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共抑制RAD18和REV1基因显著增加顺铂对肺癌细胞的毒性 被引量：2
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作者 金君 李坚 袁荣霞 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2018年第2期109-116,共8页
目的:探讨采用基因敲减技术抑制跨损伤合成(translesion synthesis,TLS)通路和范可尼贫血(Fanconi anemia,FA)通路上游的RAD18基因与TLS通路的REV1基因后增加顺铂对人肺腺癌耐药细胞株(A549/DDP)细胞毒性的可行性及其机制。方法:蛋白质... 目的:探讨采用基因敲减技术抑制跨损伤合成(translesion synthesis,TLS)通路和范可尼贫血(Fanconi anemia,FA)通路上游的RAD18基因与TLS通路的REV1基因后增加顺铂对人肺腺癌耐药细胞株(A549/DDP)细胞毒性的可行性及其机制。方法:蛋白质印迹法测定顺铂诱导的A549和A549/DDP细胞RAD18和REV1蛋白表达;应用脂质体转染试剂转染针对RAD18基因的siRNAs(RAD18-siRNA),检测A549/DDP细胞转染前后顺铂诱导的FANCD2和PCNA蛋白单泛素化水平;CCK-8法检测分别转染RAD18-siRNA、REV1-siRNA以及两者共转染前后经顺铂处理的A549/DDP细胞的增殖率;流式细胞术检测转染前后A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期。结果:A549/DDP细胞转染RAD18-siRNA和REV1-siRNA后,RAD18和REV1蛋白表达明显降低,表明转染有效,基因敲减成功。转染RAD18-siRNA后顺铂诱导的FANCD2和PCNA蛋白的单泛素化水平明显下降,提示FA通路和TLS通路的激活受到抑制。分别转染RAD18-siRNA或REV1-siRNA均可增强顺铂对A549/DDP的细胞毒性,增加顺铂诱导的细胞凋亡率,并增强细胞周期S/G2期的阻滞效应。共转染RAD18-siRNA和REV1-siRNA后,顺铂对A549/DDP细胞的毒性增强作用较单转染更为显著,顺铂诱导的细胞凋亡进一步增加。结论:敲减A549/DDP细胞的RAD18和REV1基因可通过抑制FA通路和TLS通路的DNA损伤修复功能,增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;RAD18和REV1基因共敲减对顺铂的这一增敏作用更加明显,显示出A549/DDP细胞对顺铂耐药的逆转效应。 展开更多
关键词 肺癌细胞 顺铂 耐药 RAD18 REV1 SIRNA
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