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正交试验设计在建立杜鹃花RAPD-PCR反应体系中的应用 被引量：22
1
作者 张丽 周兰英 +1 位作者 肖千文 吴开志 《北方园艺》 CAS 北大核心 2007年第5期124-126,共3页
利用正交试验对影响RAPD-PCR反应体系的各种因素进行研究,从而建立适合杜鹃花RAPD反应的最佳反应体系,最终选择杜鹃基因组RAPD-PCR的最佳扩增反应体系,即模板DNA80ng、随机引物0.5μmol/L、dNTPs1.1mmol/L、MgCl22.5mmol/L,1.2μmol/LTa... 利用正交试验对影响RAPD-PCR反应体系的各种因素进行研究,从而建立适合杜鹃花RAPD反应的最佳反应体系,最终选择杜鹃基因组RAPD-PCR的最佳扩增反应体系,即模板DNA80ng、随机引物0.5μmol/L、dNTPs1.1mmol/L、MgCl22.5mmol/L,1.2μmol/LTag—DNA聚合酶,buffer2μL,总反应体系20μL。试验设计的6个因子、5个水平中,Mg2+、dNTPs和引物的浓度是主要因子,其中Mg2+的浓度对试验的影响最大,dNTPs和引物浓度在较低的水平就可满足需要,高浓度并没有显著提高试验效果。 展开更多
关键词 杜鹃花 rapd--pcr 正交试验设计
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不同保藏处理的昆虫标本DNA提取及其随机扩增多态DNA反应 被引量：63
2
作者 张迎春 刘波 +1 位作者 郑哲民 李力 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期693-695,共3页
实验利用CTAB法对柳二十斑叶甲Chrysomelavigintipunctata (Scopoli)、异色瓢虫HarmoniaaxyridisPollas、七星瓢虫Coc cinellaseptempunctataLinnaeus、小地老虎Agrotisypsilon (Rottemberg)、红蜻CrocothemisserviliaDrury、无齿稻蝗Ox... 实验利用CTAB法对柳二十斑叶甲Chrysomelavigintipunctata (Scopoli)、异色瓢虫HarmoniaaxyridisPollas、七星瓢虫Coc cinellaseptempunctataLinnaeus、小地老虎Agrotisypsilon (Rottemberg)、红蜻CrocothemisserviliaDrury、无齿稻蝗OxyaabentataWil lemse和中华稻蝗Oxyachinensis (Thunberg)等 7种昆虫进行了基因组DNA提取。从自然干燥标本、烘干标本及酒精浸泡标本获得的DNA均可用于RAPD PCR反应 ,且烘干标本、酒精浸泡标本提取效果优于自然干燥标本。这种提取方法简便易行 ,容易掌握 ,且耗资小于其它分子生物学方法。 展开更多
关键词 保藏处理 昆虫标本 DNA提取 RAPD-PCR 分子系统学
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我国烟蚜种群分化的RAPD分析 被引量：47
3
作者 杨效文 张孝羲 +1 位作者 陈晓峰 王瑛 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期372-380,共9页
用RAPDPCR技术研究了我国烟草上烟蚜Myzuspersicae(Sulzer)的种群分化。结果表明:我国烟蚜的不同地理种群和不同体色之间DNA均呈现出多态性,且不同的引物可在不同水平上反应出烟蚜种群的DNA多态性。Nei的遗传距离表明我国烟草上烟蚜的... 用RAPDPCR技术研究了我国烟草上烟蚜Myzuspersicae(Sulzer)的种群分化。结果表明:我国烟蚜的不同地理种群和不同体色之间DNA均呈现出多态性,且不同的引物可在不同水平上反应出烟蚜种群的DNA多态性。Nei的遗传距离表明我国烟草上烟蚜的分化仅在种群水平上,并未达到亚种水平。用相似性指数和Nei的遗传距离对所筛选的三个引物OPX04、OPX06和OPX19的扩增结果进行聚类,虽然二者的结果不一致,但均可反应出烟蚜的地理种群和体色生物型的DNA差异。在DNA水平上,与完全周期生活史的烟蚜相比,完全周期和不完全周期生活史混合发生的烟蚜与不完全周期生活史的烟蚜更为接近,而两种生活史混合发生的烟蚜之间无明显差异。从体色看,红色比黄绿色更接近褐色。 展开更多
