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SARS-CoV-2刺突蛋白RBD-Ferritin原核表达质粒的构建及其表达条件优化
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作者 曾佑琴 王强 +2 位作者 杨凯雯 夏宏 黄炼杰 《成都医学院学报》 2025年第4期560-564,共5页
目的 构建并表达RBD-Ferritin原核表达质粒,优化重组蛋白RBD-Ferritin诱导表达条件及纯化鉴定方法。方法 利用柔性linker依次将RBD_(D614G)、RBD_(BA.1)和Ferritin串联,Flag和6×His标签连接至Ferritin碳端,插入至pET32a(+)载体,构... 目的 构建并表达RBD-Ferritin原核表达质粒,优化重组蛋白RBD-Ferritin诱导表达条件及纯化鉴定方法。方法 利用柔性linker依次将RBD_(D614G)、RBD_(BA.1)和Ferritin串联,Flag和6×His标签连接至Ferritin碳端,插入至pET32a(+)载体,构建重组质粒pET32a-RBD_(D614G)-RBD_(BA.1)-Ferritin-Flag-6His并转化入BL21(DE3)大肠埃希菌的感受态细胞中,通过优化诱导过程中异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)终浓度(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L)、时间及温度(25℃诱导3、6、9 h;15℃诱导12、24、36 h),确定重组蛋白RBD-Ferritin的最佳诱导条件。经Ni-NTA镍柱纯化后的RBD-Ferritin蛋白溶液置于透析袋中,分别用含6、4、2、1 mol/L尿素的复性缓冲液进行复性。结果 经PCR及双酶切鉴定,成功构建出RBD-Ferritin原核表达载体。重组质粒转化菌成功诱导表达重组蛋白RBD-Ferritin,诱导的RBD-Ferritin蛋白相对分子质量约91 kDa,且在IPTG终浓度为0.4 mmol/L,25℃诱导6 h时表达量较高。结论 成功构建RBD-Ferritin原核表达质粒,且优化表达条件后可获得产量较高的重组蛋白RBD-Ferritin。 展开更多
关键词 质粒构建 重组蛋白rbd-Ferritin 原核表达 条件优化 蛋白纯化
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PEDV RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定
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作者 俞佳钰 姜宇航 +5 位作者 张国庆 伊立超 张爽 李乐天 秦爱建 李昌 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第7期1357-1365,共9页
根据猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea,PEDV)氨基酸序列(GenBank登录号:AKN45969.1)筛选针对受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的表位抗原,制备PEDV RBD多克隆抗体并进行鉴定。采用生物信息学分析软件对PEDV RBD... 根据猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea,PEDV)氨基酸序列(GenBank登录号:AKN45969.1)筛选针对受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的表位抗原,制备PEDV RBD多克隆抗体并进行鉴定。采用生物信息学分析软件对PEDV RBD潜在抗原表位进行预测,并与猪冠状病毒属毒株进行序列比对,筛选的优势抗原表位与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)载体蛋白进行偶联后直接合成多肽抗原,然后免疫小鼠制备相应的特异性抗体,并应用Western blot技术和间接免疫荧光技术(IFA)鉴定抗体的特异性,间接ELISA方法测定抗体效价。结果显示,选择的PEDV RBD优势表位序列与其他18株PEDV毒株的序列相似性高达100%,与11株猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)病毒株(27.8%~29.3%)以及16株PDCoV病毒株(10.5%~13.4%)序列相似性低,说明该表位保守性良好。Western blot显示,制备的多肽抗体能特异性识别Expi293F细胞与杆状病毒系统过表达的PEDV RBD蛋白,同时抗体1∶2000稀释后依然能够检测到PEDV感染Vero细胞表达的PEDV S蛋白,而与TGEV和PDCoV感染的ST细胞无反应,表明该多肽抗体特异性良好;ELISA检测小鼠血清中特异性抗体的效价最高可达1∶25600。上述结果显示,利用生物信息学技术成功预测PEDV RBD蛋白抗原表位,制备了特异性的PEDV RBD多肽抗体。 展开更多
