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PRV感染小鼠三叉神经节细胞后通过RIG-Ⅰ信号通路调控Ⅰ型干扰素分泌
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作者 廖正波 汤德元 +7 位作者 曾智勇 王彬 黄涛 陈旭 袁盛林 何松 周飘 毛茵茗 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第2期255-265,共11页
为探究伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)感染小鼠三叉神经节(TG)细胞后对其抗病毒免疫信号通路及Ⅰ型干扰素因子(IFN-Ⅰ)的影响。本试验使用1 MOI PRV接种感染TG原代细胞,使用106.29TCID50PRV滴鼻感染小鼠,使用实时荧光定量PCR(qP... 为探究伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)感染小鼠三叉神经节(TG)细胞后对其抗病毒免疫信号通路及Ⅰ型干扰素因子(IFN-Ⅰ)的影响。本试验使用1 MOI PRV接种感染TG原代细胞,使用106.29TCID50PRV滴鼻感染小鼠,使用实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blot和ELISA等技术检测小鼠TG原代细胞不同攻毒时间点及体内攻毒组和对照组的基因转录、蛋白表达及IFN-α和IFN-β的分泌情况。结果显示,PRV感染小鼠TG原代细胞后引起RIG-I、MAVS和IRF3的基因及蛋白表达变化,诱导了体内外IRF3和IκBα的磷酸化。ELISA结果显示,PRV感染后可调控小鼠TG原代细胞及小鼠TG内IFN-α和IFN-β的分泌。使用siRNA干扰TG细胞内RIG-Ⅰ表达后Western blot检测RIG-Ⅰ信号通路相关蛋白表达结果及IFN-α和IFN-β的分泌情况。结果显示,siRIG-Ⅰ成功干扰TG细胞内RIG-Ⅰ蛋白表达,并引起下游MAVS和IRF3等蛋白表达发生变化,同时调控TG细胞内IFN-α和IFN-β的分泌。研究结果表明,PRV感染可诱导小鼠TG原代细胞及小鼠TG内RIG-Ⅰ的表达,并通过RIG-Ⅰ-MAVS-IRF3信号轴调控TG细胞内IFN-Ⅰ的抗病毒免疫反应,以及PRV会抑制TG内IRF3表达,并在感染后期显著上调IFN-β的表达,这可能是PRV在感染后期导致小鼠快速死亡的重要原因。本试验揭示了PRV感染小鼠TG细胞后通过RIG-Ⅰ-MAVS-IRF3信号通路调控IFN-Ⅰ的部分抗病毒免疫机制,以及发现IRF3蛋白在体内外不同的变化趋势,为后续深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 prv RIG-Ⅰ IRF3 信号通路 Ⅰ型干扰素 小鼠
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基于PRV-copGFP的伪狂犬病毒快速中和抗体效价检测方法的建立
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作者 李晨雨 马琦 +7 位作者 王冰丹 王菲 冯霞 张晓光 李红霞 马晶 郝彦哲 李淑英 《病毒学报》 北大核心 2025年第3期825-834,共10页
本研究开发了一种高效且精准的伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)中和抗体效价检测新方法。通过同源重组和CRISPR-Cas9技术,将桡足纲绿色荧光蛋白(copepod Pontellina plumata Green Fluorescent Protein,copGFP)基因表达盒精确嵌... 本研究开发了一种高效且精准的伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)中和抗体效价检测新方法。通过同源重组和CRISPR-Cas9技术,将桡足纲绿色荧光蛋白(copepod Pontellina plumata Green Fluorescent Protein,copGFP)基因表达盒精确嵌入PRV基因组的UL40/41区域,经过多轮筛选与纯化,成功构建了重组病毒PRV-copGFP。生长特性对比实验表明,PRV-copGFP与野生型PRV-Bartha之间无显著差异(P>0.05)。借助CTL-ImmunoSpot?S6仪器计数表达copGFP的细胞数目,确定了最佳观测时间和最佳病毒滴度。该方法可精确计算中和抗体效价,并通过传统噬斑减少中和试验(Plaque reduction neutralization test, PRNT)进行验证。与传统方法相比,本检测方法将检测窗口缩短至10h,且通量显著提升。本方法在快速评估PRV中和抗体效价方面具有显著优势,可为PRV疫苗研发、疾病防控及相关研究提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(prv) 中和抗体效价 桡足纲绿色荧光蛋白(copGFP) 重组病毒 快速检测
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Chinese herbal extracts with antiviral activity:evaluation,mechanisms,and potential for preventing PRV,PEDV and PRRSV infections