关键词 烟蚜 RAPD PCR 相似性指数 遗传距离 种群分化
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辣椒RAPD系统的建立及在杂种纯度鉴定中的应用 被引量：36
4
作者 黄三文 张宝玺 +4 位作者 郭家珍 杨桂梅 朱德蔚 堵玫珍 杨婕 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期77-79,共3页
对辣椒RAPD反应的各个环节 ,包括DNA提取、PCR反应和电泳检测进行了筛选和优化 ,确定了一个简单、高效、相对稳定的RAPD系统 ,并筛选出 12个较稳定的RAPD标记。可以用于“中椒”系列辣椒的 9个杂交种的纯度鉴定。
关键词 辣椒 RAPD-PCR 杂种一代 纯度鉴定
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天敌对烟粉虱捕食作用的SCAR标记检测 被引量：16
5
作者 吕志创 张桂芬 +1 位作者 万方浩 邓国荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1167-1173,共7页
以烟粉虱和捕食性天敌为研究对象,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,通过对目的片段的克隆与测序设计烟粉虱特征片段扩增引物,检验该引物的种、虫态及性别特异性,并利用该引物检测捕食性天敌对棉田烟粉虱的捕食作用。研究结果表明,利用... 以烟粉虱和捕食性天敌为研究对象,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,通过对目的片段的克隆与测序设计烟粉虱特征片段扩增引物,检验该引物的种、虫态及性别特异性,并利用该引物检测捕食性天敌对棉田烟粉虱的捕食作用。研究结果表明,利用SCAR标记法获得了长度为347bp的烟粉虱特异性片段(GenBank登录号为AY841800),根据此片段的碱基序列设计烟粉虱特异引物1对TB-F/TB-R94585,其扩增片段约为240bp;种特异性检验结果表明,该引物只对烟粉虱具有扩增能力,对温室粉虱及其它相关种类不具有扩增效果;同时该引物对不同虫态、不同性别的烟粉虱具有同样的扩增效应。田间检测结果表明,同种天敌昆虫幼体捕食作用检出率高于成虫;在所检测的4类群9种捕食性天敌中,龟纹瓢虫幼虫、异色瓢虫幼虫、草蛉幼虫及东亚小花蝽成虫和蜘蛛对烟粉虱捕食作用的检出率高于50%。 展开更多
关键词 捕食作用 烟粉虱 SCAR标记 捕食性天敌 东亚小花蝽 特征序列 研究结果 序列设计 扩增片段 检验结果 种特异性 扩增效果 温室粉虱 检测结果 天敌昆虫 龟纹瓢虫 异色瓢虫 标记法 检出率 引物 幼虫 性别 虫态 成虫 棉田 田间
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应用RAPD标记和细胞质基因组PCR-RFLP技术研究大花蕙兰的遗传多样性 被引量：16
6
作者 甘娜 谭向红 +2 位作者 陈其兵 魏育明 郑有良 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期349-355,共7页
利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503～0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,R... 利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503～0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,RAPD标记能将所有材料区分开。在7个叶绿体基因组(cpDNA)的PCRRFLP分析中,6个标记(87.5%)可扩增出1至多条清晰的谱带;扩增产物经7种限制性内切酶消化后,6个标记的19种引物/酶组合共检测到53条DNA片段,其中多态性片段有37条,占69.8%;材料间遗传相似系数变化范围为0.571～0.949,平均值为0.766。在8个线粒体基因组(mtDNA)的PCRRFLP标记分析中,只有3个(37.5%)标记能得到1条清晰的谱带;利用7种限制性内切酶对3个标记的扩增产物消化后,在10种标记/酶组合中,共检测到33条酶切片段,其中21条(63.6%)具有多态性;遗传相似系数为0.634～1.000,平均0.829。这些结果表明,RAPD标记揭示的大花蕙兰遗传多样性最高,其次为cpDNAPCRRFLP标记,而mtDNAPCRRFLP标记揭示的遗传多样性最低。 展开更多