关键词 PEDV rbd 抗血清 特异性
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基于DNA适配体-硫黄素T的传感器用于SARS-CoV-2RBD检测
3
作者 刘豪 温晓青 刘海波 《广西大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期446-456,共11页
自新型冠状病毒(SARS-CoV-2)暴发以来,快速、准确、安全高效的SARS-CoV-2检测方法在疫情防控中越来越体现出其重要性。RT-PCR、ELISA等传统检测方法难以满足SARS-CoV-2大规模传播的检测需求。荧光生物传感技术具有低成本、生物安全性高... 自新型冠状病毒(SARS-CoV-2)暴发以来,快速、准确、安全高效的SARS-CoV-2检测方法在疫情防控中越来越体现出其重要性。RT-PCR、ELISA等传统检测方法难以满足SARS-CoV-2大规模传播的检测需求。荧光生物传感技术具有低成本、生物安全性高、灵敏度高、选择性优异等优点,是SARS-CoV-2临床诊断的一个潜在方法。运用生物层干涉技术获得SARS-CoV-2 RBD的DNA适配体,并构建基于硫黄素T(ThT)与DNA适配体的生物荧光传感器,用于快速、准确定量检测RBD蛋白,所设计的传感器在0.01 ng/mL~10.00μg/mL范围内呈线性相关,最低检测限达到了0.0057 ng/mL。利用圆二色性光谱和分子对接技术探究了R1和ThT、R1和RBD蛋白分子间相互作用,验证了传感器的设计原理的可行性。 展开更多
关键词 适配体 荧光传感器 分子对接 硫黄素T SARS-CoV-2 rbd蛋白
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新冠病毒BA.5高免疫原性RBD抗原制备及抗体开发
4
作者 吴凡 覃鸿妮 +2 位作者 谢钰珍 任保永 戴东升 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第17期2653-2660,共8页
目的 开发针对新冠病毒BA.5变异株的高免疫原性抗原,并筛选出具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为疫苗和诊断试剂的开发提供新策略。方法 将斑马鱼卵黄蛋白中的ZP蛋白基因片段和HIS蛋白标签插入p CDNA3.4质粒,构建pCDNA3.4-RBD(BA.5)-Z... 目的 开发针对新冠病毒BA.5变异株的高免疫原性抗原,并筛选出具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为疫苗和诊断试剂的开发提供新策略。方法 将斑马鱼卵黄蛋白中的ZP蛋白基因片段和HIS蛋白标签插入p CDNA3.4质粒,构建pCDNA3.4-RBD(BA.5)-ZP-HIS重组载体,并转入293F细胞表达RBD-ZP蛋白。通过SDS-PAGE等方法验证蛋白表达,并检测其与ACE2受体分子和铝佐剂的结合能力。利用BALB/c小鼠模型评估融合蛋白的免疫原性,并通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。筛选出具有强中和阻断活性的单克隆抗体,并通过阻断ELISA方法检测抗体的中和活性。结果 ZP基因和HIS蛋白标签序列插入到pCDNA3.4载体中,并成功表达出50 kDa的RBD-ZP蛋白。免疫原性检测结果表明,ZP蛋白有效增强了RBD蛋白的免疫原性,并提高了其与ACE2受体的结合能力。进一步用RBD-ZP蛋白对小鼠进行免疫,通过杂交瘤技术克隆、筛选得到了8种能够与突变株和野生株特异性结合的单克隆抗体,其中3种能够有效阻断新冠病毒RBD蛋白与人体ACE2受体的结合。结论 本研究成功表达了RBD-ZP融合蛋白,显著增强了RBD蛋白的免疫原性和受体结合能力,并筛选出3种具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为新冠疫苗和诊断试剂的开发提供了有力支持。 展开更多
关键词 新冠病毒 rbd-ZP蛋白 抗原制备 单克隆抗体筛选
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城市游憩商业区系统SRBD的生长研究——以历史文化名城苏州为例 被引量:41
5
作者 陶伟 李丽梅 《旅游学刊》 CSSCI 北大核心 2003年第3期43-48,共6页
