目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进...目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进行C、E抗原检测;采用吸收放散试验筛选DEL型;采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法进行RHD基因分型,并对其10个外显子序列进行扩增;采用Sanger法对血清学与PCR-SSP结果不一致或基因扩增格局特殊的标本进行测序。结果:在54380例标本中检出251例RhD阴性标本及3例弱D(IgM抗-D<3+)标本,经阴性确认IgG抗-D阳性12例,占初筛阴性样本的4.78%;抗筛阳性4例,经鉴定均为抗-D。254例标本可划分为8种表型,以cde表型最多,占比59.84%(152/254);其次是Cde,占比27.95%(71/254);cDe最少见,仅有1例。吸收放散试验共筛选出39例DEL变异型,占初筛阴性样本的15.35%;其中38例为CDe表型,1例为cDe表型。分子生物学试验结果显示,254例标本中,仅178例完全缺失RHD基因,占比70.08%;剩余76例中共检测出9种RHD变异类型。其中最常见的为RHD*DEL1(c.1227G>A),发生频率约为0.07%(40/54380);其次为RHD-CE(2-9)-D,发生频率约为0.03%(18/54380)。DVI type3和weak D type15为该人群第三常见的基因型,发生频率约为0.01%。另外还发现2例RHD*711DELC基因型和3种罕见RHD基因类型:RHD-CE(2-7)-D、weak D type 1(c.809T>G)和RHD*970del3,976del16,均只有1例。本研究还发现了2例RHD*01/RHD*01N.01杂合型,其中1例血清学为弱D,经测序在其第8内含子上的1154-31位点发生了T>C的突变,该突变并未被国际输血学会数据库收录,其血清学意义不明。而另1例的血清学为阴性,经RHD外显子测序并未发现相应的突变,具体机制有待进一步研究。结论:本研究通过血清学与分子生物学联用的方法,检测出研究人群独特的RHD基因类型,进一步丰富了沈阳地区的RHD等位基因库,在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面具有重要意义,有利于提高临床精准输血管理水平。展开更多
目的对1例血型血清学RhD为弱凝集的受试者进行分子生物学分析,明确其抗原减弱原因。方法选择2023年深圳市出关体检血型血清学检测为弱D的1例体检人员作为研究对象,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(SSP-PCR)对RhD,RhC,RhE基因型进行检...目的对1例血型血清学RhD为弱凝集的受试者进行分子生物学分析,明确其抗原减弱原因。方法选择2023年深圳市出关体检血型血清学检测为弱D的1例体检人员作为研究对象,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(SSP-PCR)对RhD,RhC,RhE基因型进行检测,使用Sanger测序法对RhD,RhC,RhE基因序列进行测序分析。结果该受试者与微柱凝集法抗-D为弱凝集,盐水试管法抗-D结果为阴性,不规则抗体筛查与直接抗人球蛋白试验结果均为阴性。Rhesus盒检测结果为上游RhD阳性,表明至少存在1段为部分D等位基因,或者下游RhD至少存在1段为部分D等位基因。基因测序结果提示该样本在第9外显子出现插入信号,根据NCBI genebank比对,该突变符合RhD*weak D type 2,GenBank:OM925755.1。结论该受试者血型血清学检测结果为弱D,主要原因可能为RhD外显子9第1碱基出现C碱基插入引发基因突变,致使外显子第一个氨基酸由甘氨酸翻译为丙氨酸,并引发后续基因错配导致氨基酸翻译错乱,从而使RhD血型抗原表达变弱。展开更多
目的 通过对RhD阴性孕产妇腹中胎儿和分娩的新生儿发生胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)的相关指标对比分析,为预防和治疗HDFN提供参考和指导。方法 收集我院2018年1月—2022年12月分娩的RhD阴性孕产...目的 通过对RhD阴性孕产妇腹中胎儿和分娩的新生儿发生胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)的相关指标对比分析,为预防和治疗HDFN提供参考和指导。方法 收集我院2018年1月—2022年12月分娩的RhD阴性孕产妇737名,比较新生儿是否发生RhD血型不合、ABO血型不合导致的HDFN及其影响因素,发生RhD-HDFN和发生ABO-HDFN的相关影响因素。分析发生RhD-HDFN和发生ABO-HDFN患儿的实验室指标差异;分析IgG抗-D效价≤16和≥32的孕产妇分娩的新生儿发生RhD-HDFN的实验室指标差异。结果 737名RhD阴性孕产妇中,发生RhD-HDFN的母婴ABO血型相同或相容者比率88.89%(40/45)显著高于母婴ABO血型不相容者11.11%(5/45)。母体二次妊娠及以上发生RhD-HDFN比率93.33%(42/45)显著高于ABO-HDFN 60.66%(37/61)者。母体IgG抗-D效价≥32者分娩的新生儿血红蛋白(hemoglobin,Hb)最低值低于母体IgG抗-D效价≤16者(χ^(2)=5.61,P<0.05),母体IgG抗-D效价≥32者分娩的新生儿血清总胆红素(total bilirubin,TBil)峰值高于IgG抗-D效价≤16者(χ^(2)=4.471,P<0.05)。结论 RhD阴性孕产妇中,母婴ABO血型相同或相容及孕产次≥2者,相应新生儿更易发生RhD-HDFN,母体IgG抗-D效价≥32者发生新生儿溶血的严重程度显著高于抗-D效价≤16者。展开更多
