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REST/NRSF基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定 被引量：2
1
作者 李宏图 施萍 庞希宁 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第32期6036-6040,共5页
背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退... 背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达。目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体。方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生L-shREST/NRSF慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。包装产生慢病毒颗粒,随后将其感染大鼠骨髓间充质干细胞,采用Real-timePCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效率。结果与结论:PCR和测序证实,构建出了REST/NRSFshRNA的慢病毒载体L-shREST/NRSF,并能稳定转染大鼠间充质干细胞,感染效率达100%。4组shRNA序列均有基因沉默效果,并以第3组shRN序列效果最为明显。结果表明,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。 展开更多
关键词 慢病毒载体 rest/nrsf SHRNA 基因 骨髓间充质干细胞
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神经元限制性沉默因子REST/NRSF参与调控癫痫作用及机制研究
2
作者 刘慧 于佰卉 +5 位作者 王雅琪 陈熠灵 程子豪 马佳蕊 康子硕 张凡 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1727-1734,共8页
目的探究神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)参与调控癫痫作用及分子机制。方法采用免疫组织化学染色、免疫荧光、Western blot和qPCR检测癫痫患者病灶组织和海人藻酸(kainic acid,KA)癫痫小鼠海马脑区REST/NRSF表达水平的变化;采用病毒注... 目的探究神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)参与调控癫痫作用及分子机制。方法采用免疫组织化学染色、免疫荧光、Western blot和qPCR检测癫痫患者病灶组织和海人藻酸(kainic acid,KA)癫痫小鼠海马脑区REST/NRSF表达水平的变化;采用病毒注射,脑电图记录和行为学方法检测在海马CA1区分别敲低或过表达REST/NRSF后对小鼠癫痫发作的影响。结果癫痫患者病灶REST/NRSF表达水平相对于脑外伤患者脑组织明显升高;KA模型组小鼠海马CA1区REST/NRSF蛋白和mRNA水平均明显升高,Kv7.2、Kv7.3钾通道mRNA表达水平明显下调;脑内注射NMDA兴奋海马脑区小鼠REST/NRSF表达水平明显上调;海马CA1区敲低REST/NRSF明显升高Kv7.2、Kv7.3钾通道mRNA表达水平,明显降低小鼠脑电图棘波、尖波发放频率以及癫痫发作等级;海马CA1区过表达REST/NRSF明显降低Kv7.2、Kv7.3钾通道mRNA表达水平,明显升高小鼠棘波、尖波发放频率,癫痫症状明显加重。结论小鼠海马脑区REST/NRSF通过转录调控Kv7.2、Kv7.3钾通道参与癫痫疾病发生发展。 展开更多
关键词 rest/nrsf 癫痫 海马 海人藻酸 Kv7 channel KCNQ gene
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REST/NRSF和NMDAR1在脑胶质瘤中的表达及意义 被引量：1
3
作者 文志华 杨旋 张捷 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第1期50-52,55,共4页
目的 探讨抑制元素-1沉默转录因子（repressor ehmem silencing transcription factor,REST）/神经元限制性沉默因子（neuron-restrictive silencer factor,NRSF）和N-甲基-D-天冬氨酸受体-1（NMDAR1）在人脑胶质瘤中的表达及意义.方法... 目的 探讨抑制元素-1沉默转录因子（repressor ehmem silencing transcription factor,REST）/神经元限制性沉默因子（neuron-restrictive silencer factor,NRSF）和N-甲基-D-天冬氨酸受体-1（NMDAR1）在人脑胶质瘤中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学方法检测54例人脑胶质瘤组织标本中REST/NRSF和NMDAR1的表达.结果 54例人脑胶质瘤标本中可以观察到REST/NRSF和NMDARl的阳性表达,而且随着胶质瘤病理级别的提高阳性表达逐渐增强.在Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ级胶质瘤中NRSF/REST阳性表达百分数分别为 2.9%,6.1%,16.2%和20.6%,NMDAR1阳性表达百分数分别为 6.2%,11.3%,19.1%和22.7%.方差分析显示,两者组间差异均具有显著性（REST/NRSF F=1 278.93,NMDAR1 F=516.69,两者均P〈0.05）.两者的表达相关性分析呈正相关（r=0.961,P〈0.05）.结论 REST/NRSF和NMDAR1可能在人脑胶质瘤的发生发展过程中起比较重要的作用,而且对于判断胶质瘤的恶性程度和预后具有一定的参考意义. 展开更多
关键词 胶质瘤 抑制元素-1沉默转录因子 神经元限制性沉默因子 N-甲基-D-天冬氨酸受体-1
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NRSF／REST蛋白结构域锌指9核磁共振溶液结构确定
4
作者 居家莹 杨中正 +2 位作者 吴厚铭 王仲孚 曹春阳 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期705-708,共4页