关键词 大花蕙兰 RAPD PCR-RFLP CPDNA MTDNA
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利用RAPD-PCR方法鉴定我国烟粉虱的生物型(英文) 被引量：52
7
作者 邱宝利 任顺祥 +1 位作者 温硕洋 Nasser S.MANDOUR 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期605-608,共4页
收集了国内北京、山东、广东和海南等 14个省市 2 3个地区的蔬菜、园林花卉和杂草上的 2 3个烟粉虱Bemisiatabaci(Gennadius)种群 ,根据报道合成了一个随机引物H1 6 ,运用RAPD PCR技术对所收集的烟粉虱种群进行了生物型鉴定。结果表明在... 收集了国内北京、山东、广东和海南等 14个省市 2 3个地区的蔬菜、园林花卉和杂草上的 2 3个烟粉虱Bemisiatabaci(Gennadius)种群 ,根据报道合成了一个随机引物H1 6 ,运用RAPD PCR技术对所收集的烟粉虱种群进行了生物型鉴定。结果表明在 2 3个烟粉虱种群中 ,有 17个种群同属于危害严重的“B生物型” ,这些种群主要分布在交通便利的城市或沿海地区 ,而非B生物型则主要分布在交通不便的山区或内陆。 展开更多
关键词 烟粉虱 生物型 鉴定 RAPD—PCR 中国
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人参RAPD指纹鉴定的毛细管PCR方法 被引量：29
8
作者 马小军 汪小全 +2 位作者 邹喻苹 肖培根 洪德元 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期191-194,共4页
本实验建立并优化了用毛细管PCR扩增人参RAPD指纹的反应体系，讨论了用毛细管PCR方法扩增RAPD指纹在中药材鉴别上的应用前景。
关键词 人参 RAPD 毛细管PCR 指纹鉴定 鉴定
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不同致害性褐飞虱种群的DNA多态性研究 被引量：15
9
作者 关秀杰 傅强 +2 位作者 王桂荣 赖凤香 张志涛 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期152-158,共7页
采用RAPD_PCR方法 ,对分别在水稻品种TN1、Mudgo和ASD7上纯化 82代的 3个不同致害性褐飞虱种群的基因组DNA多态性进行了分析。从 2 0 5个RAPD引物中筛选出了具种群特异性的引物 10个 ,结果表明 :尽管未达到统计意义上的显著差异 ,雌、... 采用RAPD_PCR方法 ,对分别在水稻品种TN1、Mudgo和ASD7上纯化 82代的 3个不同致害性褐飞虱种群的基因组DNA多态性进行了分析。从 2 0 5个RAPD引物中筛选出了具种群特异性的引物 10个 ,结果表明 :尽管未达到统计意义上的显著差异 ,雌、雄两性试虫种群间的遗传多样性一般高于种群内 ,种群内的多样性则以未经抗性品种筛选的TN1种群最高。用相似性系数进行类平均距离法聚类 ,能将同一致害性种群的各个个体与其他致害种群分开 ,雌、雄虫均无一例外 ,表明不同致害性种群间存在明显的遗传分化 ;同时雌、雄两性试虫分别归为 2组 ,提示褐飞虱致害性遗传可能与性染色体连锁。不同致害性种群存在特有条带 。 展开更多
关键词 褐飞虱 致害性 生物型 DNA多态性 RAPD-PCR
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紫菜丝状体DNA的提取 被引量：10
10
作者 王勇 裴鲁青 +3 位作者 骆其君 刘必谦 费志清 薛庆中 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期146-148,共3页
1 引言 紫菜（PorPhyra spp.）是一种大型红藻,它的孢子体世代是丝状体.丝状体适于在常温条件下（20℃左右）长期保存和培养,是筛选丝状体优良栽培品系,利用光生物反应器进行紫菜育苗的理想材料.紫菜细胞含有大量胞外多糖,主要以硫酸... 1 引言 紫菜（PorPhyra spp.）是一种大型红藻,它的孢子体世代是丝状体.丝状体适于在常温条件下（20℃左右）长期保存和培养,是筛选丝状体优良栽培品系,利用光生物反应器进行紫菜育苗的理想材料.紫菜细胞含有大量胞外多糖,主要以硫酸基多糖和羧基多糖形式存在,它们比陆生植物的中性多糖更易溶于水,与DNA产生共沉淀,从而影响限制性内切酶的消化和PCR扩增.另外,紫菜细胞DNA含量较少,DNA酶含量却很高,使紫菜DNA提取的得率不足[1].RAPD技术已用于紫菜的种质鉴定和遗传多样性研究[2-4],但是。 展开更多
