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寄生疫霉parA1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：10
1
作者 梁元存 刘爱新 +2 位作者 董汉松 王金生 张天宇 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期202-205,共4页
根据已报道的寄生疫霉 (Phytophthoraparasitica)parA1基因的序列设计引物 ,从 4株寄生疫霉中国菌株 (3株来自烟草 ,1株来自刺槐 )中克隆到此基因并进行了重组表达。序列分析表明 4株寄生疫霉parA1基因序列高度保守。对表达载体pET 30a... 根据已报道的寄生疫霉 (Phytophthoraparasitica)parA1基因的序列设计引物 ,从 4株寄生疫霉中国菌株 (3株来自烟草 ,1株来自刺槐 )中克隆到此基因并进行了重组表达。序列分析表明 4株寄生疫霉parA1基因序列高度保守。对表达载体pET 30a(+)双酶切 ,构建表达Parasiticein蛋白的表达载体pET eli,用CaCl2 法转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL2 1,通过诱导在大肠杆菌中进行非融合表达 ,表达产物在烟草上引起过敏性反应。性质测定表明 ,表达产物有一定的耐热性 ,并对蛋白酶K敏感。 展开更多
关键词 寄生疫霉 para1基因 克隆 大肠杆菌 表达 耐热性 蛋白酶K 序列分析 烟草 黑胫病
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磷脂酶D对ParA1诱导的烟草的细胞死亡和过氧化氢及莨菪亭积累的影响 被引量：3
2
作者 魏芳芳 王蕾 +1 位作者 梁元存 王玉军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期949-954,共6页
利用药理学方法,研究了烟草寄生疫霉(Phytophthora parasitica)分泌的蛋白激发子ParA1诱导烟草悬浮细胞后,磷脂酶D对ParA1诱导的过敏细胞死亡和其它防卫反应的影响.用100nmol/LParA1处理烟草悬浮细胞后能够诱导细胞死亡、过氧化氢和莨... 利用药理学方法,研究了烟草寄生疫霉(Phytophthora parasitica)分泌的蛋白激发子ParA1诱导烟草悬浮细胞后,磷脂酶D对ParA1诱导的过敏细胞死亡和其它防卫反应的影响.用100nmol/LParA1处理烟草悬浮细胞后能够诱导细胞死亡、过氧化氢和莨菪亭的积累.磷脂酶D抑制剂正丁醇能够抑制ParA1诱导的这些防卫反应,仲丁醇所起的抑制作用比正丁醇小,正丁醇和仲丁醇产生的抑制效果具有浓度依赖效应.而叔丁醇不能抑制ParA1诱导的这些反应.结果表明,磷脂酶D参与了ParA1诱导烟草悬浮细胞的信号传导过程. 展开更多
关键词 磷脂酶D para1 细胞死亡 过氧化氢 莨菪亭
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寄生疫霉ParA1蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量：2
3
作者 俞咪娜 邓晟 +1 位作者 王颖 董汉松 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第1期48-51,共4页
本研究构建ParA1蛋白真核表达系统,通过诱导表达、镍柱纯化等途径,获得具有高生物学活性的ParA1蛋白。将末端含6×His-tag的parA1基因整合到酵母胞内表达质粒pPICZ-A上,获得重组表达质粒pPICZ-A::parA1-His。重组表达质粒用BstX I... 本研究构建ParA1蛋白真核表达系统,通过诱导表达、镍柱纯化等途径,获得具有高生物学活性的ParA1蛋白。将末端含6×His-tag的parA1基因整合到酵母胞内表达质粒pPICZ-A上,获得重组表达质粒pPICZ-A::parA1-His。重组表达质粒用BstX I酶切线性化后,电转化至毕赤酵母菌KM71H中,经含抗生素Zeocin的平板、MD平板筛选和PCR分析,鉴定得到阳性克隆。甲醇诱导重组酵母菌中ParA1蛋白表达,然后用镍柱纯化表达产物。Tricine-SDS-PAGE电泳检测发现,纯化后收集的蛋白电泳条带清晰单一,浓度约为75 mg/L。生物学活性检测表明所得的ParA1蛋白有较高生物学活性,在稀释6 000倍后仍可以强烈诱导烟草产生过敏反应。 展开更多
关键词 para1蛋白 毕赤酵母 蛋白表达 纯化 过敏反应
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磷脂酶C参与ParA1诱导的烟草悬浮细胞死亡和防卫反应
4
作者 魏芳芳 王蕾 +3 位作者 王莲莲 柳金伟 梁元存 王玉军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期4176-4182,共7页
【目的】研究寄生疫霉Phytophthora parasitica分泌的蛋白激发子ParA1诱导烟草悬浮细胞后,磷脂酶C(phospholipase C,PLC)参与ParA1诱导烟草过敏细胞死亡(hypersensitive cell death,HCD)和防卫反应。【方法】采用药理学方法,在烟草悬浮... 【目的】研究寄生疫霉Phytophthora parasitica分泌的蛋白激发子ParA1诱导烟草悬浮细胞后,磷脂酶C(phospholipase C,PLC)参与ParA1诱导烟草过敏细胞死亡(hypersensitive cell death,HCD)和防卫反应。【方法】采用药理学方法,在烟草悬浮细胞中添加PLC抑制剂,比较烟草悬浮细胞受ParA1诱导后细胞死亡和多种防卫反应的差别。【结果】PLC特异性抑制剂U73122能完全抑制ParA1引起的烟草悬浮细胞死亡,氧迸发、胞外基质碱化和植保素scopoletin(7-羟基-6-甲氧基香豆素)积累都能显著地被抑制,5种防卫基因hin1、hsr203J、PR(pathogenesis-related)-1a、PR-1b和PAL等的转录表达也都受到U73122不同程度的抑制。【结论】ParA1处理烟草悬浮细胞后,PLC参与了ParA1诱导细胞死亡和防卫反应的信号传导过程。 展开更多
关键词 磷脂酶C para1 烟草 细胞死亡 防卫反应
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土壤中黑胫病菌荧光定量PCR快速检测体系的建立及初步应用 被引量：10
5
作者 潘明森 王震铄 +1 位作者 方敦煌 姬广海 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期712-718,共7页
为建立土壤中黑胫病菌的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR快速检测方法,依据疫霉菌特异性par A1基因序列差异位点,设计1对特异性引物。通过构建含有目的片段的重组质粒,建立标准曲线,以SYBR GreenⅠ荧光染料法对烟草黑胫病菌进行荧光定量PC... 为建立土壤中黑胫病菌的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR快速检测方法,依据疫霉菌特异性par A1基因序列差异位点,设计1对特异性引物。通过构建含有目的片段的重组质粒,建立标准曲线,以SYBR GreenⅠ荧光染料法对烟草黑胫病菌进行荧光定量PCR检测,检测灵敏度达1×102个/g土壤,建立了基于SYBR GreenⅠ荧光染料法的荧光定量PCR的快速定量检测体系,并对云南、四川烟草主要栽培区土壤进行检测。表明该体系可以对烟草不同时期的田间土壤黑胫病菌的数量进行动态监测,可用于烟草黑胫病的预测和防治。 展开更多
关键词 黑胫病菌 para1基因 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR
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