城市游憩商业区RBD是城市旅游研究的一个重要方面。一般认为 ,城市游憩商业区是城市中某一特定的区域 ,本文通过苏州实证性的研究指出 ,城市游憩商业区在城市发展的整体态势下呈现为动态的发展图景 ,尤其在城市飞速发展的今天 ,城市中... 城市游憩商业区RBD是城市旅游研究的一个重要方面。一般认为 ,城市游憩商业区是城市中某一特定的区域 ,本文通过苏州实证性的研究指出 ,城市游憩商业区在城市发展的整体态势下呈现为动态的发展图景 ,尤其在城市飞速发展的今天 ,城市中游憩商业区的形态往往会突破单核的固定结构而表现为多核结构 ,整体上又往往呈现为链状、环状或网状形态等等 ,从而形成一个游憩商业区系统SRBD。系统中各游憩商业区因其自身形成背景、发育过程和功能定位等的不同而有着不同的发展趋势 。 展开更多
关键词 城市游憩商业区 Srbd 城市旅游研究 城市发展 rbd
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Investigation of flight stability for fixed canard dual-spin projectile via CFD/RBD coupled method
6
作者 Gang Wang Tengyue Zhang +2 位作者 Tianyu Lin Haizhen Lin Ke Xi 《Defence Technology(防务技术)》 2025年第11期1-18,共18页
In this paper,a high-fidelity computational fluid dynamics(CFD)and rigid body dynamics(RBD)coupled platform for virtual flight simulation is developed to investigate the flight stability of fixed canard dual-spin proj... In this paper,a high-fidelity computational fluid dynamics(CFD)and rigid body dynamics(RBD)coupled platform for virtual flight simulation is developed to investigate the flight stability of fixed canard dual-spin projectile.The platform's reliability is validated by reproducing the characteristic resonance instability of such projectiles.By coupling the solution of the Unsteady Reynolds-Averaged Navier-Stokes equations and the seven-degree-of-freedom RBD equations,the virtual flight simulations of fixed canard dual-spin projectiles at various curvature trajectories are achieved,and the dynamic mechanism of the trajectory following process is analyzed.The instability mechanism of the dynamic instability during trajectory following process of the fixed canard dual-spin projectile is elucidated by simulating the rolling/coning coupled forced motion,and subsequently validated through virtual flight simulations.The findings suggest that an appropriate yaw moment can drive the projectile axis to precession in the tangential direction of the trajectory,thereby enhancing the trajectory following stability.However,the damping of the projectile attains its minimum value when the forward body equilibrium rotational speed(-128 rad/s)is equal to the negative of the fast mode frequency of the