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作者 Yumei Sun Chang Li +7 位作者 Zhongzhu Liu Wei Zeng Muhammad Jamil Ahmad Mengjia Zhang Lina Liu Shujun Zhang Wentao Li Qigai He 《Animal Diseases》 2025年第2期205-219,共15页
The rapid expansion of large-scale pig farming has brought about a surge in viral diseases with high morbidity rates and diverse manifestations.This widespread occurrence of multiple viral diseases in pig farms has in... The rapid expansion of large-scale pig farming has brought about a surge in viral diseases with high morbidity rates and diverse manifestations.This widespread occurrence of multiple viral diseases in pig farms has inflicted severe economic losses on the global swine industry.Consequently,there is an urgent need for eco-friendly and efficient antivi-ral drugs that can effectively combat viruses and prevent diseases such as PEDV,PRRSV,PRV,and other viral infections.To this end,we conducted a study on the antiviral activity and cytotoxicity of eleven different Chinese herbal extracts(CHE) against PRV.In vitro testing of several extracts,namely,Echinacea,Ilex purpurea Hassk,Ganoderma lucidum Kars,Taraxacum mongolicum,and Ilex rotunda Thunb,exhibited remarkable inhibition of PRV infection without causing any cytotoxic effects.Specifically,their antiviral selectivity indexes were significantly higher,with values ranging from 6-to 144-fold.The antiviral efficacy of five CHEs was evaluated against other RNA viruses,including PRRSV and PEDV.The extracts showed substantial inhibition of PEDV and PRRSV proliferation.Echinacea and Ilex purpurea Hassk extracts exhibited the highest virus inhibitory effects.To understand the antiviral mechanisms underlying their potent activity,a time-of-addition experiment was conducted.The results indicated that these extracts effectively targeted the early infection and postinfection stages of PRV,PEDV,and PRRSV.The study found that the Chinese herbal extracts,Echinacea and Ilex purpurea Hassk,had both direct and indirect effects on virus particles and cellular targets,demonstrating broad-spectrum antiviral activity against multiple clinical strains of PRV and PEDV.These findings provide a strong foundation for the development of herbal medicines to prevent and treat infections caused by PRV,PEDV and PRRSV in the swine industry.The identified extracts show great promise for the formulation of effective and environmentally friendly antiviral interventions. 展开更多