文摘目的:探讨血清学结合分子生物学在鉴定RhD阴性及D变异血型中的重要意义。方法:采用盐水法对医院2021年5月—2023年12月的54380例标本进行RhD初筛;采用间接抗人球蛋白试验对初筛阴性的标本进行阴性确认和抗体筛选;采用抗C、抗E标准试剂进行C、E抗原检测;采用吸收放散试验筛选DEL型;采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法进行RHD基因分型,并对其10个外显子序列进行扩增;采用Sanger法对血清学与PCR-SSP结果不一致或基因扩增格局特殊的标本进行测序。结果:在54380例标本中检出251例RhD阴性标本及3例弱D(IgM抗-D<3+)标本,经阴性确认IgG抗-D阳性12例,占初筛阴性样本的4.78%;抗筛阳性4例,经鉴定均为抗-D。254例标本可划分为8种表型,以cde表型最多,占比59.84%(152/254);其次是Cde,占比27.95%(71/254);cDe最少见,仅有1例。吸收放散试验共筛选出39例DEL变异型,占初筛阴性样本的15.35%;其中38例为CDe表型,1例为cDe表型。分子生物学试验结果显示,254例标本中,仅178例完全缺失RHD基因,占比70.08%;剩余76例中共检测出9种RHD变异类型。其中最常见的为RHD*DEL1(c.1227G>A),发生频率约为0.07%(40/54380);其次为RHD-CE(2-9)-D,发生频率约为0.03%(18/54380)。DVI type3和weak D type15为该人群第三常见的基因型,发生频率约为0.01%。另外还发现2例RHD*711DELC基因型和3种罕见RHD基因类型:RHD-CE(2-7)-D、weak D type 1(c.809T>G)和RHD*970del3,976del16,均只有1例。本研究还发现了2例RHD*01/RHD*01N.01杂合型,其中1例血清学为弱D,经测序在其第8内含子上的1154-31位点发生了T>C的突变,该突变并未被国际输血学会数据库收录,其血清学意义不明。而另1例的血清学为阴性,经RHD外显子测序并未发现相应的突变,具体机制有待进一步研究。结论:本研究通过血清学与分子生物学联用的方法,检测出研究人群独特的RHD基因类型,进一步丰富了沈阳地区的RHD等位基因库,在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面具有重要意义,有利于提高临床精准输血管理水平。
文摘目的对1例血型血清学RhD为弱凝集的受试者进行分子生物学分析,明确其抗原减弱原因。方法选择2023年深圳市出关体检血型血清学检测为弱D的1例体检人员作为研究对象,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(SSP-PCR)对RhD,RhC,RhE基因型进行检测,使用Sanger测序法对RhD,RhC,RhE基因序列进行测序分析。结果该受试者与微柱凝集法抗-D为弱凝集,盐水试管法抗-D结果为阴性,不规则抗体筛查与直接抗人球蛋白试验结果均为阴性。Rhesus盒检测结果为上游RhD阳性,表明至少存在1段为部分D等位基因,或者下游RhD至少存在1段为部分D等位基因。基因测序结果提示该样本在第9外显子出现插入信号,根据NCBI genebank比对,该突变符合RhD*weak D type 2,GenBank:OM925755.1。结论该受试者血型血清学检测结果为弱D,主要原因可能为RhD外显子9第1碱基出现C碱基插入引发基因突变,致使外显子第一个氨基酸由甘氨酸翻译为丙氨酸,并引发后续基因错配导致氨基酸翻译错乱,从而使RhD血型抗原表达变弱。
文摘目的 通过对RhD阴性孕产妇腹中胎儿和分娩的新生儿发生胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)的相关指标对比分析,为预防和治疗HDFN提供参考和指导。方法 收集我院2018年1月—2022年12月分娩的RhD阴性孕产妇737名,比较新生儿是否发生RhD血型不合、ABO血型不合导致的HDFN及其影响因素,发生RhD-HDFN和发生ABO-HDFN的相关影响因素。分析发生RhD-HDFN和发生ABO-HDFN患儿的实验室指标差异;分析IgG抗-D效价≤16和≥32的孕产妇分娩的新生儿发生RhD-HDFN的实验室指标差异。结果 737名RhD阴性孕产妇中,发生RhD-HDFN的母婴ABO血型相同或相容者比率88.89%(40/45)显著高于母婴ABO血型不相容者11.11%(5/45)。母体二次妊娠及以上发生RhD-HDFN比率93.33%(42/45)显著高于ABO-HDFN 60.66%(37/61)者。母体IgG抗-D效价≥32者分娩的新生儿血红蛋白(hemoglobin,Hb)最低值低于母体IgG抗-D效价≤16者(χ^(2)=5.61,P<0.05),母体IgG抗-D效价≥32者分娩的新生儿血清总胆红素(total bilirubin,TBil)峰值高于IgG抗-D效价≤16者(χ^(2)=4.471,P<0.05)。结论 RhD阴性孕产妇中,母婴ABO血型相同或相容及孕产次≥2者,相应新生儿更易发生RhD-HDFN,母体IgG抗-D效价≥32者发生新生儿溶血的严重程度显著高于抗-D效价≤16者。