关键词 紫菜 丝状体 总DNA RAPD-PCR 氯化锂 电泳 提取
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西花蓟马的SCAR分子检测技术 被引量：20
11
作者 孟祥钦 闵亮 +3 位作者 万方浩 周忠实 王文凯 张桂芬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期323-330,共8页
西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)是一种世界性入侵害虫,寄主范围广,危害严重,2003年首次在我国发生危害,并有进一步扩散蔓延的趋势。针对蓟马类害虫虫体微小、形态相似,难以准确快速区分的问题,采用特征序列扩增区域(SCAR... 西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)是一种世界性入侵害虫,寄主范围广,危害严重,2003年首次在我国发生危害,并有进一步扩散蔓延的趋势。针对蓟马类害虫虫体微小、形态相似,难以准确快速区分的问题,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记技术,以西花蓟马及与之同域发生的其他种类蓟马为对象,筛选出1对西花蓟马特异性引物(FOMF/FOMR),其扩增片段大小为320bp。种特异性检测结果显示,该对引物只对西花蓟马的基因组DNA具有扩增能力,对同域发生的花蓟马F.intonsa(Trybom)、禾花蓟马F.tenuicornis(Uzel)、烟蓟马Thripstabaci L.等41种蓟马不具有扩增效果。该对引物不仅对不同虫态的西花蓟马具有扩增能力,而且在西花蓟马发生地的寄主植物组织内亦检测到了其卵的存在。同时,该检测技术灵敏度高,对成虫的最低检出阈值为1/160头。本检测技术在口岸检疫以及花卉、蔬菜和种苗调运中的害虫检测和监测中具有重要意义。 展开更多
关键词 西花蓟马 RAPD-PCR SCAR 快速检测 特异扩增 检出阈值
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牛山湖浮游生物群落DNA指纹结构与理化因子的关系 被引量：13
12
作者 吴利 余育和 +4 位作者 张堂林 冯伟松 颜庆云 龚迎春 宋晓红 《湖泊科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期235-241,共7页
对牛山湖5个站点的浮游生物群落DNA多态性进行了RAPD指纹和PCR-DGGE指纹分析,并探讨了其与理化因子的关系.结果如下:1)从40条随机引物中筛选出9条引物,共获得93条谱带,多态率为58%;各站点所得谱带平均为67条,其中Ⅰ站最少,为61条,Ⅴ站最... 对牛山湖5个站点的浮游生物群落DNA多态性进行了RAPD指纹和PCR-DGGE指纹分析,并探讨了其与理化因子的关系.结果如下:1)从40条随机引物中筛选出9条引物,共获得93条谱带,多态率为58%;各站点所得谱带平均为67条,其中Ⅰ站最少,为61条,Ⅴ站最多,为74条;2)PCR-DGGE指纹图谱共含102条谱带,其中原核生物56条,真核生物46条,谱带总数以Ⅲ站、Ⅳ站和Ⅴ站较多,Ⅰ站和Ⅱ站较少;3)Ⅱ站的总磷、叶绿素、化学耗氧量、硬度及电导率最高;各站点间溶氧和pH差异较小.相似性聚类分析表明,浮游生物群落DNA指纹将5个站点划分为两支,Ⅰ站和Ⅱ站聚为一支,Ⅲ站、Ⅳ站和Ⅴ站聚为另一支,理化因子将Ⅰ站、Ⅲ站、Ⅳ站和Ⅴ站聚为一支,Ⅱ站单独聚为一支.研究表明牛山湖浮游生物群落DNA指纹结构与理化因子具有一定的相关性,并且与环境主要限制因子总磷的含量是密切相关的.因此,浮游生物群落级水平DNA分析能简便、准确、迅速地反映水质状况,这方面资料的积累可以为建立一种基于分子生物学简便而灵敏的水环境评价体系提供科学依据. 展开更多
关键词 浮游生物 RAPD PCR—DGGE DNA指纹 理化因子 牛山湖
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猕猴桃模板DNA的提取及RAPD-PCR最佳反应体系的建立 被引量：23
13
作者 陈万秋 李思光 +1 位作者 罗玉萍 陈少风 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第3期40-43,共4页
