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番茄LemiR828的克隆表达及其靶基因的鉴定 被引量：1
1
作者 刘伟伟 于丽丽 +3 位作者 方媛 周莹 李洋 周波 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期47-55,共9页
以番茄(Lycopersicum esculentum)LA1996(Aft基因型,紫色花青素积累品系)c DNA为模板,对Lemi R828前体基因和预测到的靶基因Le TAS4(Trans-Acting Si RNA Gene 4)进行克隆,采用RT-PCR技术检测其在番茄果实发育中的差异表达,并用RLM 5′R... 以番茄(Lycopersicum esculentum)LA1996(Aft基因型,紫色花青素积累品系)c DNA为模板,对Lemi R828前体基因和预测到的靶基因Le TAS4(Trans-Acting Si RNA Gene 4)进行克隆,采用RT-PCR技术检测其在番茄果实发育中的差异表达,并用RLM 5′RACE技术验证Lemi R828对预测靶基因Le TAS4m RNA的剪切作用及靶作用位点。结果表明,Lemi R828的前体序列含有完整的茎环结构;在果实发育成熟的过程中,Lemi R828及Le TAS4在番茄中的表达量存在差异。在绿色果阶段的表达量较低且Lemi R828对Le TAS4的负调控关系不明显;而在成熟果阶段,Lemi R828及Le TAS4的表达量均升高,且存在明显的负调控关系。Lemi R828能够靶作用于Le TAS4的转录本上调控其降解,其剪切位点为Lemi R828序列5′端的第10位碱基。因此,在LA1996番茄果实发育过程中,Lemi R828和Le TAS4参与果实发育的调控,并且Lemi R828负调控其靶基因Le TAS4的表达。 展开更多
关键词 番茄 Lemi r828 LE TAS4 花青素合成
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MicroRNA828负调控缺磷胁迫诱导的番茄花青素生物合成 被引量：12
2
作者 贾小云 刘慧 +5 位作者 沈洁 李芳 丁娜 孙岩 高昌勇 李润植 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期2911-2924,共14页
【目的】深入解析番茄mi R828的生物学功能,特别是参与番茄缺磷胁迫响应和花青素生物合成的调控作用。【方法】分别利用ps RNATarget和RLM-5′RACE预测和验证mi R828在番茄中的靶基因。用Meg Align和MEGA5对番茄Sl MYB7-like与部分R2R3 ... 【目的】深入解析番茄mi R828的生物学功能,特别是参与番茄缺磷胁迫响应和花青素生物合成的调控作用。【方法】分别利用ps RNATarget和RLM-5′RACE预测和验证mi R828在番茄中的靶基因。用Meg Align和MEGA5对番茄Sl MYB7-like与部分R2R3 MYB转录因子氨基酸序列进行了多重比对和进化树分析。用q RT-PCR分析mi R828及其靶基因Sl Myb7-like在AC、Micro Tom和LA1996 3个不同番茄种质中的表达和mi R828在番茄(AC)中的组织特异性表达模式。以mi R828过表达转基因番茄和野生番茄为材料,设置正常供磷(+Pi,MS+KH2PO4 3.4 g·L-1)和缺磷(-Pi,MS+KCl 1.86 g·L-1)2个处理的培养试验。用q RT-PCR分析mi R828及其靶基因在缺磷胁迫下的表达模式。将野生型和mi R828过表达的转基因番茄植株缺磷培养15 d后,观察番茄植株地上部分和地下部分的表型差异,通过q RT-PCR分析mi R828、mi R828的靶基因Sl Myb7-like(SGN-U320618)和花青素合成相关酶基因(PAL、CHS、DFR、ANS、3GT和F3′H)的表达模式,应用分光光度计测量各样品的花青素含量。【结果】RLM-5′RACE剪切试验表明mi R828对靶基因Sl Myb7-like存在剪切调控作用,且剪切作用位点位于成熟mi R828的第10位和第11位核苷酸之间,从而验证了Sl Myb7-like是mi R828直接作用的靶基因。氨基酸序列多重比对及进化树分析显示番茄Sl MYB7-like与拟南芥At MYB7和金鱼草MYB330的序列相似性最高。Sl MYB7-like含有与花青素合成相关的保守氨基酸基序。mi R828在Micro Tom幼苗中的表达最高,在LA1996中的表达最低。相反,mi R828靶基因Sl Myb7-like在LA1996中的表达水平最高,在Micro Tom中的表达水平最低。q RT-PCR分析显示Sl Myb7-like的表达模式与mi R828相反,证明Sl Myb7-like被mi R828调控。正常供磷条件下,野生型番茄各组织中mi R828的表达量普遍较低,但在花芽、花和绿果中相对较高;mi R828过表达转基因番茄植株中各花青素合成相关基因的表达量降低为野生型植株的30%—60%,花青素含量降低为野生型植株的40%。在缺磷胁迫下,野生型和mi R828过表达转基因番茄植株中mi R828及其靶基因Sl Myb7-like的表达均受到诱导上调表达;转基因番茄植株地上部分和根系生长受到的抑制程度均小于野生型番茄;转基因番茄植株的颜色较野生型番茄植株颜色浅;转基因番茄植株中Sl Myb7-like、花青素合成相关基因的表达以及花青素含量均低于野生型植株;mi R828过表达转基因番茄植株缺磷胁迫耐受性却高于野生型番茄。【结论】在番茄中,mi R828直接作用的靶基因是Sl Myb7-like。野生型番茄所测组织中mi R828的表达量普遍较低,但在花芽、花和绿果中相对较高。mi R828及其靶基因Sl Myb7-like的表达受缺磷胁迫诱导。在正常供磷和缺磷条件下,mi R828过表达转基因番茄植株中各花青素合成相关基因的表达量和花青素含量均低于野生型,表明mi R828通过靶向Sl Myb7-like负调控花青素合成相关基因的表达,进而负调控番茄植株中花青素的生物合成。mi R828能够提高番茄对缺磷胁迫的耐受性。 展开更多
关键词 番茄 缺磷胁迫 mi r828 Sl Myb7-like 花青素
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