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人骨骼肌TnI-fast基因克隆和体外表达
1
作者 熊光武 王世阆 +8 位作者 杨莉 魏于全 田聆 雷松 阚兵 毛咏秋 王玉 杨佩 方芳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期86-89,共4页
目的　构建人骨骼肌TnI fast基因分泌型真核表达载体 ,为利用TnI fast基因进行抗肿瘤血管生成基因治疗奠定基础。方法　采用PCR和RT PCR制备TnI fastcDNA ,构建TnI fast基因克隆质粒 ,测序证实后将TnI fastcDNA插入到pSecTag2B构建分泌... 目的　构建人骨骼肌TnI fast基因分泌型真核表达载体 ,为利用TnI fast基因进行抗肿瘤血管生成基因治疗奠定基础。方法　采用PCR和RT PCR制备TnI fastcDNA ,构建TnI fast基因克隆质粒 ,测序证实后将TnI fastcDNA插入到pSecTag2B构建分泌型重组真核表达质粒。然后用TnI fast基因重组表达质粒转染COS 1细胞 ,检测TnI fast基因体外表达。结果　DNA测序证实 ,我们从人骨骼肌总RNA和cDNA文库中扩增的TnI fastcDNA序列与NCBIGenebankTnI fastcDNA序列完全一致。ELISA检测证实 ,TnI fast pSecTag2B转染后目的基因可在真核细胞中分泌表达。结论　本研究成功地构建了TnI fast基因重组表达质粒 。 展开更多
关键词 TnI-fast基因 psectag2b 克隆 真核表达 肿瘤 生物治疗 抗肿瘤血管生成
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基因重组免疫毒素白细胞介素18-PE38融合基因治疗类风湿性关节炎的初步研究 被引量：2
2
作者 吴瑕 杨春蕾 +3 位作者 张林 李虹 陶大昌 屈艺 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期306-309,共4页
目的　构建白细胞介素18(interleukin18,IL- 18) - PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法。　方法　经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL4 5 9K- IL18- PE38中获取IL- 18-... 目的　构建白细胞介素18(interleukin18,IL- 18) - PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法。　方法　经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL4 5 9K- IL18- PE38中获取IL- 18- PE38融合基因,将其与真核表达载体Psec Tag2 B连接,转化感受态菌,挑取单克隆培养并提取质粒,Eco R 单酶切鉴定。脂质体转染法将构建的真核表达载体转染入3T3细胞及小鼠软骨细胞中,分别设置空载体对照,通过荧光免疫细胞化学法鉴定转染后瞬时表达情况。　结果　Eco R 单酶切后电泳鉴定显示,所构建的真核表达载体Psec Tag2 B- IL- 18- PE38片段长度约为6 0 0 0 bp。荧光免疫细胞化学法、荧光显微镜摄片均显示转染融合基因组荧光表达强,空载体对照组荧光表达微弱。　结论　IL- 18- PE38融合基因真核表达载体构建成功,并在小鼠软骨细胞及3T3细胞中表达,为类风湿性关节炎的基因治疗研究奠定基础。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 白细胞介素 融合基因治疗 重组免疫毒素 免疫细胞化学法 步研究 psectag2b 真核表达载体构建 3T3细胞 EcoRⅠ 软骨细胞 基因治疗方法 限制性内切酶 脂质体转染法 荧光显微镜 克隆培养 酶切鉴定 表达情况
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