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氢醌诱导下肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应 被引量:2
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作者 胡恭华 李锋 +2 位作者 庄志雄 庾蕾 黄海燕 《中国工业医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第2期83-86,90,共5页
目的研究氢醌(hydroquinone,HQ)诱导下L-02肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应,探讨PCNA、RAD6B及RAD18基因在HQ所致肝细胞毒性过程中的分子作用机制。方法体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导不同时间(6、12、24和48... 目的研究氢醌(hydroquinone,HQ)诱导下L-02肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应,探讨PCNA、RAD6B及RAD18基因在HQ所致肝细胞毒性过程中的分子作用机制。方法体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导不同时间(6、12、24和48 h)后,用Trizol试剂从L-02肝细胞中分离总RNA,而后反转录为cDNA;利用Primer 3软件设计PCNA、RAD6B及RAD18基因及内参照β-ACTIN基因的引物,并进行标准曲线分析和熔解曲线分析,建立和优化定量检测各目的基因在mRNA水平上表达的反应体系和反应条件;最后采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达状况。结果在各时间处理组(6、12、24和48 h)中,染毒组L-02肝细胞内PCNA、RAD6B及RAD18基因在mRNA水平上的表达均高于未染毒组。在24 h的时间范围内,PCNA基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是未染毒组(0μmol/L),均具有随时间的延长而增加的趋势;到24 h时,相对表达量达到最大值。RAD6B和RAD18基因在未染毒组中的表达在48 h范围内均有随时间的增加而升高的趋势,它们均在48 h时间点上表达最高,其相对表达量分别为2.66和4.32;但在染毒组中,RAD6B基因和RAD18基因在48 h处的表达则有所下降,其相对表达量分别由3.74和4.83降至2.78和4.61。结论HQ可以诱导PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达上调,并且呈现一定的时序性。 展开更多
关键词 氢醌 PCNA rad6B RAD18 MRNA L-02肝细胞 时间效应
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Rad6在脑胶质母细胞瘤中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 包元飞 田薇 熊云云 《临床与病理杂志》 2016年第8期1140-1143,共4页
目的:研究Rad6在脑胶质母细胞瘤中的表达及临床意义。方法:在组织水平,使用免疫组织化学方法检测32例脑胶质母细胞瘤组织及21例瘤旁正常组织中Rad6的表达,应用SPSS17.0统计软件,分析Rad6表达与临床病理参数及预后的关系。结果:Rad6在胶... 目的:研究Rad6在脑胶质母细胞瘤中的表达及临床意义。方法:在组织水平,使用免疫组织化学方法检测32例脑胶质母细胞瘤组织及21例瘤旁正常组织中Rad6的表达,应用SPSS17.0统计软件,分析Rad6表达与临床病理参数及预后的关系。结果:Rad6在胶质母细胞瘤组织及瘤旁正常组织中阳性率分别为65.63%、28.57%(χ2=6.97;P=0.009)。经K aplan-Meier法生存比较,R ad6的阳性表达者比阴性表达者生存期短(P<0.05)。Rad6蛋白的表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位、血管密度、肿瘤直径及坏死无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Rad6过度表达与脑胶质母细胞瘤有关,有望成为胶质母细胞瘤新的预后基因。 展开更多
关键词 脑胶质母细胞瘤 rad6 预后
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泛素结合酶RAD6的结构与功能研究进展 被引量:1
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作者 覃碧 邓治 +1 位作者 刘长仁 李德军 《热带农业科学》 2013年第2期36-41,共6页
