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锦鲤疱疹病毒实时荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立
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作者 吴众怡 徐节华 +5 位作者 裴建明 孟霞 黄海莉 刘文珍 周文华 田飞焱 《中国动物检疫》 2025年第11期89-96,共8页
为了建立一种快速且准确检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)的方法,根据KHV的Sph基因保守序列设计引物探针组合,进行引物筛选和反应条件优化,建立检测KHV的实时荧光重组酶介导等温扩增(real-time fluorescence recombinase-aided am... 为了建立一种快速且准确检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)的方法,根据KHV的Sph基因保守序列设计引物探针组合,进行引物筛选和反应条件优化,建立检测KHV的实时荧光重组酶介导等温扩增(real-time fluorescence recombinase-aided amplification,RF-RAA)方法,并对该方法进行特异性、敏感性、重复性试验及临床样品测试。结果显示:该方法可在40℃恒温下20 min内完成扩增反应,与其他病原均无交叉反应,最低检测限为1.01×10^(1)copies/μL(5.05×10^(1)copies/reaction),组内组间重复性试验扩增曲线差异较小。用该方法以及荧光PCR方法、套式PCR方法对34份临床样品进行检测,试验结果一致。结果表明,建立的RFRAA检测方法具有特异性好、灵敏度高和检测快速等特点,可应用于KHV临床和现场检测。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 重组酶介导等温扩增技术 快检方法
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