[目的]克隆浙贝母环阿屯醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)5`末端cDNA序列。[方法]利用简并引物及RT-PCR方法获得CAS的核心基因,应用cDNA末端快速扩增(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术快速克隆5`末端片段,采用NCBI网站上...[目的]克隆浙贝母环阿屯醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)5`末端cDNA序列。[方法]利用简并引物及RT-PCR方法获得CAS的核心基因,应用cDNA末端快速扩增(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术快速克隆5`末端片段,采用NCBI网站上的Protein Blast软件进行氨基酸同源性比对。[结果]从浙贝母叶片中成功地克隆出一条长691bp的CAS基因5`末端cDNA片段,含起始密码子及163bp的5`延伸区。对5`末端的150个氨基酸同源性分析表明,该片段与C.asiatica,G.glabra,A.thaliana,W.somnifera的CAS同源性分别达72%,66%,71%,71%。[结论]上述结果表明所克隆的片段为浙贝母CAS的5`末端序列,为下一步CAS全长基因的克隆及CAS在浙贝母次生代谢中的功能研究打下基础。展开更多
近年来,RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,即cDNA末端快速扩增技术,是一种快速扩增cDNA的5′和3′末端的有效方法,在扩增全长cDNA方面得到了广泛的应用。综述了RACE技术的研究进展,总结了优化RACE技术几个关键环节。最后展望...近年来,RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,即cDNA末端快速扩增技术,是一种快速扩增cDNA的5′和3′末端的有效方法,在扩增全长cDNA方面得到了广泛的应用。综述了RACE技术的研究进展,总结了优化RACE技术几个关键环节。最后展望了RACE技术的发展。展开更多
为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE...为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE扩增延长该片段。最后根据全基因的序列设计上、下游引物,获得大小为1050bp的全长cDNA。比较核苷酸序列,鸽与鸡的Ii链同源性达到82.8%,而与人等其它动物的同源性则在52.0%以上;其中633bp的开放阅读框编码211个氨基酸残基的前体蛋白。推导和分析氨基酸序列表明,分子结构与鸡恒定链相似,其中有些氨基酸残基表现出较高的保守性。展开更多
目的克隆低等无脊椎环节典型代表动物日本刺沙蚕中枢神经系统色氨酸羟化酶基因全长,为无脊椎动物芳香族氨基酸羟化酶的基因进化研究提供依据。方法应用c DNA末端快速扩增(rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术进行色氨酸羟化酶...目的克隆低等无脊椎环节典型代表动物日本刺沙蚕中枢神经系统色氨酸羟化酶基因全长,为无脊椎动物芳香族氨基酸羟化酶的基因进化研究提供依据。方法应用c DNA末端快速扩增(rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术进行色氨酸羟化酶基因序列克隆。结果在日本刺沙蚕中枢神经系统克隆出色氨酸羟化酶基因3'序列和5'序列。结论在低等环节动物日本刺沙蚕中枢神经系统存在独立的色氨酸羟化酶基因,使色氨酸羟化酶和苯丙氨酸羟化酶基因分化的节点向前推进到环节动物。展开更多
文摘近年来,RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,即cDNA末端快速扩增技术,是一种快速扩增cDNA的5′和3′末端的有效方法,在扩增全长cDNA方面得到了广泛的应用。综述了RACE技术的研究进展,总结了优化RACE技术几个关键环节。最后展望了RACE技术的发展。
文摘为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE扩增延长该片段。最后根据全基因的序列设计上、下游引物,获得大小为1050bp的全长cDNA。比较核苷酸序列,鸽与鸡的Ii链同源性达到82.8%,而与人等其它动物的同源性则在52.0%以上;其中633bp的开放阅读框编码211个氨基酸残基的前体蛋白。推导和分析氨基酸序列表明,分子结构与鸡恒定链相似,其中有些氨基酸残基表现出较高的保守性。
文摘目的克隆低等无脊椎环节典型代表动物日本刺沙蚕中枢神经系统色氨酸羟化酶基因全长,为无脊椎动物芳香族氨基酸羟化酶的基因进化研究提供依据。方法应用c DNA末端快速扩增(rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术进行色氨酸羟化酶基因序列克隆。结果在日本刺沙蚕中枢神经系统克隆出色氨酸羟化酶基因3'序列和5'序列。结论在低等环节动物日本刺沙蚕中枢神经系统存在独立的色氨酸羟化酶基因,使色氨酸羟化酶和苯丙氨酸羟化酶基因分化的节点向前推进到环节动物。
