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低温冻害对蚕豆幼苗生理生化特性的影响及RAP-PCR指纹分析 被引量：2
1
作者 陈志远 王国栋 +2 位作者 邸丽俊 武永军 杨佳晔 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2011年第4期6-12,共7页
0℃冻害分别处理蚕豆幼苗0、3、61、2 h,测定了蚕豆幼苗叶片的蛋白质、脯氨酸、还原性谷胱甘肽和丙二醛等生理指标,进行了蚕豆低温胁迫下的RAP-PCR指纹分析和抵抗低温冻害的特异基因序列片段的克隆。结果表明:随着低温胁迫的加强,蚕豆... 0℃冻害分别处理蚕豆幼苗0、3、61、2 h,测定了蚕豆幼苗叶片的蛋白质、脯氨酸、还原性谷胱甘肽和丙二醛等生理指标,进行了蚕豆低温胁迫下的RAP-PCR指纹分析和抵抗低温冻害的特异基因序列片段的克隆。结果表明:随着低温胁迫的加强,蚕豆幼苗叶片内蛋白质含量呈现先升后降的趋势,脯氨酸相对百分含量逐渐增加,还原性谷胱甘肽含量逐渐下降,丙二醛含量低温胁迫后维持在一个较低的稳定水平。以8条随机引物进行RAP-PCR指纹分析鉴定出8条抵抗冻害的特异性片段,并成功克隆到其中的4条。 展开更多
关键词 低温胁迫 低温伤害 rap-pcr 蚕豆
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不同方法鉴定差异显示技术RAP-PCR得到差异基因的比较
2
作者 李升康 王玉桥 《汕头大学医学院学报》 2009年第2期80-82,共3页
目的:评价用RAP-PCR法从测序胶上得到深海细菌(Shewanella piezotolerance WP3)差异片段验证的最佳方法。方法:用RT-PCR,RNA点杂交,荧光实时定量PCR对不同盐浓度的差异片段进行对比实验。结果:3种方法均能检测到片段的差异表达:RT-PCR... 目的:评价用RAP-PCR法从测序胶上得到深海细菌(Shewanella piezotolerance WP3)差异片段验证的最佳方法。方法:用RT-PCR,RNA点杂交,荧光实时定量PCR对不同盐浓度的差异片段进行对比实验。结果:3种方法均能检测到片段的差异表达:RT-PCR灵敏性最强,RNA点杂交需要的RNA量最大,荧光实时定量PCR精确性最高。结论:在实验条件允许下,用荧光实时定量PCR对较少片段的验证较好。 展开更多
关键词 SHEWANELLA piezotolerance WP3 差异显示 rap-pcr方法 差异片段 验证
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RAP-PCR技术及其应用 被引量：2
3
作者 李智 李强 +1 位作者 孙春晓 于常海 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期381-383,共3页
:RAP -PCR是以PCR为基础构建RNA指纹图谱 ,研究基因差异表达的有效方法。所显示的种系特异性差异可用于对基因的遗传作图 ;所揭示的组织特异性差异可用于研究特异基因的表达。该法可检测各种情形下RNA群体间的差异。本文简介其基本原理... :RAP -PCR是以PCR为基础构建RNA指纹图谱 ,研究基因差异表达的有效方法。所显示的种系特异性差异可用于对基因的遗传作图 ;所揭示的组织特异性差异可用于研究特异基因的表达。该法可检测各种情形下RNA群体间的差异。本文简介其基本原理及在基因差异表达研究领域的最新应用。 展开更多
关键词 RAP-PCXR 基因差异表达 基因克隆 应用
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植物差异表达基因克隆技术及研究进展 被引量：5
4
作者 谢伟伟 王凭青 +2 位作者 杨青川 刘博 李志中 《重庆大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第12期96-100,共5页
随着分子生物学技术的深入发展,植物基因组研究已经由以全基因组测序为目标的结构基因组学转向以基因功能鉴定为目标的功能基因组学研究,目前分离并克隆差异表达基因已成为生命科学研究的热点.近些年来,国内外学者发展了多种分析差异表... 随着分子生物学技术的深入发展,植物基因组研究已经由以全基因组测序为目标的结构基因组学转向以基因功能鉴定为目标的功能基因组学研究,目前分离并克隆差异表达基因已成为生命科学研究的热点.近些年来,国内外学者发展了多种分析差异表达基因的技术来研究植物在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况,掌握了生命活动过程中的重要信息.文章对建立在RNA水平上克隆植物未知差异表达基因的几种关键技术及其研究进展进行了综述,阐述了各技术的原理、技术路线、优缺点及相应的改进方法,并对它们在植物抗逆研究中的应用现状及前景作了展望. 展开更多
关键词 差异表达 基因克隆 DDRT-PCR SSH RDA-PCR rap-pcr