泛素复合体对蛋白的修饰可以改变蛋白定位、活性和稳定性。泛素结合酶E2在其中起关键作用。RAD6是典型的泛素结合酶,在泛素复合体组装、DNA损伤修复、调控基因表达和细胞周期等生理过程中具有重要作用。本文综述了RAD6蛋白的结构、与其... 泛素复合体对蛋白的修饰可以改变蛋白定位、活性和稳定性。泛素结合酶E2在其中起关键作用。RAD6是典型的泛素结合酶,在泛素复合体组装、DNA损伤修复、调控基因表达和细胞周期等生理过程中具有重要作用。本文综述了RAD6蛋白的结构、与其互作的泛素蛋白连接酶E3及其功能研究进展,并展望其在作物研究中的应用。 展开更多
关键词 泛素 泛素结合酶E2 rad6 结构 功能
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氢醌对人L-02肝细胞泛素结合酶Rad6B表达的影响
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作者 胡恭华 庄志雄 +2 位作者 杨建平 黄海燕 杨淋清 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期352-354,共3页
目的研究氢醌(HQ)对人L-02肝细胞中泛素结合酶Rad6B表达的影响。方法将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)的HQ处理24h之后,采用实时荧光定量PCR技术检测Rad6B在mRNA水平上的表达;采用Western blot方法检测Rad6B... 目的研究氢醌(HQ)对人L-02肝细胞中泛素结合酶Rad6B表达的影响。方法将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)的HQ处理24h之后,采用实时荧光定量PCR技术检测Rad6B在mRNA水平上的表达;采用Western blot方法检测Rad6B在蛋白质水平上的表达。结果在0~160μmol/L的范围内,HQ可诱导Rad6B在mRNA和蛋白质水平上表达的增加,具有随着剂量的增加而升高的趋势;并且各染毒剂量组(5、10、20、40、80和160μmol/L组)肝细胞Rad6B在mRNA和蛋白质水平上的表达均明显地高于对照组(0μmol/L组)(P<0.01);当HQ的作用浓度达到160μmol/L时,Rad6B的表达水平达到最大值,其mRNA和蛋白质表达的相对定量值分别为4.35和0.85。结论HQ可使L-02肝细胞的Rad6B表达增加。 展开更多
关键词 氢醌 L-02肝细胞 rad6B 实时荧光定量PCR 泛素结合酶
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Rad6在肺腺癌中的表达及临床意义
5
作者 钱静 石宇 《临床与病理杂志》 2019年第12期2680-2684,共5页
目的:研究Rad6在肺腺癌组织中的表达情况,探讨其与肺腺癌预后的相关性。方法:选择92例有完整随访资料的肺腺癌患者的新鲜癌组织及相应的癌旁正常肺组织标本(距肿瘤边缘>5 cm),应用免疫组织化学EnVision两步法,分别检测癌组织及癌旁... 目的:研究Rad6在肺腺癌组织中的表达情况,探讨其与肺腺癌预后的相关性。方法:选择92例有完整随访资料的肺腺癌患者的新鲜癌组织及相应的癌旁正常肺组织标本(距肿瘤边缘>5 cm),应用免疫组织化学EnVision两步法,分别检测癌组织及癌旁正常肺组织中Rad6蛋白的表达水平。结果:肺腺癌组织中Rad6的蛋白表达水平明显高于癌旁正常肺组织(61.96%vs 38.04%,P<0.05)。其蛋白高表达与肿瘤的病理分期、分化程度和淋巴结转移相关(P<0.05),且肺腺癌患者中Rad6高表达者总生存率明显下降(P<0.05)。结论:Rad6在肺腺癌组织中的表达水平高于相应癌旁正常肺组织,且肿瘤分化程度越低,Rad6蛋白的表达水平越高,生存时间越短,提示Rad6过表达与肺腺癌的发生发展及预后有关。 展开更多
关键词 rad6 靶基因 肺腺癌
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泛素结合酶RAD6多克隆抗体的制备及初步鉴定
6
作者 郭莲娣 王鑫 王小军 《中国处方药》 2016年第9期25-27,共3页
目的为了给RAD6参与的泛素化修饰相关领域的研究提供参考,在大肠杆菌中原核细胞表达GST-RAD6重组蛋白并通过免疫家兔制备其多克隆抗体。方法以c DNA文库作为模板,构建重组载体p ET41a-GST-RAD6,转化至大肠杆菌表达菌株BL21中,诱导表达... 目的为了给RAD6参与的泛素化修饰相关领域的研究提供参考,在大肠杆菌中原核细胞表达GST-RAD6重组蛋白并通过免疫家兔制备其多克隆抗体。方法以c DNA文库作为模板,构建重组载体p ET41a-GST-RAD6,转化至大肠杆菌表达菌株BL21中,诱导表达并纯化GSTRAD6融合蛋白,免疫家兔后制备其多克隆抗体,通过Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定其特异性及效价。结果成功构建了p ET41aGST-RAD6重组载体,得到了高纯度的重组蛋白,Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定显示获得的血清抗体效价高,特异性强。结论成功制备的高效价兔抗人RAD6血清抗体可为RAD6调控的泛素化修饰相关领域的研究奠定基础。 展开更多
关键词 rad6 重组蛋白 多克隆抗体
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Loss of the ubiquitin-conjugating enzyme Rad6B disturbs mitochondrial function and cellular homeostasis in mouse skin