关键词 CHE prv PEDV PRRSV Antiviral activity
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2021—2023年湖南省无害化处理场CSFV、PRV、PRRSV污染情况调查
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作者 唐亚新 胡巧云 +8 位作者 唐小明 王卫国 彭志 谢怡灵 张坤 王昌建 鲁杏华 范仲鑫 黎满香 《中国动物检疫》 CAS 2024年第3期5-9,47,共6页
为了解湖南省2021—2023年无害化处理场猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)污染情况,采用RT-qPCR方法对采集的1825份淋巴结、脾脏、耳尖等组织样品进行CSFV、PRV、PRRSV核酸检测,并对2022年衡南县PRRSV... 为了解湖南省2021—2023年无害化处理场猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)污染情况,采用RT-qPCR方法对采集的1825份淋巴结、脾脏、耳尖等组织样品进行CSFV、PRV、PRRSV核酸检测,并对2022年衡南县PRRSV阳性样品进行分型检测及Nsp2基因测序。结果显示:CSFV、PRV、PRRSV的阳性检出率分别为3.01%、1.81%、30.14%;双重污染率为2.52%,以PRRSV与其他2种病原双重污染为主,三重污染率较低,为0.05%。2022年衡南县无害化处理场的PRRSV阳性检出率为24.12%,以春、冬季阳性率较高;北美型(NA-PRRSV)、高致病型(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)阳性检出率分别为98.39%、20.97%、43.55%;经Nsp2基因测序,1条序列存在“1+29”个不连续氨基酸缺失,为HP-PRRSV毒株,17条序列存在“111+1+19”个不连续氨基酸缺失,为类NADC30毒株。结果表明:2021—2023年,湖南省无害化处理场CSFV、PRV污染率维持在较低水平,PRRSV污染率较高,呈逐年上升趋势,其中类NADC30毒株为优势流行毒株,建议持续做好猪瘟及猪伪狂犬病的免疫接种及效果评估工作,加强PRRSV的遗传变异监测及养殖场的饲养管理和生物安全管理,以保障猪群生产安全。 展开更多
关键词 无害化处理场 PRRSV prv CSFV 混合污染
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表达PEDV S蛋白重组PRV的构建与生物学特性评价 被引量:1
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作者 侯晓璇 穆永 +4 位作者 王同燕 颜世君 王孟月 谭菲菲 田克恭 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期657-663,共7页
将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株的S胞外区基因克隆至含有gG基因上、下游同源臂以及抗性筛选基因的转移质粒pUC-ABK中,构建供体质粒pUC-ABK-S,获得线性同源重组片段AS-K-B。利用Red同源重组技术将线... 将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株的S胞外区基因克隆至含有gG基因上、下游同源臂以及抗性筛选基因的转移质粒pUC-ABK中,构建供体质粒pUC-ABK-S,获得线性同源重组片段AS-K-B。利用Red同源重组技术将线性同源重组片段电转化至含有pPRVBac-GFPTK-gE-gI-11k-28k-的感受态中获得重组pPRVBac-S,最后拯救获得重组病毒rPRV-S。PCR及IFA鉴定结果显示,S胞外区基因成功转录且表达,生物学特性评价结果表明重组病毒能够稳定遗传,为研制猪流行性腹泻病毒活载体疫苗提供了思路。 展开更多
关键词 PEDV S蛋白 RED同源重组 重组prv
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新型含N-吡啶联吡唑类二聚体衍生物的合成及抗猪伪狂犬病毒(PRV)活性评价
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作者 侯学会 姚晨 +4 位作者 宋锦清 杨菲菲 何张旭 陈晓培 张京玉 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1558-1567,共10页
猪伪狂犬病毒(PRV)不仅感染多种脊椎动物,还可直接感染人类,导致神经和呼吸系统严重受损,引起了人们对PRV跨物种传播的担忧,然而,针对PRV的特异性抗病毒药物很少.运用分子拼接和电子等排的原理,设计合成了25个含N-吡啶联吡唑类二聚体衍... 猪伪狂犬病毒(PRV)不仅感染多种脊椎动物,还可直接感染人类,导致神经和呼吸系统严重受损,引起了人们对PRV跨物种传播的担忧,然而,针对PRV的特异性抗病毒药物很少.运用分子拼接和电子等排的原理,设计合成了25个含N-吡啶联吡唑类二聚体衍生物,并测试了目标化合物对PRV病毒的抑制效果.初步生物活性测试数据显示,大多数化合物在10μmol/L浓度下表现出较强的抗PRV病毒活性,且对猪源肾上皮细胞(PK-15)具有无毒性或者低毒性.此类新型含N-吡啶联吡唑类二聚体衍生物可作为潜在抗PRV病毒的先导化合物进一步优化和开发. 展开更多
