目的:使用高通量测序法辅助开发RAS相关区域家族1A(Ras-Association Domain Family 1A,RASSF1A)基因甲基化定性检测试剂盒(荧光PCR法)。方法:提取37例肺癌血浆样本DNA进行亚硫酸氢盐修饰转化,使用高通量测序方法检测样本的亚硫酸氢盐转...目的:使用高通量测序法辅助开发RAS相关区域家族1A(Ras-Association Domain Family 1A,RASSF1A)基因甲基化定性检测试剂盒(荧光PCR法)。方法:提取37例肺癌血浆样本DNA进行亚硫酸氢盐修饰转化,使用高通量测序方法检测样本的亚硫酸氢盐转化效率和RASSF1A基因CpG位点的甲基化水平,之后使用荧光PCR法检测样本RASSF1A基因的甲基化状态。结果:高通量测序显示样本DNA的平均转化效率为99.47%;根据CpG位点甲基化水平的双向聚类分析结果,筛选出第26~30号CpG位点作为荧光PCR法的检测位点,以甲基化水平5%作为阈值线,ΔCt Cut-off值为9,得出两种检测方法对37例样本的测定结果一致。结论:本研究借助高通量测序技术成功构建基于荧光PCR法的RASSF1A基因甲基化定性检测方法,操作简便、成本低、效率高,适用于临床RASSF1A基因甲基化状态常规化检测。展开更多
目的探讨肺癌患者痰标本中FH IT、P16、MGMT、RASSF1A和APC等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值。方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,检测47例肺癌组织及对应的痰标本FHIT、P16...目的探讨肺癌患者痰标本中FH IT、P16、MGMT、RASSF1A和APC等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值。方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,检测47例肺癌组织及对应的痰标本FHIT、P16,MGMT、RASSF1A和APC基因启动子区甲基化状态。24例肺良性疾病患者痰标本作为对照。结果 47例肺癌组织标本中FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因启动子区甲基化检出率分别为40.4%(19/47)、53.2%(25/47)、36.2%(17/47)、21.3%(10/47)和38.3%(18/47);对照的痰标本中五者甲基化检出率分别为38.3%(18/47)、48.9%(23/47)、36.2%(17/47)、17.0%(8/47)和29.8%(14/47),两组甲基化检出率存在着一致性[P>0.05;κ(0.8～1.0)]。24例肺良性病变痰标本中未检测到任何异常甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。五项指标联合检测可明显提高肺癌检测的灵敏度(80.9%)和特异度(100.0%)。FHIT和P16基因痰标本甲基化检出率与患者吸烟指数有相关性(P<0.05)。结论痰标本中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标。展开更多
文摘目的:使用高通量测序法辅助开发RAS相关区域家族1A(Ras-Association Domain Family 1A,RASSF1A)基因甲基化定性检测试剂盒(荧光PCR法)。方法:提取37例肺癌血浆样本DNA进行亚硫酸氢盐修饰转化,使用高通量测序方法检测样本的亚硫酸氢盐转化效率和RASSF1A基因CpG位点的甲基化水平,之后使用荧光PCR法检测样本RASSF1A基因的甲基化状态。结果:高通量测序显示样本DNA的平均转化效率为99.47%;根据CpG位点甲基化水平的双向聚类分析结果,筛选出第26~30号CpG位点作为荧光PCR法的检测位点,以甲基化水平5%作为阈值线,ΔCt Cut-off值为9,得出两种检测方法对37例样本的测定结果一致。结论:本研究借助高通量测序技术成功构建基于荧光PCR法的RASSF1A基因甲基化定性检测方法,操作简便、成本低、效率高,适用于临床RASSF1A基因甲基化状态常规化检测。
文摘目的探讨肺癌患者痰标本中FH IT、P16、MGMT、RASSF1A和APC等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值。方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,检测47例肺癌组织及对应的痰标本FHIT、P16,MGMT、RASSF1A和APC基因启动子区甲基化状态。24例肺良性疾病患者痰标本作为对照。结果 47例肺癌组织标本中FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因启动子区甲基化检出率分别为40.4%(19/47)、53.2%(25/47)、36.2%(17/47)、21.3%(10/47)和38.3%(18/47);对照的痰标本中五者甲基化检出率分别为38.3%(18/47)、48.9%(23/47)、36.2%(17/47)、17.0%(8/47)和29.8%(14/47),两组甲基化检出率存在着一致性[P>0.05;κ(0.8～1.0)]。24例肺良性病变痰标本中未检测到任何异常甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。五项指标联合检测可明显提高肺癌检测的灵敏度(80.9%)和特异度(100.0%)。FHIT和P16基因痰标本甲基化检出率与患者吸烟指数有相关性(P<0.05)。结论痰标本中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标。