7
作者 LINGHUI YU RONG SHEN +4 位作者 YANAN GUO YANXUAN GUO CHEN LI YANFENG SONG DEGUI WANG 《BIOCELL》 SCIE 2021年第3期761-772,共12页
Various factors can induce cell degeneration by altering the phenotype and metabolism of cells.Mitochondria play an essential role in cellular homeostasis and function,rendering aging processes highly associated with ... Various factors can induce cell degeneration by altering the phenotype and metabolism of cells.Mitochondria play an essential role in cellular homeostasis and function,rendering aging processes highly associated with mitochondrial function and status.Herein,we describe an aging-prone phenotype of murine skin cells caused by depletion of Rad6B(Ube2b),an E2 ubiquitin-conjugating enzyme.In this study,using Masson’s trichrome,we showed that loss of Rad6B causes physiological structure changes in mouse skin with age.In addition,a combination of western blotting experiments,transmission electron microscopy and employment of immunofluorescence staining revealed that depletion of Rad6B was characterized by an abnormal mitochondrial metabolic profile,including decreased mitochondrial biosynthesis and mitochondrial complex activities,increased ROS production and suppressed mitophagy resulting in metabolic disorders.Taken together,these results highlight an important relationship between Rad6B and skin senescence,suggesting that Rad6B plays an indispensable role in maintaining a healthy mitochondrial network and intracellular homeostasis. 展开更多
关键词 rad6B SKIN MITOCHONDRIA Respiratory chain SENESCENCE
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Bre1与Rad6形成的复合物的表达、纯化和结晶
8
作者 赵佳奇 石萌 向嵩 《天津医科大学学报》 2023年第1期83-87,共5页
目的:建立Bre1及Rad6的表达和纯化方法,构建Bre1-Rad6的复合物,寻找复合物的结晶条件,为使用X射线晶体学的方法解析复合物的结构奠定基础。方法:使用大肠杆菌表达系统表达蛋白质;使用共纯化的方法组装复合物;使用气象扩散的方法结晶复... 目的:建立Bre1及Rad6的表达和纯化方法,构建Bre1-Rad6的复合物,寻找复合物的结晶条件,为使用X射线晶体学的方法解析复合物的结构奠定基础。方法:使用大肠杆菌表达系统表达蛋白质;使用共纯化的方法组装复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物。结果:建立了来源于Lodderomyces elongisporus的Bre1(LeBre1)氮端与Rad6相互作用的结构域(RBD)和Rad6(LeRad6)在大肠杆菌中大量表达的方法;通过使用共纯化的方法,成功组装了LeBre1 RBD-Rad6复合物,并进一步通过两步凝胶过滤层析纯化的方法精细纯化,获得了纯度超过95%的蛋白复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物,在18℃通过对1 000多个结晶条件的筛选,确定了复合物的两种结晶条件,进一步对该条件优化,获得了质量相对较好的晶体。结论:成功的构建了LeBre1 RBD-Rad6复合物的表达、纯化和结晶的方法,为使用X射线晶体学方法解析复合物的结构奠定了基础。 展开更多