NRSF/REST蛋白是神经元特异性基因表达的负调控因子.其C端抑制结构域的C2H2型锌指结构域与共抑制蛋白CoREST相互作用能部分诱导NRSF/REST蛋白的负调控功能,但具体的分子机制不清楚.为了深入地研究该机制,利用核磁共振方法确定了该结构域... NRSF/REST蛋白是神经元特异性基因表达的负调控因子.其C端抑制结构域的C2H2型锌指结构域与共抑制蛋白CoREST相互作用能部分诱导NRSF/REST蛋白的负调控功能,但具体的分子机制不清楚.为了深入地研究该机制,利用核磁共振方法确定了该结构域C2H2锌指的溶液三维结构,结果表明它具有典型的Cys2His2锌指三维结构,揭示该结构域在NRSF/REST蛋白与DNA或RNA特异性识别上可能具有某些关键作用. 展开更多
关键词 nrsf/rest 锌指9 核磁共振 溶液结构
原文传递
原核表达过程中非目标蛋白质识别与确认的方法:NRSF/REST蛋白功能结构域ZnF2-8原核表达过程中β-内酰胺酶的确认（英文）
5
作者 张岩 赵玢 +5 位作者 杨中正 申杰 胡伟 蓝文贤 吴厚铭 曹春阳 《波谱学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-11,共11页
大肠杆菌常被用来大量快速制备重组蛋白质.但是,在原核表达目标蛋白质时非目标蛋白质经常会意外表达.有时这些非目标蛋白质也非常有使用价值,但是最终确认这些非目标蛋白质的过程昂贵又及其耗时.基于此,该文发展了一个新的基于二维核磁... 大肠杆菌常被用来大量快速制备重组蛋白质.但是,在原核表达目标蛋白质时非目标蛋白质经常会意外表达.有时这些非目标蛋白质也非常有使用价值,但是最终确认这些非目标蛋白质的过程昂贵又及其耗时.基于此,该文发展了一个新的基于二维核磁共振波谱技术、X-单晶衍射技术、结合其他生物化学方法,确认在原核表达神经限制性沉默因子NRSF/REST蛋白(该蛋白能够特异性识别神经限制性沉默因子RE1ds DNA及神经限制性激活因子ds RNA,以调节神经元干细胞的发育)功能结构域Zn F2-8时非目标蛋白β-内酰胺酶(β-lactamase). 展开更多
关键词 nrsf/rest ZnF2—8 核磁共振(NMR) Β-内酰胺酶 意外表达
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REST在神经病理性疼痛中的研究进展 被引量：3
6
作者 王艺颖 梁策 +2 位作者 赵晨 张凡 张海林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1652-1654,共3页
抑制元素1沉默转录因子/神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)是一种转录抑制因子,它是一种DNA锌指结合蛋白,通过与一些基因中的特异的作用元件(NRSE)相结合,可以使其序列中的组蛋白发生去乙酰化,通过表观遗传重构来沉默靶基因,从而抑制靶... 抑制元素1沉默转录因子/神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)是一种转录抑制因子,它是一种DNA锌指结合蛋白,通过与一些基因中的特异的作用元件(NRSE)相结合,可以使其序列中的组蛋白发生去乙酰化,通过表观遗传重构来沉默靶基因,从而抑制靶基因的转录。近年来有研究表明,REST/NRSF介导诱导的几种特定基因的转录抑制是神经病理性疼痛发生和发展过程中的重要组成部分。该文就REST/NRSF与神经病理性疼痛之间的相关研究作一综述。 展开更多
关键词 rest/nrsf 神经病理性疼痛 神经元 靶基因 转录 抑制
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NRSE与NRSF及其对神经元特异性基因表达的调控作用 被引量：5
7
作者 王小飞 于盼盼 陆佩华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期595-599,共5页
神经限制性沉默元件(NRSE)是一段长度为21￣23bp的保守DNA序列,存在于许多神经元特异表达基因的转录调控区中,神经限制性沉默因子(NRSF)能特异性结合到NRSEdsDNA上,并通过其N端和C端阻遏结构域分别连接共阻遏蛋白Sin3A/B和CoREST,Sin3A... 神经限制性沉默元件(NRSE)是一段长度为21￣23bp的保守DNA序列,存在于许多神经元特异表达基因的转录调控区中,神经限制性沉默因子(NRSF)能特异性结合到NRSEdsDNA上,并通过其N端和C端阻遏结构域分别连接共阻遏蛋白Sin3A/B和CoREST,Sin3A招募HDAC对组蛋白进行去乙酰基化修饰,CoREST则作为平台蛋白招募特异的“沉默组件”,以此维持基因沉默.最近的研究显示,NRSEdsRNA能在转录水平与NRSF蛋白直接作用,而不是作为siRNA或miRNA在转录后水平启动神经元特异性基因的表达. 展开更多
关键词 神经元 调控作用 基因表达 nrsf 特异表达基因 DNA序列 转录调控区 特异性结合 dsRNA 特异性基因 转录后水平 miRNA siRNA 阻遏蛋白 基因沉默 直接作用 转录水平 限制性 结构域 酰基化 组蛋白 F蛋白 C端 N端
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抑制元素-1沉默转录因子和N-甲基-D-天冬氨酸受体-1在人脑胶质瘤中的表达及意义 被引量：1
8
作者 杨旋 张捷 +1 位作者 文志华 袁先厚 《医学新知》 CAS 2011年第3期182-184,F0004,共4页
目的探讨抑制元素-1沉默转录因子（repressor element silencing transcription factor, REST）／神经元限制性沉默因子 （ neuron - restrictive silencer factor, NRSF）和N-甲基-D-天冬氨酸受体-1（NMDAR1）在人脑胶质瘤中的表达及... 目的探讨抑制元素-1沉默转录因子（repressor element silencing transcription factor, REST）／神经元限制性沉默因子 （ neuron - restrictive silencer factor, NRSF）和N-甲基-D-天冬氨酸受体-1（NMDAR1）在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测40例人脑胶质瘤标本中REST／NRSF和NMDAR1的表达。结果40例人脑胶质瘤标本中可以观察到REST／NRSF和NMDAR1的阳性表达，而且随着胶质瘤病理级别的提高阳性表达逐渐增强，两者的表达呈正相关。结论REST／NRSF和NMDAR1可能在人脑胶质瘤的发生发展过程中起比较重要的作用，而且对于判断胶质瘤的恶性程度和预后具有-定的参考意义， 展开更多
关键词 胶质瘤 rest nrsf NMDAR
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