为建立多态性高、稳定性好的洋葱RAPD-PCR反应体系,采用正交设计,研究了Taq酶、Mg2+、引物和dNTP 4种RAPD-PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,在此基础上对模板DNA用量、扩增程序中退火温度和反应循环次数进行了筛选。试验结果表明,...为建立多态性高、稳定性好的洋葱RAPD-PCR反应体系,采用正交设计,研究了Taq酶、Mg2+、引物和dNTP 4种RAPD-PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,在此基础上对模板DNA用量、扩增程序中退火温度和反应循环次数进行了筛选。试验结果表明,洋葱20μl RAPD-PCR优化反应体系为1×Buffer、2.0 mmo1/L Mg2+、1.0 UTaqDNA聚合酶、200μmo1/L dNTP、0.6μmo1/L引物、2%甘油和15 ng DNA模板;PCR扩增程序为94℃预变性4 m in;94℃变性30 s,35℃退火40 s,72℃延长1.5 m in,45个循环;72℃保温延伸7 m in。展开更多
以河鲈为研究材料,对河鲈RAPD-PCR的反应体系进行优化和适用引物的筛选,采用正交设计方法,选用L17(54)正交表,以河鲈基因组DNA为模板,对影响PCR反应较大的4个因素:Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物在5个水平上进行优化试验,得到河鲈最优RAPD-PC...以河鲈为研究材料,对河鲈RAPD-PCR的反应体系进行优化和适用引物的筛选,采用正交设计方法,选用L17(54)正交表,以河鲈基因组DNA为模板,对影响PCR反应较大的4个因素:Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物在5个水平上进行优化试验,得到河鲈最优RAPD-PCR反应体系:25μL反应体系中含有30 ng DNA模板1.5μL,10μmol/L引物0.7μL,10×buffer 2.5μL,25μmol/L dNTPs 0.4μL,5 U Taq酶0.2μL,2.5 mmol/L MgCl23.0μL;利用优化体系从50条引物中筛选得到10条适用引物,并确定了引物的最佳退火温度。展开更多
文摘为建立多态性高、稳定性好的洋葱RAPD-PCR反应体系,采用正交设计,研究了Taq酶、Mg2+、引物和dNTP 4种RAPD-PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,在此基础上对模板DNA用量、扩增程序中退火温度和反应循环次数进行了筛选。试验结果表明,洋葱20μl RAPD-PCR优化反应体系为1×Buffer、2.0 mmo1/L Mg2+、1.0 UTaqDNA聚合酶、200μmo1/L dNTP、0.6μmo1/L引物、2%甘油和15 ng DNA模板;PCR扩增程序为94℃预变性4 m in;94℃变性30 s,35℃退火40 s,72℃延长1.5 m in,45个循环;72℃保温延伸7 m in。
文摘以河鲈为研究材料,对河鲈RAPD-PCR的反应体系进行优化和适用引物的筛选,采用正交设计方法,选用L17(54)正交表,以河鲈基因组DNA为模板,对影响PCR反应较大的4个因素:Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物在5个水平上进行优化试验,得到河鲈最优RAPD-PCR反应体系:25μL反应体系中含有30 ng DNA模板1.5μL,10μmol/L引物0.7μL,10×buffer 2.5μL,25μmol/L dNTPs 0.4μL,5 U Taq酶0.2μL,2.5 mmol/L MgCl23.0μL;利用优化体系从50条引物中筛选得到10条适用引物,并确定了引物的最佳退火温度。