关键词 N-吡啶联吡唑 二聚体 抗猪伪狂犬病毒(prv)活性
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PRV感染PK-15细胞后相关炎性通路及炎症因子表达变化
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作者 张王芝 舒相华 +4 位作者 张莹 杨广佳 全伟 储宗秀 宋春莲 《现代畜牧兽医》 2024年第2期9-14,共6页
试验旨在了解猪伪狂犬病毒(PRV)感染宿主后炎症动态变化,以猪肾细胞为宿主,选用炎性通路中Toll样受体4(TLR4)、骨髓分化一级反应蛋白88(MyD88)、核因子kB(NF-kB)和炎症因子干扰素-α(IFN-α)、干扰素-β(IFN-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-... 试验旨在了解猪伪狂犬病毒(PRV)感染宿主后炎症动态变化,以猪肾细胞为宿主,选用炎性通路中Toll样受体4(TLR4)、骨髓分化一级反应蛋白88(MyD88)、核因子kB(NF-kB)和炎症因子干扰素-α(IFN-α)、干扰素-β(IFN-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)为研究指标。通过PRV感染PK-15细胞和BHK-21细胞,对比分析两者细胞感染量(TCID_(50))、细胞病变(CPE)和病毒载量;选取PRV较敏感细胞,设计炎性通路因子特异性引物,用实时荧光定量PCR检测不同时间点TLR4、MyD88和NF-kB表达量,ELISA测定IFN-α、IFN-β、TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子含量。结果显示,PK-15细胞、BHK-21细胞的TCID_(50)分别为10^(-8.98)/0.1 mL和10^(-8.58)/0.1 mL;在感染PRV第18 h均见典型CPE。PK-15细胞病毒载量较高,且18 h内PK-15的CPE程度与病毒载量呈正相关。与未感染的PK-15细胞相比,PRV感染PK-15细胞后TLR4、MyD88和NF-kB表达量均在感染后0~6 h时升高,感染后第12 h时极显著降低(P<0.01);除IFN-β外的炎症因子含量总体呈先下降后上升趋势。研究表明,PRV感染宿主过程中可引起TLR4-MyD88-NF-kB通路表达量升高,促进炎症因子变化抵抗病毒感染,TLR4-MyD88-NF-kB炎症通路在抗PRV感染过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 prv PK-15细胞 炎症通路 炎症因子 RT-QPCR
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基于在线拉曼和在线活细胞检测的PAT控制PRV疫苗智能生产工艺研究
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作者 王楠 闵瑞 +1 位作者 易小萍 张大鹤 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期53-67,共15页
减少乳酸和氨积累一直是动物细胞培养的一个目标,保持培养过程中较低浓度葡萄糖和谷氨酰胺的工艺控制法是最便捷和高效的优化策略。基于在线拉曼检测技术和比例-积分-微分(proportional-integral-derivative,PID)自动反馈控制技术,实现... 减少乳酸和氨积累一直是动物细胞培养的一个目标,保持培养过程中较低浓度葡萄糖和谷氨酰胺的工艺控制法是最便捷和高效的优化策略。基于在线拉曼检测技术和比例-积分-微分(proportional-integral-derivative,PID)自动反馈控制技术,实现了BHK-21细胞伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)疫苗生产过程中低葡萄糖浓度(0.5 g/L左右)和低谷氨酰胺浓度(1.5 mmol/L左右)控制,乳酸和氨积累量分别降低了26.0%和30.3%,病毒接毒时pH维持在6.75以上,并利用在线活细胞检测技术确定了最佳补料时间、最佳接毒时间及最佳收毒时间。经过补料操作后,细胞比生长速率最大值延迟了12 h,且细胞高活性状态维持了更长时间(24~48 h),在保持单细胞产毒能力的同时,有效提高了接毒时的细胞密度,最大病毒滴度达到高糖对照组的10倍及手动流加组的1.4倍。替代传统手动补料操作,成功建立了基于低葡萄糖和谷氨酰胺浓度以及在线拉曼和在线活细胞检测的BHK-21细胞反应器过程分析技术(PAT)控制的PRV疫苗智能生产工艺,为实现生物药物的智能制造奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 多元数据分析 低葡萄糖和谷氨酰胺浓度 过程分析技术 在线拉曼检测
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5种猪场常用消毒剂对PCV2和PRV的消毒效果评价 被引量:1
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作者 董林 谢金文 +4 位作者 刘吉山 曲光刚 王艳萍 魏凤 沈志强 《中国动物检疫》 CAS 2024年第6期107-114,共8页
