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小分子化合物Lyb24与二氢乳清酸脱氢酶PyrD的相互作用研究
1
作者
孙嘉荣
王淑燕
+1 位作者
黄维
鲁超
《中国药科大学学报》
北大核心
2026年第2期240-245,共6页
本研究旨在探索小分子化合物Lyb24与肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)嘧啶生物合成途径关键酶PyrD之间的相互作用以及Lyb24对PyrD酶催化活性的影响,为新型抗菌药物的开发提供理论依据。实验通过NdeⅠ/XbaⅠ双酶切技术构建pET-30a...
本研究旨在探索小分子化合物Lyb24与肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)嘧啶生物合成途径关键酶PyrD之间的相互作用以及Lyb24对PyrD酶催化活性的影响,为新型抗菌药物的开发提供理论依据。实验通过NdeⅠ/XbaⅠ双酶切技术构建pET-30a(+)-PyrD重组质粒,并利用热激法将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞。在0.3 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导下,于16℃条件下诱导重组蛋白表达。采用镍-氮三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和色谱法纯化重组PyrD蛋白,获得高纯度产物。通过表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)实验检测Lyb24与PyrD蛋白之间的直接相互作用,并利用基于2,6-二氯酚靛酚的比色法评估Lyb24对PyrD催化活性的影响。实验成功构建了pET-30a(+)-PyrD质粒,表达并纯化出浓度为5.58 mg/mL的相对分子质量约为36 kD的重组PyrD蛋白。Lyb24与PyrD能够发生高亲和力的直接结合(KD=8.83×10^(-5) mol/L),且Lyb24对PyrD的酶活性具有反竞争性抑制作用。本研究揭示了小分子化合物Lyb24可与PyrD发生直接结合,以及对其功能的抑制作用,为开发以PyrD为靶点的新型抗菌制剂提供了重要的实验依据和数据支持,具有潜在的临床应用价值。
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关键词
肺炎克雷伯菌
抑制剂
Lyb24
pyrd
机制研究
暂未订购
Pseudomonas pseudoalcaligenes B50铁载体合成相关基因pyrD的克隆与功能分析
被引量：
4
2
作者
丁延芹
黄伟红
+2 位作者
姚良同
于素芳
杜秉海
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期981-985,共5页
从棉花根际分离的一株细菌B50在低铁条件下可以产生铁载体。通过形态学特征、生理生化特征及其16SrDNA序列分析,将其鉴定为Pseudomonas pseudoalcaligenes。采用三亲本杂交的方法将转座子Tn5-1063a(含luxAB)导入B50中,进行转座子插入诱...
从棉花根际分离的一株细菌B50在低铁条件下可以产生铁载体。通过形态学特征、生理生化特征及其16SrDNA序列分析,将其鉴定为Pseudomonas pseudoalcaligenes。采用三亲本杂交的方法将转座子Tn5-1063a(含luxAB)导入B50中,进行转座子插入诱变,获得突变株。用TAIL-PCR方法得到与铁吸收有关的pyrD基因序列。通过互补实验验证pyrD与铁载体的合成有关。Pseudomonas pseudoalcaligenes能够产生铁载体属于首次报道。
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关键词
PSEUDOMONAS
pseudoalcaligenes
铁载体合成
pyrd
原文传递
题名
小分子化合物Lyb24与二氢乳清酸脱氢酶PyrD的相互作用研究
1
作者
孙嘉荣
王淑燕
黄维
鲁超
机构
安徽理工大学第一附属医院
深圳市人民医院检验科
深圳市呼吸系统疾病临床医学研究中心
安徽理工大学第一附属医院药物临床试验研究中心
出处
《中国药科大学学报》
北大核心
2026年第2期240-245,共6页
基金
深圳市呼吸系统疾病临床医学研究中心课题(LCYSSQ20220823091203007)。
文摘
本研究旨在探索小分子化合物Lyb24与肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)嘧啶生物合成途径关键酶PyrD之间的相互作用以及Lyb24对PyrD酶催化活性的影响,为新型抗菌药物的开发提供理论依据。实验通过NdeⅠ/XbaⅠ双酶切技术构建pET-30a(+)-PyrD重组质粒,并利用热激法将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞。在0.3 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导下,于16℃条件下诱导重组蛋白表达。采用镍-氮三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和色谱法纯化重组PyrD蛋白,获得高纯度产物。通过表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)实验检测Lyb24与PyrD蛋白之间的直接相互作用,并利用基于2,6-二氯酚靛酚的比色法评估Lyb24对PyrD催化活性的影响。实验成功构建了pET-30a(+)-PyrD质粒,表达并纯化出浓度为5.58 mg/mL的相对分子质量约为36 kD的重组PyrD蛋白。Lyb24与PyrD能够发生高亲和力的直接结合(KD=8.83×10^(-5) mol/L),且Lyb24对PyrD的酶活性具有反竞争性抑制作用。本研究揭示了小分子化合物Lyb24可与PyrD发生直接结合,以及对其功能的抑制作用,为开发以PyrD为靶点的新型抗菌制剂提供了重要的实验依据和数据支持,具有潜在的临床应用价值。
关键词
肺炎克雷伯菌
抑制剂
Lyb24
pyrd
机制研究
Keywords
Klebsiella pneumoniae
inhibitor
Lyb24
pyrd
mechanism study
分类号
R969.2 [医药卫生—药理学]
暂未订购
题名
Pseudomonas pseudoalcaligenes B50铁载体合成相关基因pyrD的克隆与功能分析
被引量：
4
2
作者
丁延芹
黄伟红
姚良同
于素芳
杜秉海
机构
山东农业大学生命科学学院微生物学系
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期981-985,共5页
基金
山东省优秀中青年科研奖励基金项目(No.2006BS06012)
贵州合肥烟草分公司科技合作项目
文摘
从棉花根际分离的一株细菌B50在低铁条件下可以产生铁载体。通过形态学特征、生理生化特征及其16SrDNA序列分析,将其鉴定为Pseudomonas pseudoalcaligenes。采用三亲本杂交的方法将转座子Tn5-1063a(含luxAB)导入B50中,进行转座子插入诱变,获得突变株。用TAIL-PCR方法得到与铁吸收有关的pyrD基因序列。通过互补实验验证pyrD与铁载体的合成有关。Pseudomonas pseudoalcaligenes能够产生铁载体属于首次报道。
关键词
PSEUDOMONAS
pseudoalcaligenes
铁载体合成
pyrd
Keywords
Pseudomonas pseudoalcaligenes, Siderophores biosynthesis,
pyrd
分类号
Q93 [生物学—微生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小分子化合物Lyb24与二氢乳清酸脱氢酶PyrD的相互作用研究
孙嘉荣
王淑燕
黄维
鲁超
《中国药科大学学报》
北大核心
2026
0
暂未订购
2
Pseudomonas pseudoalcaligenes B50铁载体合成相关基因pyrD的克隆与功能分析
丁延芹
黄伟红
姚良同
于素芳
杜秉海
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
原文传递
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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