projectile.Insufficient damping leads to the fixed canard dual-spin projectile exiting the dynamic stability domain during the trajectory following,resulting in weakly damped instability.Keeping the forward body not rotating or increasing the spin rates to-192 rad/s can enhance the projectile's damping,thereby improving its dynamic stability. 展开更多
关键词 Fixed canard dual-spin projectile CFD/rbd coupled method Virtualflight simulation Following stability Dynamic stability
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论中小城市游憩商业区(RBD)的开发研究——以江苏省常州市为例 被引量:4
7
作者 郁琦 高峻 《北京第二外国语学院学报》 2007年第11期75-79,共5页
城市游憩商业区(RBD)是都市旅游研究的一个重要方面。文章通过对RBD概念的分析,以及比较中小城市发展RBD与大城市发展RBD的异同点,阐明了中小城市在发展RBD时的注意点。结合常州的实际情况,指出了其发展城市RBD的必要性和可能性,并提出... 城市游憩商业区(RBD)是都市旅游研究的一个重要方面。文章通过对RBD概念的分析,以及比较中小城市发展RBD与大城市发展RBD的异同点,阐明了中小城市在发展RBD时的注意点。结合常州的实际情况,指出了其发展城市RBD的必要性和可能性,并提出打造一个以"红梅公园"为中心,向四周延伸辐射的综合性、多元化、高档次的城市游憩商业区。 展开更多
关键词 rbd 中小城市rbd 常州天宁区 红梅公园
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武汉市RBD形成及其对城市发展的影响 被引量:10
8
作者 刘苏衡 张力民 李娟文 《现代城市研究》 2005年第11期62-65,共4页
首先对RBD的定义作了辨析,然后界定了武 汉市RBD的地域范围,在此基础上分析了促 使它形成的6要素。最后从RBD对武汉市地域 空间、商业、交通、文化游憩、环境诸方面 探讨了RBD区域对武汉城市发展的影响。
关键词 rbd 形成机制 城市发展 影响 武汉市
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城市滨水RBD开发研究:让滨水回归生活 被引量:11
9
作者 张环宙 吴茂英 沈旭炜 《经济地理》 CSSCI 北大核心 2013年第6期73-78,共6页
城市滨水区是城市空间结构的重要组成部分,也是城市地域文脉和城市本土生活的基本空间场所,正成为众多城市增长和城市更新的首要关注对象。以国际视野、本土实践为特点,提出城市滨水开发从CBD到RBD的路径演变,让滨水开发从生产回归到生... 城市滨水区是城市空间结构的重要组成部分,也是城市地域文脉和城市本土生活的基本空间场所,正成为众多城市增长和城市更新的首要关注对象。以国际视野、本土实践为特点,提出城市滨水开发从CBD到RBD的路径演变,让滨水开发从生产回归到生活,让水体功能真正融入到城市职能之中,实现"城.水"共兴。在梳理有关城市滨水区复兴与游憩开发以及城市增长理论的文献基础上,结合13处实地考察的国内外成功滨水RBD,就国内的滨水RBD的开发提出若干建议。 展开更多
关键词 城市滨水区 rbd CBD 案例研究
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城市RBD初步研究 被引量:133
10
作者 保继刚 古诗韵 《规划师》 1998年第4期59-64,共6页
关键词 旅游设施 部门 开发建设 rbd 城市 政府 规划建设 规划师 规划设计 理论与方法
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基于消费者娱乐休闲行为的RBD建设方向探讨——以长沙市为例 被引量:6
11
作者 许杰兰 王亮 《经济地理》 CSSCI 北大核心 2011年第7期1213-1218,1225,共7页
RBD建设是城市发展的重要研究课题,而分析城市的娱乐休闲消费行为,是合理规划建设RBD的重要途径。采用理论演绎法和现象归纳法得出生活形态、娱乐休闲态度、娱乐休闲行为、娱乐休闲场所选择的影响因素等变量体系,以长沙市RBD区域为调查... RBD建设是城市发展的重要研究课题,而分析城市的娱乐休闲消费行为,是合理规划建设RBD的重要途径。采用理论演绎法和现象归纳法得出生活形态、娱乐休闲态度、娱乐休闲行为、娱乐休闲场所选择的影响因素等变量体系,以长沙市RBD区域为调查对象,用大样本随机抽样调查方式获得基础数据,对生活形态和娱乐休闲态度进行聚类回归分析得到消费者类群,结合娱乐休闲消费行为进行类群命名;对娱乐休闲场所选择影响因素进行因子分析得到主要因子,与消费者类群进行对应分析揭示对应关系,基于研究结果提出RBD建设方向。 展开更多