以改良CTAB法从猕猴桃叶片中制备模板DNA ,优化了PCR热循环参数 ,建立了RAPD PCR扩增的最佳反应体系。实验结果表明 ,CTAB提取液中EDTA组分的浓度对模板提取影响很大 ,其最适浓度为 80mmol/L ;用异丙醇沉淀后不经乙醇洗涤纯化的DNA不会... 以改良CTAB法从猕猴桃叶片中制备模板DNA ,优化了PCR热循环参数 ,建立了RAPD PCR扩增的最佳反应体系。实验结果表明 ,CTAB提取液中EDTA组分的浓度对模板提取影响很大 ,其最适浓度为 80mmol/L ;用异丙醇沉淀后不经乙醇洗涤纯化的DNA不会影响扩增效果。PCR热循环参数为 :94℃预变性 5min ;94℃变性 1min ,37℃退火 1min ,72℃延伸 2min ,循环 4 0次 ;最后在 72℃延伸 6min。 展开更多
关键词 猕猴桃 模板DNA 提取 RAPD-PCR 最佳反应体系
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RAPD在枇杷品种鉴定中的应用 被引量：45
14
作者 潘新法 孟祥勋 +1 位作者 曹广力 徐春明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期136-138,共3页
运用RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA,即随机扩增多态性DNA)分析技术,对16个枇杷品种的基因组DNA进行RAPD分析,从几个随机引物中筛选出2个随机引物能从各个品种的基因组DNA扩增出DNA片段,在16个枇杷品种中2个引物扩增出19个DNA片段... 运用RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA,即随机扩增多态性DNA)分析技术,对16个枇杷品种的基因组DNA进行RAPD分析,从几个随机引物中筛选出2个随机引物能从各个品种的基因组DNA扩增出DNA片段,在16个枇杷品种中2个引物扩增出19个DNA片段,其中3个为公共,16个为多态性或单态性DNA片段,表明不同枇杷品种基因型间存在着极为丰富的遗传多样性,扩增的DNA指纹图谱可将16个品种一一区分,为枇杷品种鉴定提供了新的方法,同时也为分子标记辅助育种提供了依据。 展开更多
关键词 RAPD 枇杷 品种鉴定 DNA多态性
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中国胭脂鱼种群的遗传分析 被引量：17
15
作者 孙玉华 刘思阳 +2 位作者 彭智 余来宁 吴清江 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期248-252,共5页
采用RAPD和PCR RFLP技术 ,分析了长江中游两个中国胭脂鱼群体的遗传结构。 50个随机引物进行RAPD分析 ,有 3个引物显示了多态 ,宜昌、金口群体内个体之间的遗传相似度分别为 0 .92 74、0 .931 3 ,群体之间遗传相似度为 0 .90 0 0。 1 2... 采用RAPD和PCR RFLP技术 ,分析了长江中游两个中国胭脂鱼群体的遗传结构。 50个随机引物进行RAPD分析 ,有 3个引物显示了多态 ,宜昌、金口群体内个体之间的遗传相似度分别为 0 .92 74、0 .931 3 ,群体之间遗传相似度为 0 .90 0 0。 1 2个限制性内切酶分析了两群体线粒体DNAND - 5/ 6基因的限制性片段长度多态性 ,仅内切酶Ncil的酶切图谱显示了多态 ,基因型间的核苷酸序列歧化距离为 0 .2 35 % ,核苷酸多样性为 0 .0 0 4。分析表明 ,长江中游两个中国胭脂鱼群体遗传结构较为单一 ,群体之间表现了较为明显的遗传分化。 展开更多
关键词 中国胭脂鱼 遗传多样性 亚口鱼科 种群
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松口蘑菌丝体的分离和RAPD-PCR分析 被引量：31
16
作者 曾东方 罗信昌 傅伟杰 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期278-286,共9页