为评价含碘类、季铵盐类、过硫酸氢钾类、二氧化氯类和戊二醛类5种猪场常用消毒剂的安全性及其对病毒的消毒效果,在实验室、模拟猪场舍条件下,分别采用病毒悬液法、细胞培养病变法,根据说明书推荐的稀释比例,选择高、中、低3个工作浓度,... 为评价含碘类、季铵盐类、过硫酸氢钾类、二氧化氯类和戊二醛类5种猪场常用消毒剂的安全性及其对病毒的消毒效果,在实验室、模拟猪场舍条件下,分别采用病毒悬液法、细胞培养病变法,根据说明书推荐的稀释比例,选择高、中、低3个工作浓度,与PCV2和PRV分别作用不同时间后接种细胞培养,观察细胞病变,通过TCID50计算病毒灭活率,荧光定量PCR检测病毒核酸含量。结果显示:含碘类和二氧化氯类消毒剂对细胞毒性较小,戊二醛类消毒剂对细胞的毒性相对较强。5类消毒剂对PCV2和PRV均有一定的杀灭效果,工作浓度越低,灭活时间越长;实验室条件下,含碘类、过硫酸氢钾类、二氧化氯类消毒剂显示出较强的消毒效果,在高、中工作浓度下10 min内即可100%灭活病毒,而猪场模拟条件下,含碘类消毒剂的实际消毒效果较差,季铵盐类消毒剂的核酸去除能力较弱。结果表明:所选用的5种常用消毒剂均可用于猪场消毒,可根据实际条件和需求选用;在保证安全的前提下,应尽量使用较高的工作浓度,且保证足够的消毒时间。本研究确定了5种常用消毒剂的病毒灭活效果与其工作浓度、消毒作用时间的关联性,为猪场消毒剂的选择与使用提供了参考。 展开更多
关键词 消毒剂 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒 消毒效果
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螺旋藻多糖对PRV感染小鼠脾脏氧化应激的调节作用 被引量:1
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作者 赵雯 宾秀娟 +4 位作者 童艳梅 施君 周博武 曹迷霞 胡庭俊 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第23期90-96,共7页
试验旨在探究螺旋藻多糖(PSP)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠脾脏氧化应激的调节作用。将120只BALB/c小鼠随机分5组,分别为高剂量螺旋藻多糖组分1(PSP-1,4 mg)组、中剂量PSP-1(2 mg)组、低剂量PSP-1(1 mg)组、PRV组和空白对照组。高、中... 试验旨在探究螺旋藻多糖(PSP)对猪伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠脾脏氧化应激的调节作用。将120只BALB/c小鼠随机分5组,分别为高剂量螺旋藻多糖组分1(PSP-1,4 mg)组、中剂量PSP-1(2 mg)组、低剂量PSP-1(1 mg)组、PRV组和空白对照组。高、中、低剂量PSP-1组及PRV组第1天经腹腔注射PRV溶液,空白对照组经腹腔注射灭菌生理盐水。随后1~6 d,高、中、低剂量PSP-1组分别灌胃相应剂量PSP-1,PRV组和空白对照组灌胃灭菌生理盐水,第7天剖杀。采用试剂盒法测定小鼠脾脏丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)酶活性;通过H.E.染色观察小鼠脾脏病理变化;通过免疫组化检测小鼠脾脏中血红素加氧酶-1(HO-1)、iNOS表达。结果显示,与PRV组相比,高剂量PSP-1组小鼠脾脏中MDA、NO含量及iNOS活性极显著降低(P<0.05),SOD活性极显著升高(P<0.05);H.E.染色结果显示,高、中、低剂量PSP-1处理后,小鼠脾脏病理变化有不同程度减轻;免疫组化结果显示,高、中、低剂量PSP-1处理PRV感染小鼠后,脾脏中HO-1的表达有不同程度的升高,iNOS的表达有不同程度的降低。说明PSP-1能够减轻PRV感染小鼠脾脏的损伤,缓解PRV感染小鼠引起的氧化应激。 展开更多
关键词 螺旋藻多糖 猪伪狂犬病毒 氧化应激 脾脏 免疫组化
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PRRSV、CSFV、PRV和PCV2四重实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:4
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作者 李欣 杨莉 +4 位作者 刘光亮 王文秀 刘海隆 曹宗喜 张艳 《动物医学进展》 北大核心 2024年第6期7-14,共8页
为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的四重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,针对PRRSV的ORF2基因、CSFV的5′UTR基因、PRV的gB基因、PCV2的ORF2基因设计了引物及Taq Ma... 为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的四重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,针对PRRSV的ORF2基因、CSFV的5′UTR基因、PRV的gB基因、PCV2的ORF2基因设计了引物及Taq Man探针,并进行反应体系优化,敏感性、特异性验证,建立了同时检测上述4种病原的四重实时荧光定量PCR。