关键词 rbd 娱乐休闲 消费行为 生活形态
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广州城市游憩商业区(RBD)的形成与发展 被引量:109
12
作者 保继刚 古诗韵 《人文地理》 CSSCI 北大核心 2002年第5期1-6,共6页
城市游憩商业区作为城市中一种新的功能区已逐渐成为城市新的空间要素 ,为旅游者、本地及周边地区的居民承担着提供旅游、休闲、娱乐、购物等功能 ,并作为城市游憩系统中的重要组成部分。本文对初具规模的广州城市RBD———天河城地段... 城市游憩商业区作为城市中一种新的功能区已逐渐成为城市新的空间要素 ,为旅游者、本地及周边地区的居民承担着提供旅游、休闲、娱乐、购物等功能 ,并作为城市游憩系统中的重要组成部分。本文对初具规模的广州城市RBD———天河城地段进行实证研究 ,分析城市RBD的形成过程和发展特点 ,总结其形成机制。 展开更多
关键词 广州 城市rbd 形成发展 形成机制
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SARS冠状病毒S蛋白RBD片段抗原多肽的合成及其多克隆抗体制备 被引量:2
13
作者 徐德意 肖洪广 高俊 《热带医学杂志》 CAS 2010年第9期1062-1064,共3页
目的研究SARS冠状病毒spike蛋白的抗原优势表位,合成多肽免疫小鼠获得多克隆抗体。方法通过固相Fmoc法合成spike蛋白三条多肽CQ19、LV11、TY14,与KLH肽链结合,免疫小鼠。结果固相多肽合成法合成KLH-CQ19、KLH-LV11和KLH-TY14三条多肽,用... 目的研究SARS冠状病毒spike蛋白的抗原优势表位,合成多肽免疫小鼠获得多克隆抗体。方法通过固相Fmoc法合成spike蛋白三条多肽CQ19、LV11、TY14,与KLH肽链结合,免疫小鼠。结果固相多肽合成法合成KLH-CQ19、KLH-LV11和KLH-TY14三条多肽,用KLH-CQ19多肽片段免疫小鼠获得多克隆抗体。结论 KLH-CQ19片段免疫小鼠获得有效多克隆抗体,为SARS的抗体后续研究提供了物质基础。 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 SPIKE蛋白 rbd 抗体
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基于休闲商务功能视角的RBD规划初探——以转型中的东莞市东城区为例 被引量:5
14
作者 方远平 袁奇峰 《规划师》 北大核心 2009年第1期53-58,共6页
休闲商务区(RBD)是重要的综合性城市功能区,对城市发展有促进作用。在面临经济转型困境、具备打造RBD基础条件的情况下,东莞市东城区以打造成东莞市区休闲商务区为发展目标,在高档休闲度假业、高档休闲商业、高档房地产业和区域性总部... 休闲商务区(RBD)是重要的综合性城市功能区,对城市发展有促进作用。在面临经济转型困境、具备打造RBD基础条件的情况下,东莞市东城区以打造成东莞市区休闲商务区为发展目标,在高档休闲度假业、高档休闲商业、高档房地产业和区域性总部经济基地的支撑和促进下,形成核心功能区、支撑功能区、基础功能区及辅助功能区的空间结构。 展开更多
关键词 休闲商务区(rbd) 规划构想 东莞市东城区
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国内城市游憩商业区(RBD)研究述评 被引量:9
15
作者 方远平 毕斗斗 《当代经济管理》 2007年第4期13-17,共5页
作为一种重要的综合性城市功能区,RBD越来越受到我国地理学界、旅游学界、城市规划界的关注。本文从RBD的概念及比较、类型、服务对象与功能、形成机制及对城市的影响、开发与规划、消费者行为等方面对我国国内研究的现状进行了全面的... 作为一种重要的综合性城市功能区,RBD越来越受到我国地理学界、旅游学界、城市规划界的关注。本文从RBD的概念及比较、类型、服务对象与功能、形成机制及对城市的影响、开发与规划、消费者行为等方面对我国国内研究的现状进行了全面的归纳总结,指出了研究的不足之处。针对大众休闲旅游时代的到来和中心城市生产性服务业发展的背景,导致RBD出现商务化特征等现象,作者提出了加强理论研究与学科整合、促进方法更新,以人为本、加强微观研究、推动规划实践,结合旅游发展动态开拓新研究领域,加强RBD商务化研究等建议。 展开更多
关键词 游憩商业区(rbd) 研究进展 研究建议
