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中间偃麦草RAR1基因的分离及其在小麦背景中的功能分析 被引量:11
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作者 廖勇 张增艳 +5 位作者 杜丽璞 徐惠君 姚乌兰 石建业 任正隆 辛志勇 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1667-1674,共8页
【目的】RAR1是大麦抗白粉病基因和多种植物抗病(resistance,R)基因介导的抗病信号途径中的重要信号元件。为明确RAR1在小麦抗白粉病反应中的作用,为小麦广谱抗病分子育种提供基因资源,开展了本研究。【方法】采用生物信息学技术、RT-PC... 【目的】RAR1是大麦抗白粉病基因和多种植物抗病(resistance,R)基因介导的抗病信号途径中的重要信号元件。为明确RAR1在小麦抗白粉病反应中的作用,为小麦广谱抗病分子育种提供基因资源,开展了本研究。【方法】采用生物信息学技术、RT-PCR和RACE方法分离克隆中间偃麦草RAR1基因,通过酶切和连接构建该基因的单子叶高效表达载体,采用基因枪法转化小麦,对转基因小麦植株进行分子检测、表达分析和抗病鉴定。【结果】分离克隆出中间偃麦草RAR1基因,其编码蛋白具有典型的RAR1功能结构域;构建了中间偃麦草RAR1基因的单子叶高效表达载体pUBI∷RAR1;用基因枪法轰击小麦推广品种扬麦12幼胚愈伤组织1545个,获得152株再生植株,通过PCR检测出阳性植株18株,转化率为1.17%;对T1、T2代转基因材料进行PCR检测、RT-PCR分析和白粉病抗病鉴定,结果表明转入的RAR1基因能够在小麦背景中遗传,RAR1基因的超量表达可提高小麦对白粉病菌的抗性、拓宽小麦的抗病谱。【结论】分离出中间偃麦草RAR1基因,RAR1基因在小麦中超量表达可提高小麦对白粉病菌的抗性、拓宽其抗病谱,可以作为小麦白粉病广谱抗性分子育种的潜在的重要基因资源。 展开更多
关键词 rar1 分离 小麦 转基因 PCR检测 抗病性
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果蔗Rar1基因反义载体的构建及遗传转化初步研究 被引量:1
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作者 林生 潘大仁 +2 位作者 周以飞 陈观水 张绪璋 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第21期64-68,共5页
根据其它作物已克隆的RAR1基因的两个氨基酸保守位点设计简并引物,用果蔗cDNA进行PCR扩增,得到果蔗Rar1基因片段序列,推测出的氨基酸序列与其他作物推测出的氨基酸序列的CCCH结构域和一个锌结合域CHORD-Ⅱ具有很高的相似性,初步证明了... 根据其它作物已克隆的RAR1基因的两个氨基酸保守位点设计简并引物,用果蔗cDNA进行PCR扩增,得到果蔗Rar1基因片段序列,推测出的氨基酸序列与其他作物推测出的氨基酸序列的CCCH结构域和一个锌结合域CHORD-Ⅱ具有很高的相似性,初步证明了所克隆的果蔗Rar1基因片段具有正确的序列信息。并构建了果蔗Rar1反义植物表达载体pCAM-RAR1,转化农杆菌后侵染果蔗的愈伤组织并得到初步验证,为转基因植物的获得以及果蔗Rar1基因功能鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 果蔗 rar1基因 载体构建 遗传转化
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新模式植物短柄二叶草SGT1和RAR1基因沉默和蛋白纯化载体构建 被引量:1
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作者 张岳平 瞿华香 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期138-144,共7页
短柄二叶草作为一种新型的模式植物,已成为当前研究热点。其具有基因组小、生长周期短、生存环境简单和容易人工转化等重要生理和遗传特性,被认为是一种潜力巨大的人类研究能源和粮食作物的重要模式植物。SGT1和RAR1基因是高度保守的并... 短柄二叶草作为一种新型的模式植物,已成为当前研究热点。其具有基因组小、生长周期短、生存环境简单和容易人工转化等重要生理和遗传特性,被认为是一种潜力巨大的人类研究能源和粮食作物的重要模式植物。SGT1和RAR1基因是高度保守的并与植物抗病功能紧密相关的重要基因。本文采用Gateway克隆技术构建了SGT1和RAR1的基因沉默表达载体。阳性克隆载体经PCR、酶切和测序鉴定。为进一步研究SGT1和RAR1互作蛋白及其功能,采用该克隆技术将基因cDNA全长克隆至串联亲和纯化蛋白表达载体pEarleyGate205中,为纯化SGT1和RAR1及其互作蛋白提供了基础。正确的阳性克隆载体经农杆菌介导转化至短柄二叶草Bd21获得转化株,以期进一步研究SGT1和RAR1基因及蛋白互作对于短柄二叶草抗病功能的影响。 展开更多
关键词 短柄二叶草 SGT1和rar1 基因沉默 Gateway克隆 串联亲和纯化
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TaRAR1 is Required for Lr24-Mediated Wheat Leaf Rust Resistance 被引量:2
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作者 ZHANG Li-rong YANG Wen-xiang LIU Da-qun 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第11期1732-1738,共7页
Virus-induced gene silencing (VIGS) offers a rapid and high throughout technology platform for the analysis of gene function in plants. The barley stripe mosaic virus (BSMV) VIGS system was optimized in studies si... Virus-induced gene silencing (VIGS) offers a rapid and high throughout technology platform for the analysis of gene function in plants. The barley stripe mosaic virus (BSMV) VIGS system was optimized in studies silencing phytoene desaturase expression in wheat, and demonstrated that infection with BSMV construct carrying a 412 bp fragment of