大鼠肉瘤(rat sarcoma,Ras)基因是实体肿瘤中最常见的原癌基因,由于突变亚型中缺乏药理学上可靶向的口袋,Ras历来被认为是不可成药的靶点。然而,药物设计的改进最终导致了对活性或非活性状态的突变鼠类肉瘤病毒癌基因(kirsten rat sarco...大鼠肉瘤(rat sarcoma,Ras)基因是实体肿瘤中最常见的原癌基因,由于突变亚型中缺乏药理学上可靶向的口袋,Ras历来被认为是不可成药的靶点。然而,药物设计的改进最终导致了对活性或非活性状态的突变鼠类肉瘤病毒癌基因(kirsten rat sarcoma viral oncogene,Kras)具有选择性的抑制剂的开发。其中一些抑制剂已被证明对Kras G12C/G12D突变癌症患者有效,并已成为实践的改变。癌细胞和肿瘤微环境中RAS信号传导的理解不断提高,逐渐探究出新的药物或联合治疗的潜力,目前正在临床试验中进行探索。本文阐述了Ras突变的作用机制及黑色素瘤中Ras突变的特点及近年来该领域的研究进展,旨在展示该突变患者的治疗现状,并对各种新型治疗方法的数据进行归纳和总结,为临床实践方案提供新的治疗思路。展开更多
目的 探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)通过Ras同源基因家族成员A(ras homolog gene family member A,RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(rho-associated protein kinase 1,ROCK1)信号通路调控尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)诱导的大鼠...目的 探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)通过Ras同源基因家族成员A(ras homolog gene family member A,RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(rho-associated protein kinase 1,ROCK1)信号通路调控尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(normal rat kidney cell-52E,NRK-52E)损伤的作用机制。方法 体外培养NRK-52E细胞,CCK8法检测不同浓度UⅡ对NRK-52E细胞的影响,并选择适宜的浓度进行后续实验。实验分组为:(1)对照组;(2)模型组;(3)UⅡ受体拮抗剂组;(4)AS-Ⅳ组;(5)RhoA激酶抑制剂(法舒地尔)组;(6)氯沙坦组。细胞免疫荧光法检测各组细胞中G蛋白偶联受体14、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、肾脏损伤因子1的表达情况;反转录聚合酶链反应法检测各组细胞中RhoA、ROCK1、α-SMA mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测每组细胞中RhoA、ROCK1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1蛋白的表达情况。结果(1)0 mol/L浓度UⅡ组的细胞活力为100%,10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6) mol/L浓度UⅡ组细胞活力分别为(51.52±0.15)%、(61.70±0.09)%、(71.90±0.17)%、(61.27±0.11)%、(52.73±0.13)%,说明UⅡ可对细胞造成一定的损伤,其中10~(-8) mol/L浓度的UⅡ对细胞损伤的影响低于其他4个组(P<0.05)。(2)免疫荧光结果显示:对照组、模型组、UⅡ受体拮抗剂组、AS-Ⅳ组、法舒地尔组、氯沙坦组α-SMA免疫荧光强度定量分析分别为(6.72±0.10)、(9.59±2.23)、(8.00±0.13)、(7.93±0.14)、(8.09±0.09)、(8.10±0.17);肾脏损伤因子1免疫荧光强度定量分析分别为(7.48±0.09)、(10.42±0.08)、(7.51±0.08)、(7.71±0.08)、(7.70±0.07)、(7.45±0.15);G蛋白偶联受体14免疫荧光强度定量分析分别为(4.05±0.07)、(8.00±0.06)、(5.04±0.02)、(6.03±0.07)、(6.02±0.08)、(6.02±0.09)。(3)反转录聚合酶链反应结果显示:对照组、模型组、UⅡ受体拮抗剂、AS-Ⅳ组、法舒地尔组、氯沙坦组α-SMA mRNA定量分析分别为(1.00±0.00)、(1.96±0.01)、(1.53±0.02)、(1.52±0.08)、(1.53±0.03)、(1.52±0.09);RhoA mRNA定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.10±0.02)、(1.44±0.02)、(1.55±0.03)、(1.53±0.07)、(1.66±0.04);ROCK1 mRNA定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.09±0.04)、(1.51±0.02)、(1.56±0.02)、(1.54±0.01)、(1.51±0.02)。(4)Western Blot结果显示:对照组、模型组、UⅡ受体拮抗剂、AS-Ⅳ组、法舒地尔组、氯沙坦组天冬氨酸蛋白水解酶1蛋白表达定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.53±0.03)、(1.57±0.01)、(1.55±0.09)、(1.56±0.06)、(1.56±0.01);RhoA蛋白表达定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.85±0.08)、(1.62±0.07)、(1.60±0.01)、(1.61±0.02)、(1.60±0.01);ROCK1蛋白表达定量分析分别为(1.00±0.00)、(2.37±0.09)、(1.45±0.05)、(1.54±0.03)、(1.39±0.05)、(1.52±0.01)。结论 AS-Ⅳ可通过下调RhoA/ROCK1信号通路改善UⅡ诱导的NRK-52E细胞损伤。展开更多