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RBD反应器生产细菌纤维素的研究 被引量:3
16
作者 齐香君 黄丹 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期82-84,共3页
使用RBD反应器发酵生产细菌纤维素,优化试验菌株在RBD反应器中的工艺条件。当培养基中的初糖浓度为3%时糖转化率较高,为1∶5.3;RBD反应器转速为20 r/min、发酵过程中发酵液pH值控制在4.5时细菌纤维素的产量较高;发酵液限制糖浓度为1.5%... 使用RBD反应器发酵生产细菌纤维素,优化试验菌株在RBD反应器中的工艺条件。当培养基中的初糖浓度为3%时糖转化率较高,为1∶5.3;RBD反应器转速为20 r/min、发酵过程中发酵液pH值控制在4.5时细菌纤维素的产量较高;发酵液限制糖浓度为1.5%,维持该浓度时细菌纤维素的产量可达到7.63g/L。 展开更多
关键词 细菌纤维素 rbd反应器 木醋杆菌
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RBD对老城区功能改造的模式研究 被引量:4
17
作者 董观志 梁增贤 《规划师》 2008年第7期43-47,共5页
随着体验经济时代的到来和新城市主义的兴起,城市新老城区的协调发展问题被提上了议事日程,尤其是老城区的功能改造已成为我国城市发展进程中迫切需要解决的突出问题。在RBD理论研究日益成熟和实践经验日益丰富的条件下,特色步行街作为... 随着体验经济时代的到来和新城市主义的兴起,城市新老城区的协调发展问题被提上了议事日程,尤其是老城区的功能改造已成为我国城市发展进程中迫切需要解决的突出问题。在RBD理论研究日益成熟和实践经验日益丰富的条件下,特色步行街作为老城区功能改造的一种流行模式已表现出明显的局限性,迫切需要进行RBD模式的创新与发展。为此,可遵循用差异激活个性的老城区功能改造理念,采用文化社区、休闲社区、娱乐社区、主题公园和主题街区五种RBD创新模式。 展开更多
关键词 rbd 模式 功能改造 老城区
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从CBD到RBD——传统CBD发展方向探析 被引量:27
18
作者 刘松龄 《现代城市研究》 2003年第4期59-64,共6页
在评述国内外对CBD与RBD研究的基础上,深入分析了CBD与RBD的关系,提出CBD根据其自身发展的需要,发展RBD的可能。接着以此为切入点,先指出传统CBD发展的障碍,然后论证传统CBD转型为RBD是克服其发展障碍的有效途径。
关键词 商业区 城市旅游 CBD rbd 旧城改造
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城市RBD形态模式研究——以上海、武汉为例 被引量:1
19
作者 刘恒飞 《商丘师范学院学报》 CAS 2008年第6期103-105,共3页
城市游憩商业区是城市游憩业发展的重要形式之一,同时也是城市旅游的重要吸引物.本文对RBD相关概念进行界定,并归纳出城市RBD 3种主要类型.在此基础上,通过对上海、武汉RBD发展研究,提出了城市RBD发展的主要形态模式,旨在为国内城市RBD... 城市游憩商业区是城市游憩业发展的重要形式之一,同时也是城市旅游的重要吸引物.本文对RBD相关概念进行界定,并归纳出城市RBD 3种主要类型.在此基础上,通过对上海、武汉RBD发展研究,提出了城市RBD发展的主要形态模式,旨在为国内城市RBD的建设提供参考. 展开更多
关键词 城市rbd 形态模式 上海 武汉rbd研究
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城市RBD空间结构理论研究——以上海城隍庙和苏州观前街为例 被引量:7
20
作者 张立生 《地域研究与开发》 CSSCI 北大核心 2007年第5期65-69,84,共6页
以游憩者比重和旅游企业比重2个变量为指标,对中国比较成熟的2个城市RBD——上海城隍庙和苏州观前街游憩商业区的内部空间结构进行深入研究。研究发现:目前,这2个城市RBD的空间结构都出现比较典型的内部空间结构特征,这些圈层由内到外... 以游憩者比重和旅游企业比重2个变量为指标,对中国比较成熟的2个城市RBD——上海城隍庙和苏州观前街游憩商业区的内部空间结构进行深入研究。研究发现:目前,这2个城市RBD的空间结构都出现比较典型的内部空间结构特征,这些圈层由内到外呈现比较有规律的圈层变化。在对这些特征形成原因分析的基础上,从理论层面提出在特定的假设条件下,城市RBD的圈层结构特征由内到外将会出现核心圈层、边缘圈层和辐射圈层。最后,对该理论在不同情况下的变形进行了推理。 展开更多
关键词 城市rbd 空间结构 城隍庙 观前街 上海市 苏州市
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