关键词 Bre1 rad6 泛素化修饰 蛋白质纯化 蛋白质结晶
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泛素交联酶RAD6在DNA损伤修复中的作用 被引量:1
9
作者 欧阳思维 田迎霞 +4 位作者 景玉宏 宋焱峰 张朗 刘向文 王德贵 《医学分子生物学杂志》 CAS 2013年第4期233-237,共5页
RAD6最初是在酿酒酵母(S.cerevisiae)中发现的一种具有催化H2B单泛素化活性的泛素交联酶(E2),它具有一个UBCc结构域。早些年,人们对泛素系统在DNA损伤修复(DNA—damagerepair,DDR)中的作用了解非常有限。近年来,泛素在DNA损... RAD6最初是在酿酒酵母(S.cerevisiae)中发现的一种具有催化H2B单泛素化活性的泛素交联酶(E2),它具有一个UBCc结构域。早些年,人们对泛素系统在DNA损伤修复(DNA—damagerepair,DDR)中的作用了解非常有限。近年来,泛素在DNA损伤修复中蛋白质招募过程中扮演的广泛角色逐渐被人们所认识。RAD6高度保守,能与多个泛素连接酶相互作用,在DDR中发挥重要作用。 展开更多
关键词 泛素交联酶 rad6 泛素化 DNA损伤修复
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UBE2B基因与男性不育的研究进展 被引量:2
10
作者 张强 牟丽莎 +1 位作者 桂耀庭 蔡志明 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期367-371,共5页
男性不育是困扰全球的一个世界性难题,大约15%的不育病例与精子发生相关的基因变异有关。哺乳动物UBE2B基因与酵母菌Rad6基因同源。UBE2B属于泛素蛋白酶体系统,其在哺乳动物的精子发生过程中发挥着重要作用。小鼠实验表明UBE2B基因敲除... 男性不育是困扰全球的一个世界性难题,大约15%的不育病例与精子发生相关的基因变异有关。哺乳动物UBE2B基因与酵母菌Rad6基因同源。UBE2B属于泛素蛋白酶体系统,其在哺乳动物的精子发生过程中发挥着重要作用。小鼠实验表明UBE2B基因敲除小鼠精原细胞减数分裂受抑制,精子活力下降,畸形精子数目增多,表现为雄性不育。越来越多的研究证实男性UBE2B基因突变及单核苷酸多态性均可导致男性不育。本文综述了UBE2B基因与男性不育的关系,为临床男性不育的诊断、治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 男性不育 UBE2B基因 rad6基因 基因突变
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跨损伤DNA合成通路中关键基因在食管鳞癌中的表达研究 被引量:2
11
作者 朱孝中 俞力超 +3 位作者 施舜缤 邱鹏 钱永跃 陈勇兵 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第1期127-130,共4页
目的研究跨损伤DNA合成通路中的关键基因RAD6、RAD18、PCNA和UBC13在人食管鳞癌与癌旁组织中的表达差异。方法采用SYBRGreen实时定量PCR技术检测60例食管鳞癌患者癌组织和其中的24例癌旁组织中RAD6、RAD18、PCNA和UBC13基因表达情况。结... 目的研究跨损伤DNA合成通路中的关键基因RAD6、RAD18、PCNA和UBC13在人食管鳞癌与癌旁组织中的表达差异。方法采用SYBRGreen实时定量PCR技术检测60例食管鳞癌患者癌组织和其中的24例癌旁组织中RAD6、RAD18、PCNA和UBC13基因表达情况。结果 RAD6和UBC13在食管鳞癌与癌旁组织中的表达差异均无统计学意义(均P>0.05);RAD18和PCNA的表达在食管鳞癌中均显著上升,与癌旁组织相比差异均有高度统计学意义(均P<0.01)。结论 RAD18和PCNA的表达升高可能是食管鳞癌的一个特征。RAD18和PCNA表达的升高可能与食管鳞癌中跨损伤DNA合成途径作用增强有关。 展开更多
关键词 食管鳞癌 跨损伤DNA合成 实时荧光定量PCR RAD18 PCNA
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泛素缀合酶样蛋白的研究概况 被引量:3
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作者 陈建明 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1999年第6期333-337,共5页
在泛素缀合途径中,泛素缀合酶起关键作用,各种不同的泛素缀合酶决定了泛素缀合途径功能的多样性。泛素缀合酶样蛋白存序列和二、三级结构上类似于泛素缀合酶,但不具备泛素缀合酶的泛素缀合活性。泛素缀合酶样蛋白可能是蛋白泛素化的新... 在泛素缀合途径中,泛素缀合酶起关键作用,各种不同的泛素缀合酶决定了泛素缀合途径功能的多样性。泛素缀合酶样蛋白存序列和二、三级结构上类似于泛素缀合酶,但不具备泛素缀合酶的泛素缀合活性。泛素缀合酶样蛋白可能是蛋白泛素化的新的调节因子。 展开更多
关键词 泛素缀合酶 rad6 REV3 UEV蛋白
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