TaRAR1 caused conversion of incompatible to compatible interactions to Lr24-mediated resistance in wheat TcLr24 and cultivar 5R615 harboring Lr24 whereas infection with a control construct had no effect on resistance or susceptibility. RT- PCR analysis showed that BSMV-induced gene silencing could be detected at mRNA levels. These studies indicated that TaRAR1 was a required component for Lr24-mediated race-specific resistance and the BSMV-VIGS was a powerful tool for dissecting the genetic pathways of disease resistance in hexaploid wheat. 展开更多
关键词 disease resistance barley stripe mosaic virus (BSMV) virus-induced gene silencing (VIGS) Lr24 rar1
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基因枪介导的小麦叶片瞬间表达体系的优化及应用 被引量:1
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作者 邢莉萍 钱晨 +4 位作者 李颖波 俞奇 曹爱忠 王秀娥 陈佩度 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期143-150,共8页
麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的... 麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的多个转化参数进行优化,筛选出表达频率最高的参数组,即小麦叶片采用固体保鲜培养基固定,钨粉用量为每枪300μg,质粒DNA用量为每枪750ng,可裂膜氦压为1 350psi,可裂膜与受体膜距离6mm,受体与阻挡网距离6cm,与先前报道的方法相比表达频率有显著提高。应用上述参数在感病小麦品种离体叶片中过量表达一个已知具有抗白粉病功能的簇毛麦SGT1基因,结果表明该基因瞬间表达使互作细胞吸器指数降低,表现为对白粉病菌侵入和吸器形成具有抑制作用,在一定程度上增强了表达细胞对白粉病菌的抗性,使目标基因的抗性功能再次得到印证。本研究还进一步运用该优化体系开展瞬间表达介导的基因沉默(TIGS)实验,将携带抗白粉病基因Pm21的抗病小麦品种南农9918和感病小麦品种扬麦158中的内源SGT1和RAR1分别或同时沉默,结果显示南农9918的叶片表皮与白粉菌互作细胞的吸器指数增高,在一定程度上降低了表达细胞对白粉菌的抗性。而扬麦158中互作细胞的吸器指数较对照变化不显著。说明这两个基因均分别参与了Pm21介导的抗白粉病信号途径,且二者共同作用与白粉病抗性关系更加密切。 展开更多
关键词 小麦 叶片表皮细胞 瞬间表达 白粉菌互作 SGT1 rar1
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SGT1在植物抗病反应中的功能研究进展 被引量:6
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作者 王凯 张增艳 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2008年第1期115-118,共4页
SGT1是多种植物抗病基因介导的抗病信号途径的必要组件。SGT1基因的突变或沉默会导致多种植物R基因介导抗病性的丧失。另外,SGT1还参与调控植物的非宿主抗性(non-host resistance)。SGT1主要作为分子伴侣或调控泛素化对植物抗病反应进... SGT1是多种植物抗病基因介导的抗病信号途径的必要组件。SGT1基因的突变或沉默会导致多种植物R基因介导抗病性的丧失。另外,SGT1还参与调控植物的非宿主抗性(non-host resistance)。SGT1主要作为分子伴侣或调控泛素化对植物抗病反应进行调控。本文综述了SGT1蛋白结构、SGT1在不同植物抗病反应中的重要性与作用机制,并对SGT1在植物抗病基因工程中的应用潜力进行讨论。 展开更多
关键词 植物抗病 信号途径 SGTl RARl HSP90
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芬维A胺通过抑制ERK1/2活化促进人肝癌细胞凋亡 被引量:5
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作者 吴小琴 杨辉 +5 位作者 钟赟 苏杭 林漫鹏 丁元伟 刘世明 林秀珍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第18期3006-3008,共3页
目的:探讨芬维A胺对人肝癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:用芬维A胺(10μmol/L)处理人肝癌细胞株(SNU475,SNU449,SNU182,SK-HEP-1,PLC/PRF/5),通过CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒和Caspase-3/7检测试剂盒检测芬维A胺的凋亡效... 目的:探讨芬维A胺对人肝癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:用芬维A胺(10μmol/L)处理人肝癌细胞株(SNU475,SNU449,SNU182,SK-HEP-1,PLC/PRF/5),通过CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒和Caspase-3/7检测试剂盒检测芬维A胺的凋亡效应;通过实时定量PCR检测核受体Nur77、维甲酸受体β(retinoic acid receptor,RARβ)mRNA的变化;并用Western-blot检测细胞ERK1/2蛋白的激活情况。结果:芬维A胺处理24h能诱导SK-HEP-1、PLC/PRF/5细胞凋亡;但对SNU475、SNU449、SNU182细胞凋亡影响不显著(P>0.05)。在敏感的SK-HEP-1、PLC/PRF/5细胞中,芬维A胺显著降低ERK1/2蛋白活化,但对核受体Nur77、RARβmRNA表达无显著影响。结论:芬维A胺体外诱导人肝癌SK-HEP-1、PLC/PRF/5细胞凋亡可能通过抑制ERK1/2蛋白活化起作用。 展开更多
关键词 肝肿瘤 芬维A胺 细胞凋亡 ERK1/2Nur77RARβ
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