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竹节参类黄酮3'-羟化酶基因的生物信息学分析与功能验证
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作者 黄系伦 唐婷婷 +2 位作者 金睿 梁娥 张来 《西北农业学报》 北大核心 2025年第12期2282-2291,共10页
为探讨竹节参果实呈色分子表达机理,对珍稀中草药竹节参(Panax japonicus C.A.Mey.)果实成熟颜色变化过程中类黄酮3'-羟化酶基因进行生物信息分析与功能验证。基于竹节参果实转录组学分析,通过NCBI获取同源基因并进行多重比较获得... 为探讨竹节参果实呈色分子表达机理,对珍稀中草药竹节参(Panax japonicus C.A.Mey.)果实成熟颜色变化过程中类黄酮3'-羟化酶基因进行生物信息分析与功能验证。基于竹节参果实转录组学分析,通过NCBI获取同源基因并进行多重比较获得保守序列,采用RT-PCR克隆技术获得竹节参果实PjF3'H基因全长CDS,对其进行生物信息学分析,并构建PjF3'H-GFP蛋白与细胞质Marker在烟草叶片中共定位,同时构建pBI121-PjF3'H载体并转化野生型拟南芥(WT)进行功能验证。结果表明,PjF3'H开放阅读框为546 bp,蛋白分子质量为20.36 ku,编码181个氨基酸,预测该蛋白是不稳定弱碱性亲水蛋白,位于细胞核与细胞质,PjF3'H与西洋参PqF3'H相似性很高。对转基因阳性植株进行PCR鉴定,PjF3'H基因整合到拟南芥基因组获得转基因PjF3'H拟南芥植株,qRT-PCR分析指出,转基因拟南芥植株的PjF3'H基因相对表达均高于未转拟南芥,次生代谢产物含量测定发现转PjF3'H基因拟南芥代谢产物花青素含量相对于未转拟南芥显著高表达,说明PjF3'H参与拟南芥花青素的合成。研究表明PjF3'H基因是竹节参果实花青素生物合成途径中的关键调控基因。 展开更多
关键词 竹节参 pjf3'h 克隆 生物信息学分析 功能验证
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