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平菇子实体分化发育相关基因片段的克隆 被引量：7
5
作者 马爱民 关海山 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期299-302,共4页
采用RAP PCR差异显示技术对平菇菌丝体及原基、菇蕾和成熟子实体进行研究 ,获得了在原基阶段差异表达的 3条cDNA片段POD1、POD2与POD3 ,经过回收、重扩增、克隆与鉴定后进行测序分析 ,初步的结果表明 3条差异片段的长度分别为 745bp、48... 采用RAP PCR差异显示技术对平菇菌丝体及原基、菇蕾和成熟子实体进行研究 ,获得了在原基阶段差异表达的 3条cDNA片段POD1、POD2与POD3 ,经过回收、重扩增、克隆与鉴定后进行测序分析 ,初步的结果表明 3条差异片段的长度分别为 745bp、482bp与 477bp。同时 。 展开更多
关键词 分化发育相关基因 HSP70 平菇子实体 菌丝体 rap-pcr差异显示技术 分子生物学技术 克隆 银染法
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基因克隆的常用方法介绍 被引量：8
6
作者 孙春晓 于常海 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期35-42,共8页
为能快速、准确地克隆出有意义的基因,本文介绍了目前常用的一些基因克隆方法,如差异显示PCR、抑制性差减杂交、RAPPCR、代表性差异显示、酵母双杂交系统、cDNA直接捕捉法等;并对这些方法作了简要的评价,以利于大家选择适合自己的方法。
关键词 基因克隆 差异显示PCR 抑制性差减杂交 rap-pcr
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嗜盐菌Halobacterium species NRC-1不同盐浓度下基因表达差异分析
7
作者 李鑫 刘军 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期62-66,共5页
用RNA随机起始PCR(RAP-PCR)技术分析了盐杆菌NRC-1(Halobacterium NRC-1)不同NaCl盐度下基因表达的差异。81条引物用于比较17%、30%两种盐度下基因表达的差异,每条引物平均可以产生10条以上扩增条带,共得到15条在2种盐度下差异表达的条... 用RNA随机起始PCR(RAP-PCR)技术分析了盐杆菌NRC-1(Halobacterium NRC-1)不同NaCl盐度下基因表达的差异。81条引物用于比较17%、30%两种盐度下基因表达的差异,每条引物平均可以产生10条以上扩增条带,共得到15条在2种盐度下差异表达的条带,这些差异扩增条带的获得将有助从分子水平上了解Halobacterium NRC-1在高盐环境下的适应机制。 展开更多
关键词 差异表达 盐杆菌NRC-1 RNA随机起始PCR
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蜱传牛巴贝斯虫套式PCR检测方法的建立及应用 被引量：4
8
作者 王素华 袁淑辉 +3 位作者 蔡军 帅江冰 吴绍强 张晓峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期711-714,共4页
为建立一种快速、敏感检测牛巴贝斯虫的方法,本研究根据GenBank中登录的牛巴贝斯虫rap-1基因保守区设计2对特异性引物,经反应条件的优化,建立了牛巴贝斯虫套式PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异地检测牛巴贝斯虫,而对双芽巴贝斯虫... 为建立一种快速、敏感检测牛巴贝斯虫的方法,本研究根据GenBank中登录的牛巴贝斯虫rap-1基因保守区设计2对特异性引物,经反应条件的优化,建立了牛巴贝斯虫套式PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异地检测牛巴贝斯虫,而对双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫和弓形虫的检测均为阴性;该方法的灵敏度可达1.3×10~1拷贝/μL,是牛巴贝斯虫荧光定量PCR检测试剂盒的10倍,是常规PCR的1 000倍。对50只扇头蜱和微小牛蜱DNA进行检测,套式PCR、牛巴贝斯虫荧光定量PCR检测试剂盒和常规PCR的阳性检出率分别为100.0%、72.0%和0。本实验建立的套式PCR检测方法适用于牛巴贝斯虫病的早期诊断和分子流行病学调查,为蜱传牛巴贝斯虫病的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 牛巴贝斯虫 rap-1基因 套式PCR 蜱传
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