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灰葡萄孢菌激发子pebC1在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性分析 被引量：1
1
作者 张云华 杨秀芬 +2 位作者 刘延锋 玉山江 邱德文 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1631-1636,共6页
为了实现激发子PebC1编码基因在毕赤酵母中的分泌表达,采用PCR方法从灰葡萄孢菌BC-4-2-2-1菌株中扩增获得激发子PebC1的编码序列,将其亚克隆至酵母分泌型表达载体pPIC9K中,以此片段构建了pPIC9K-pebC1重组表达质粒。重组表达质粒经Bgl... 为了实现激发子PebC1编码基因在毕赤酵母中的分泌表达,采用PCR方法从灰葡萄孢菌BC-4-2-2-1菌株中扩增获得激发子PebC1的编码序列,将其亚克隆至酵母分泌型表达载体pPIC9K中,以此片段构建了pPIC9K-pebC1重组表达质粒。重组表达质粒经BglⅡ线性化处理,电击转化至毕赤酵母宿主菌GS115,经MD、G418-YPD平板和PCR法筛选,获得了重组毕赤酵母菌GS115/pPIC9K-pebC1。用甲醇诱导重组酵母菌表达目标蛋白,发酵液经SDS-PAGE电泳分析,在约39 kDa处出现特异目标条带。Western blotting检测结果说明,重组表达产物具有良好的抗原性。生物活性检测表明,酵母重组表达蛋白PebC1能够诱导拟南芥和黄瓜幼苗对灰霉病的抗性。 展开更多
关键词 激发子 pebc1基因 毕赤酵母 生物活性
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使用TEV-LIC克隆与表达系统对蛋白激发子PebC1的纯化
2
作者 刘权 《黑龙江八一农垦大学学报》 2011年第4期43-45,95,共4页
PebC1是来自于灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的蛋白激发子,具有提高植物综合抗逆性的功能,可以开发为生物农药。由于该蛋白自身性质原因,如结合杂蛋白、形成二聚体等,难于得到纯蛋白,不利于进行进一步的研究。将该蛋白的编码基因克隆到T... PebC1是来自于灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的蛋白激发子,具有提高植物综合抗逆性的功能,可以开发为生物农药。由于该蛋白自身性质原因,如结合杂蛋白、形成二聚体等,难于得到纯蛋白,不利于进行进一步的研究。将该蛋白的编码基因克隆到TEV-LIC表达载体系统,并对该蛋白进行了表达,使用His标签和MBP标签进行亲和层析,然后通过TEV蛋白酶切去标签,用离子交换层析和分子筛层析得到高纯度的蛋白。本研究为PebC1的后续研究打下了基础,也为研究一些难于纯化的蛋白提供了新思路。 展开更多
关键词 pebc1 TEV-LIC 纯化
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