一步研究RHD基因突变对蛋白结构和功能的影响。
文摘目的研究1例RhD血型鉴定部分凝集结果个体及其家系血清学表现和RHD基因。方法通过血型微柱凝胶卡检测先证者ABO及RhD血型;盐水试管法检测先证者及其父母RhCcEe抗原;间接抗人球蛋白试验(indirect anti-human globulin test,IAT)及流式细胞术检测先证者RhD抗原。PCR序列特异性引物(PCR sequence specific primer,PCR-SSP)检测RHD基因以及RhD杂合型分析,基因测序方法分析RHD基因编码区序列。结果血清学检测发现先证者血型为A型RhCcee,血型微柱凝胶卡、盐水试管法以及IAT法检测RhD抗原,结果呈部分凝集现象。流式细胞术结果显示先证者RhD抗原性减弱。经RHD基因编码序列分析发现,RHD基因第9外显子上的第1212位碱基发生C>A纯合突变,为RHD^(*)weak D type 72的特征性突变点。家系调查显示,先证者父亲为O型RhCCDee,母亲为A型RhCcDee。父亲携带RHD^(*)weak D type 72等位基因,基因型为RHD^(*)weak D type 72/RHD+;母亲一条染色体缺失了全部的RHD基因,基因型为RHD+/RHD-。证明先证者分别从父亲和母亲遗传RHD^(*)weak D type 72和RHD-等位基因,基因型为RHD^(*)weak D type 72/RHD-。结论发现了1例RHD^(*)weak D type 72/RHD-基因型个体,丰富了RHD^(*)weak D type 72变异型的研究数据。根据家系调查证明,RHD^(*)weak D type 72等位基因由遗传获得,而非由个体基因变异形成。
文摘目的研究深圳地区血清学弱D表型献血者RhCcEe表型与RHD基因型特点。方法收集38例献血者血液样本,抗-D抗体(IgM/IgG)检测RhD抗原。采用IgM抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗体检测RhCcEe抗原。利用PCR-SSP方法分析RHD基因10个外显子,必要时对RHD基因的所有外显子进行直接测序。统计学方法分析RhCcEe表型与RHD基因型之间的相关性。结果38例血清学弱D表型献血者中发现8种已报道的等位基因,RHD^(*)weak partial 15(15/38)、RHD^(*)DEL 1(11/38)、RHD^(*)DVI.3(5/38)、RHD^(*)weak D type 61(1/38)、RHD^(*)weak D type 95(1/38)、RHD^(*)DCC(1/38)、RHD^(*)DFR 1(1/38)、RHD^(*)weak D type 50(1/38)、RHD^(*)weak partial 15/RHD^(*)DEL 1杂合(1/38)。其中RHD^(*)weak D type 50在中国汉族人群中首次报道。另外,发现了1例新的RHD等位基因RHD^(*)IVS 9-1C(c.1228-1G>C)。该等位基因的序列数据已提交GenBank,登记号为MT755965。经相关性分析,RHD^(*)weak partial 15与RhE抗原相关系数为0.727(P<0.01),RHD^(*)DEL 1与RhC抗原相关系数为0.645(P<0.01)。结论深圳地区血清学弱D表型献血者的RHD基因结构呈现多态性,主要为RHD^(*)weak partial 15、RHD^(*)DEL 1、RHD^(*)DVI.3,并存在其他稀有的基因型;RHD^(*)weak partial 15与RhE抗原、RHD^(*)DEL 1与RhC抗原存在显著正相关。
