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青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
1
1
作者
覃雪晶
王雨涵
+1 位作者
曹一博
张凌云
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第8期142-149,共8页
制备青杄(Picea wilsonii)PwHAP5基因的特异性多克隆抗体,为研究PwHAP5基因功能、分子机制奠定基础。经PCR扩增获得青杄花粉PwHAP5基因片段与载体pET-48b相连构建原核表达载体pET-48b-PwHAP5。经诱导产生重组蛋白PwHAP5,通过His-NTA镍...
制备青杄(Picea wilsonii)PwHAP5基因的特异性多克隆抗体,为研究PwHAP5基因功能、分子机制奠定基础。经PCR扩增获得青杄花粉PwHAP5基因片段与载体pET-48b相连构建原核表达载体pET-48b-PwHAP5。经诱导产生重组蛋白PwHAP5,通过His-NTA镍柱纯化蛋白产物。蛋白经SDS-PAGE检测后再免疫兔子制备兔抗血清。血清经ProteinA纯化后,通过SDS-PAGE和Western blot检测抗体纯度和特异性。结果表明,成功构建了原核表达载体pET-48b-PwHAP5,制备了分子质量约为45 kD的重组蛋白PwHAP5。获得的青杄PwHAP5兔抗血清经间接ELISA法检测效价达1∶729000以上;制备的PwHAP5蛋白兔多克隆抗体能特异性识别抗原,效价高,满足后续研究PwHAP5蛋白在青杄生长发育中的功能等需求。
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关键词
pwhap5
基因
原核表达
蛋白纯化
多克隆抗体
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职称材料
青杄转录因子PwHAP5及其同源蛋白AtHAP5下游靶基因的鉴定
2
作者
苗雅慧
游韩莉
+1 位作者
郜银涛
张凌云
《东北林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期6-12,16,共8页
利用分子生物学手段,对青杄PwHAP5及其拟南芥同源基因AtHAP5的下游调控基因进行探究,旨在丰富青杄以及拟南芥中HAP5转录因子的调控网络。通过转录激活活性分析,发现PwHAP5和AtHAP5均无转录激活活性。两个酵母单杂交体系(pHis2和pAbAi体...
利用分子生物学手段,对青杄PwHAP5及其拟南芥同源基因AtHAP5的下游调控基因进行探究,旨在丰富青杄以及拟南芥中HAP5转录因子的调控网络。通过转录激活活性分析,发现PwHAP5和AtHAP5均无转录激活活性。两个酵母单杂交体系(pHis2和pAbAi体系酵母单杂交实验)显示A37、HSFA2启动子全长、只含有CCAAT box的区域均不能与PwHAP5和AtHAP5直接结合。EMSA试验结果表明,AtHAP5与A37和HSFA2启动子在体外不能直接结合;单(双)荧光素酶试验结果表明,AtHAP5对HSFA2具有负调控作用,但对A37表达无影响。通过RT-qPCR试验检测在异源过表达OE-PwHAP5植株中预测靶基因的表达量,结果显示A37与HSFA2相对表达量均无显著变化,而在同源过表达植株OE-AtHAP5中,HSFA2的相对表达量下降。这些结果显示AtHAP5在体内负调控HSFA2表达,而PwHAP5在进化上与AtHAP5的功能存在差异。
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关键词
青杄
转录因子
pwhap5
AtHAP5
HSFA2
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职称材料
题名
青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
1
1
作者
覃雪晶
王雨涵
曹一博
张凌云
机构
北京林业大学林学院森林培育与保护教育部重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第8期142-149,共8页
基金
北京林业大学中央高校基本科研业务费专项资金项目(2021ZY01)。
文摘
制备青杄(Picea wilsonii)PwHAP5基因的特异性多克隆抗体,为研究PwHAP5基因功能、分子机制奠定基础。经PCR扩增获得青杄花粉PwHAP5基因片段与载体pET-48b相连构建原核表达载体pET-48b-PwHAP5。经诱导产生重组蛋白PwHAP5,通过His-NTA镍柱纯化蛋白产物。蛋白经SDS-PAGE检测后再免疫兔子制备兔抗血清。血清经ProteinA纯化后,通过SDS-PAGE和Western blot检测抗体纯度和特异性。结果表明,成功构建了原核表达载体pET-48b-PwHAP5,制备了分子质量约为45 kD的重组蛋白PwHAP5。获得的青杄PwHAP5兔抗血清经间接ELISA法检测效价达1∶729000以上;制备的PwHAP5蛋白兔多克隆抗体能特异性识别抗原,效价高,满足后续研究PwHAP5蛋白在青杄生长发育中的功能等需求。
关键词
pwhap5
基因
原核表达
蛋白纯化
多克隆抗体
Keywords
pwhap5
gene
prokaryotic expression
protein purification
polyclonal antibody
分类号
S792.99 [农业科学—林木遗传育种]
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
青杄转录因子PwHAP5及其同源蛋白AtHAP5下游靶基因的鉴定
2
作者
苗雅慧
游韩莉
郜银涛
张凌云
机构
森林培育与保护教育部重点实验室(北京林业大学)
出处
《东北林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期6-12,16,共8页
基金
农业部转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08009003-002)
国家自然科学基金面上项目(31270663)。
文摘
利用分子生物学手段,对青杄PwHAP5及其拟南芥同源基因AtHAP5的下游调控基因进行探究,旨在丰富青杄以及拟南芥中HAP5转录因子的调控网络。通过转录激活活性分析,发现PwHAP5和AtHAP5均无转录激活活性。两个酵母单杂交体系(pHis2和pAbAi体系酵母单杂交实验)显示A37、HSFA2启动子全长、只含有CCAAT box的区域均不能与PwHAP5和AtHAP5直接结合。EMSA试验结果表明,AtHAP5与A37和HSFA2启动子在体外不能直接结合;单(双)荧光素酶试验结果表明,AtHAP5对HSFA2具有负调控作用,但对A37表达无影响。通过RT-qPCR试验检测在异源过表达OE-PwHAP5植株中预测靶基因的表达量,结果显示A37与HSFA2相对表达量均无显著变化,而在同源过表达植株OE-AtHAP5中,HSFA2的相对表达量下降。这些结果显示AtHAP5在体内负调控HSFA2表达,而PwHAP5在进化上与AtHAP5的功能存在差异。
关键词
青杄
转录因子
pwhap5
AtHAP5
HSFA2
Keywords
Picea wilsonii
Transcription factor
pwhap5
AtHAP5
HSFA2
分类号
S718.46 [农业科学—林学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备
覃雪晶
王雨涵
曹一博
张凌云
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
青杄转录因子PwHAP5及其同源蛋白AtHAP5下游靶基因的鉴定
苗雅慧
游韩莉
郜银涛
张凌云
《东北林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
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职称材料
已选择
0
条
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引证文献
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