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金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A r10-11截短体蛋白基因片段的原核表达与免疫原性 被引量:2
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作者 杨汐静 陈晓婷 +2 位作者 刘道龙 杨阳 杨光 《华西医学》 CAS 2018年第12期1519-1525,共7页
目的构建金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin binding protein A,FnBPA)r10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株并研究其免疫原性。方法采用重组聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)技术从金黄色葡萄球菌Newman株全基... 目的构建金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin binding protein A,FnBPA)r10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株并研究其免疫原性。方法采用重组聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)技术从金黄色葡萄球菌Newman株全基因组序列中进行PCR扩增,对扩增产物进行纯化,连接T载体后转入大肠杆菌DH5α中进行克隆,提取重组后的质粒进行双酶切鉴定,并回收目的片段连接到pET-32a质粒中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,采用HIS蛋白纯化柱纯化截短蛋白FnBPAr10-11,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴定,纯化后的FnBPAr10-11用于免疫小鼠[分为无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)组、FnBPA组、FnBPAr10-11组],检测小鼠血清免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)水平、细胞因子水平、免疫保护率。结果 SDS-PAGE分析显示,表达后的蛋白相对分子质量约为33.1×103。FnBPAr10-11组与FnBPA组IgG抗体效价达1∶128 000,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。FnBPAr10-11组的细胞因子水平与FnBPA组比较差异无统计学意义(P>0.05),与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。攻毒试验中FnBPAr10-11组的免疫保护作用在50%以上。结论成功构建了金黄色葡萄球菌Fn BPAr10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株,该截短蛋白免疫原性良好。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 纤连蛋白结合蛋白Ar10-11 免疫原性
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整合素激活因子Talin蛋白棒状结构域的双螺旋束结构研究
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作者 林霖 宋先强 +1 位作者 叶盛 张荣光 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第6期574-582,共9页
Talin能够激活整合素(integrin),同时作为连接细胞骨架与跨膜受体整合素的桥梁,在细胞黏附、迁移等过程中发挥着关键的调控作用.整合素的激活反应是通过Talin-FERM结构域的F3结合整合素β亚基的胞内尾段来完成的.Talin在体内存在... Talin能够激活整合素(integrin),同时作为连接细胞骨架与跨膜受体整合素的桥梁,在细胞黏附、迁移等过程中发挥着关键的调控作用.整合素的激活反应是通过Talin-FERM结构域的F3结合整合素β亚基的胞内尾段来完成的.Talin在体内存在自抑制与活化两种状态,我们之前解析的F2F3/R9复合物结构显示,在自抑制状态下,整合素结合位点F3与其尾部片段Talin-R9(1654~1822 a.a.)结合,此时整合素不能被活化.然而,Talin作为一个270 ku的大蛋白,除了F3和R9以外的部分在Talin自身的活化过程中如何协同发挥作用,至今仍是未知的.我们分别解析了Talin R9-10(1654~1973 a.a.)、R10-11(1815~2140 a.a.)的双螺旋束晶体结构,单独的R9、R10、R11均为5-螺旋的螺旋束结构,R9-10之间通过一条长α螺旋连接,R9和R10交错排列在该螺旋的两侧,夹角约为150°;R10-11之间的柔性连接区在周围氢键网络的稳定下,使R10和R11形成了约120°的夹角.晶体结构中观察到的夹角与前人的小角散射及电镜结果相吻合.结合已有的R7-8、R11-12结构进行重叠,得到的R7-12拼接结构模型表现为伸展的长棒状,R8则凸出于长棒之外;R10-12不影响F3的结合,而R8不仅在空间上遮盖了F3的结合位点,而且可能通过电荷排斥F2F3.凝胶排阻层析实验也证实了这一点.本工作为进一步阐释Talin的自抑制机制提供了分子基础. 展开更多
关键词 TALIN r9-10 r10-11 晶体结构 双螺旋束 自抑制
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Two new ar-bisabol sesquiterpenes from the stem bark of Fraxinus sielboldiana 被引量:3
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作者 Sheng Lin Yan-ling Zhang +7 位作者 Ming-tao Liu Jia-chen Zi Mao-luo Gan Wei-xia Song Xiao-na Fan Su-juan Wang Yong-chun Yang Jian-gong Shi 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS 2011年第2期89-92,共4页
Two new ar-bisabol sequiterpenes,(+)-(7S,10S)-10-epi-7,10-epoxy-3-hydroxy-ar-bisabol-11-ol(1)and(+)-(7R,8R,10S)-10-epi-7,10-epoxy-8-hydroxy-ar-bisabol-11-ol(2),have been isolated by a combination of various column chr... Two new ar-bisabol sequiterpenes,(+)-(7S,10S)-10-epi-7,10-epoxy-3-hydroxy-ar-bisabol-11-ol(1)and(+)-(7R,8R,10S)-10-epi-7,10-epoxy-8-hydroxy-ar-bisabol-11-ol(2),have been isolated by a combination of various column chromatographic techniques including reversed-phase semipreparative HPLC from an ethanol extract of the stem bark of Fraxinus sielboldiana.Their structures were determined by spectroscopic methods including IR,MS,and 1D and 2D NMR experiments.This is the first report of sequiterpenes in the genus Fraxinus. 展开更多
关键词 Fraxinus sielboldiana Blume Ar-bisabol sequiterpenes (+)-(7S 10S)-10-epi-7 10-epoxy-3-hydroxyar-bisabol-11-ol (+)-(7r 8r 10S)-10-epi-7 10-epoxy-8-hydroxyar-bisabol-11-ol
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