针对松口蘑 [Tricholomamatsutake(S .ItoetImai)Sing .]菌丝体分离培养困难和各种相关分离物目前难以用出菇试验鉴定的现实 ,采用 8种培养基配方 ,对 9个不同来源的松口蘑子实体的不同部位及菌根、菌土进行组织分离 ,计接种试管 81 0多... 针对松口蘑 [Tricholomamatsutake(S .ItoetImai)Sing .]菌丝体分离培养困难和各种相关分离物目前难以用出菇试验鉴定的现实 ,采用 8种培养基配方 ,对 9个不同来源的松口蘑子实体的不同部位及菌根、菌土进行组织分离 ,计接种试管 81 0多支 ,结果从菌褶部位获得 94支慢生型的菌丝体分离菌株 ,从菌柄部位仅获得 1支快生型的菌丝体分离菌株。以马铃薯葡萄糖土壤滤液培养基 (PDAS)、马铃薯葡萄糖麦麸滤液培养基 (PDAW )、BM培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)对菌褶进行组织分离 ,获慢生型菌丝体的成功率依次为 74 4%、35 5%、1 5 6%和 8 9%。以各分离菌株的来源松口蘑子实体和中日两国松口蘑研究者提供的分离菌株作为DNA参照样品 ,对从供试子实体、菌根、菌土进行组织分离获得的各种相关纯培养物进行亲菌鉴定。采用筛选的 1 7个随机引物介导 2 5个供试松口蘑子实体及其分离菌体的RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) PCR反应 ,全部获得了清晰而稳定的DNA指纹图谱 ,结果一致表明 :每个松口蘑子实体的菌盖 (含菌褶 )、菌柄与从自身菌褶分离的慢生型纯培养菌丝体都具有相同的DNA指纹图谱 ,其相似系数为 1 0 0 0 ,明确揭示松口蘑个体的DNA同质性 ,而不同来源的供试松口蘑之间的相似系数在 0 934～ 0 展开更多
关键词 松口蘑 子实体 分离菌株 亲菌鉴定 RAPD-PCR分析
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驴皮药材RAPD分析方法建立及其与伪品马皮的鉴别 被引量：14
17
作者 田俊生 史碧云 +5 位作者 张福生 李晓伟 耿伟华 杨永 刘会来 秦雪梅 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期354-358,共5页
目的建立驴皮药材RAPD分析方法并用于伪品马皮的鉴别。方法采用化学试剂盒法确定了驴皮药材中DNA提取的最佳条件,采用L16(45)正交设计方法,针对Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物设计了5因素4水平的正交试验,优化了RAPD-PCR反应条件。... 目的建立驴皮药材RAPD分析方法并用于伪品马皮的鉴别。方法采用化学试剂盒法确定了驴皮药材中DNA提取的最佳条件,采用L16(45)正交设计方法,针对Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物设计了5因素4水平的正交试验,优化了RAPD-PCR反应条件。结果驴皮药材RAPD-PCR反应体系的最佳条件为25μL反应体系中含有Taq酶1.5 U、Mg2+0.15 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、模板DNA 1.5μL、引物0.5μmol/L;PCR反应条件为95℃预变性5 min,94℃变性30 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,共30个循环,最后72℃延伸7 min。RAPD反应结果中300～400 bp处的条带可作为鉴别驴皮及其伪品的特异性条带。结论所建立的RAPD分析方法具有简便快捷、稳定性好、重现性高的特点,可用于驴皮药材及其伪品马皮的鉴别。 展开更多
关键词 驴皮 RAPD-PCR分析 正交设计 DNA分子标记 伪品鉴别
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苦瓜枯萎病菌的鉴定及其遗传多样性分析 被引量：18
18
作者 陈振东 袁高庆 +3 位作者 黎起秦 秦健 蒋雅琴 黄如葵 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期36-45,共10页
