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表达绿色荧光蛋白的伪狂犬基因缺失病毒的构建 被引量：3
1
作者 王鑫 李文刚 +3 位作者 吴凤笋 魏娟 耿红娟 靳永健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第1期41-44,共4页
通过酶切、补平、连接的方法对PUSK载体质粒进行改造,消除了该载体上的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点。根据pAcGFP1-C1基因序列设计1对引物,分别在上、下游引物的5′端引入了NotⅠ酶切位点,通过PCR扩增将目的基因AcGFP(包括GFP、CMV、MCS、S... 通过酶切、补平、连接的方法对PUSK载体质粒进行改造,消除了该载体上的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点。根据pAcGFP1-C1基因序列设计1对引物,分别在上、下游引物的5′端引入了NotⅠ酶切位点,通过PCR扩增将目的基因AcGFP(包括GFP、CMV、MCS、SV40 Poly(A))克隆入经改造的PUSK载体内,构建了转移载体质粒PUSG。利用脂质体介导的方法,将转移载体质粒PUSG与伪狂犬病病毒基因组DNA共转染PK-15细胞。于荧光显微镜下48 h便能观察到绿色荧光,用吸管将有荧光的病变细胞吸出,经连续传代3次得到了纯化病毒。重组病毒的获得为下一步研制二价或多价疫苗的筛选提供了方便。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 pusk gG基因 pAcGFP1-C1 转移载体 表达
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