对分离获得的32株苦瓜枯萎病菌菌株进行形态学特征和寄主专化型测定，结果表明，测试的苦瓜枯萎病菌株均为尖孢镰刀菌苦瓜专化型（Fusariumoxysporumf．sp．momordicae），这些菌株可以侵染苦瓜和瓠瓜幼苗，但不侵染其他葫芦科瓜类作物... 对分离获得的32株苦瓜枯萎病菌菌株进行形态学特征和寄主专化型测定，结果表明，测试的苦瓜枯萎病菌株均为尖孢镰刀菌苦瓜专化型（Fusariumoxysporumf．sp．momordicae），这些菌株可以侵染苦瓜和瓠瓜幼苗，但不侵染其他葫芦科瓜类作物。对苦瓜枯萎病菌菌株的rDNA—ITS区（ITS1、5．8S和ITS2）序列进行扩增测序，结果显示其序列长度均为456bp；聚类分析表明测序菌株与镰刀菌属中尖孢镰刀菌不同专化型的菌株聚为一群。利用RAPD标记技术分析苦瓜枯萎病菌的遗传多样性，结果显示苦瓜枯萎病菌株与其他葫芦科瓜类作物枯萎病菌株间的遗传相似系数范围为0．59～0．99，当遗传相似系数为0．85时，供试的48个菌株分成10个类群（G1-10）。在RAPD聚类树中所有苦瓜枯萎病菌株聚在一个分支上（G，群），菌株间的遗传相似系数范围为0．92～1．00，具有较高的遗传相似性，且菌株的聚群与地理来源存在一定的相关性。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌苦瓜专化型 RDNA-ITS RAPD-PCR 遗传多样性
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利用RAPD-PCR与ISSR-PCR标记技术分析长江口刀鲚的群体遗传结构 被引量：28
19
作者 张媛 胡则辉 +1 位作者 周志刚 陈亚瞿 《上海水产大学学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期390-397,共8页
利用RAPD-PCR及ISSR-PCR两种分子标记技术对长江出海口两年3个群体的52条刀鲚（Goiliaectenes）进行群体遗传结构的分析。在3个群体中，利用RAPD-PCR标记技术，15个10bp随机引物共检测到110条带，多态性为0．490～0．657，Shannon多样... 利用RAPD-PCR及ISSR-PCR两种分子标记技术对长江出海口两年3个群体的52条刀鲚（Goiliaectenes）进行群体遗传结构的分析。在3个群体中，利用RAPD-PCR标记技术，15个10bp随机引物共检测到110条带，多态性为0．490～0．657，Shannon多样性指数为18．63～22．38，Nei平均遗传距离为0．1195～0．1454；而利用11个ISSR引物所获得的相应结果分别为67、0．576～0．682、11．56～13．66以及0．117～0．147。相关性分析表明这两种技术所获得的上述数据呈正相关（r=0．95，P〈0．05）。AMOVA结果显示，3个群体按采集时间划分成的两年之间的遗传变异不超过总变异的1．1％，同一年内群体间的遗传变异也分别只占总变异的6．99％（RAPD）和2．75％（ISSR-PCR），群体内各个体之间的遗传变异占总变异的96％（P〈0．0001），说明两年内所采集的3个群体之间基本上没有产生遗传分化。基于样品之间的Nei遗传距离所构建的Neighborjohing聚类图也清楚地显示出没有按采样的时间产生群体的遗传分化。对各样品之间的Nei遗传距离及Neighbor-joining聚类图分别经Mantel检测及支序分析，发现ISSR-PCR技术所获得的结果与RAPD-PCR技术的结果不存在明显的正相关，但ISSR-PCR标记技术具有在待测样品中能检测到高多态性等优点。 展开更多
关键词 刀鲚 遗传多样性 遗传变异 RAPD ISSR-PCR AMOVA
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影响小麦RAPD稳定性的试验技术研究 被引量：10
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作者 安德荣 程继红 +1 位作者 成卓敏 慕小倩 《麦类作物学报》 CAS CSCD 2001年第1期14-17,共4页
随着 PCR和 RAPD技术在生物学领域的广泛应用 ,人们在实验中遇到的问题也越来越多 ,其中RAPD的可重复性差是最主要的一个问题 ,也是该技术最难克服的缺点。作者在利用 RAPD技术标记进行小麦的抗病毒基因研究中 ,对影响扩增结果的模板、... 随着 PCR和 RAPD技术在生物学领域的广泛应用 ,人们在实验中遇到的问题也越来越多 ,其中RAPD的可重复性差是最主要的一个问题 ,也是该技术最难克服的缺点。作者在利用 RAPD技术标记进行小麦的抗病毒基因研究中 ,对影响扩增结果的模板、底物、引物和扩增程序等进行了实验探索 ,结果表明 :模板的浓度、d NTP浓度、引物浓度及反应程序均对 RAPD扩增结果有明显影响。 展开更多
关键词 RAPD PCR 小麦 可重复性 模板浓度 DNTP浓度 引
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