结果显示,所建立的四重荧光PCR扩增效率(E)、相关系数(R^(2))及曲线斜率均在正常范围内,检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2 E值、R^(2)、斜率分别为92.9%、0.998、-3.504,90.7%、0.998、-3.566,94.3%、0.996、-3.466,94.2%、0.997及-3.470。PRRSV、CSFV、PRV、PCV2重组质粒最低检出限分别达到10^(2)、10^(2)、10^(2)、10^(3) copies/μL;四重qPCR反应体系中的多条引物间不发生交叉反应,经评价该方法特异性良好;批内和批间重复性试验结果显示,变异系数(CV)均在1%以下,具有良好的重复性。分别使用该方法和相应的国标荧光定量检测法对采集的298份临床样品进行检测对比,两种方法检测PRRSV、CSFV、PRV、PCV2阳性符合率分别为96.08%、96.38%、100%、94.95%,均在94%以上。结果表明,建立的检测方法方便、灵敏、高效、特异性强,适用于猪呼吸道疾病病原学、流行病学研究以及临床病例的诊断,并为猪呼吸道疾病的预防和控制提供技术支撑。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 四重实时荧光定量PCR
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利用CRISPR/Cas9系统快速构建携带EGFP的PRV-ΔTK重组变异株
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作者 叶再娇 曾川 +8 位作者 顾俊 王培霞 沈金燕 宋德平 黄冬艳 邬向东 何后军 唐玉新 叶昱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1223-1228,共6页
伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)能够引起猪只出现以呼吸困难、繁殖障碍和神经系统疾病等为特征的伪狂犬病,在世界范围内传播广泛。2011年以来,新现的PRV变异株导致传统疫苗株的免疫保护效果不佳,且原有的疫苗株制备方法耗时耗力... 伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)能够引起猪只出现以呼吸困难、繁殖障碍和神经系统疾病等为特征的伪狂犬病,在世界范围内传播广泛。2011年以来,新现的PRV变异株导致传统疫苗株的免疫保护效果不佳,且原有的疫苗株制备方法耗时耗力,因此现阶段急需开发一种高效疫苗株筛选的方法。采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,设计2条靶向PRV毒力基因TK的单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA),敲除PRV变异株CH/JX/2016编码的TK基因,再利用同源修复质粒在TK基因座位置插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP),经多轮蚀斑纯化获得rPRV-ΔTK/EGFP毒株。结果表明本研究构建的sgRNA切割效率高,只经过3轮纯化就可完成rPRV-ΔTK/EGFP毒株的制备,且EGFP基因正常表达。CRISPR/Cas9系统能够简便快速高效地编辑PRV基因,在疫苗候选株创制中潜力巨大,而且拯救的rPRV-ΔTK/EGFP毒株不仅可以作为研究PRV变异株感染进程的示踪毒株,还能用于后续抗病毒药物的筛选。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 CRISPR/Cas9 增强绿色荧光蛋白 重组 蚀斑纯化
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Bartha-K61疫苗对PRV变异株免疫效果的Meta分析 被引量:4
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作者 徐玉 王彬 +8 位作者 曾智勇 梁海英 汤德元 何信群 徐松平 黄二素 万娟 张婧旭 祝羊 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第11期80-85,共6页
为了给预防与控制伪狂犬病(PR)提供科学参考,本试验采用Meta分析的方法对已发表的Bartha-K61疫苗对伪狂犬病病毒(PRV)变异株免疫效果进行评估。首先通过计算机建立检索式检索中国知网、万方、维普和PubMed数据库,收集对照试验;然后采用R... 为了给预防与控制伪狂犬病(PR)提供科学参考,本试验采用Meta分析的方法对已发表的Bartha-K61疫苗对伪狂犬病病毒(PRV)变异株免疫效果进行评估。首先通过计算机建立检索式检索中国知网、万方、维普和PubMed数据库,收集对照试验;然后采用RevMan 5.4.1软件以攻毒保护率为结局指标进行Meta分析;共纳入15篇文献,190头仔猪,试验组105头,对照组85头,试验组均采用接种Bartha-K61疫苗+攻毒PRV变异株的干预方式,对照组有3种干预方式,分别为接种Bartha-K61疫苗+攻毒PRV经典株、不接种PRV疫苗+攻毒PRV变异株、接种其他PRV疫苗+攻毒PRV变异株,其中只有不接种PRV疫苗+攻毒PRV变异株对照组的数据有统计学意义。结果显示:各研究间同质(P=0.91>0.1,I~2=0<50%),研究结果稳定性较好,Bartha-K61疫苗对PRV变异株的攻击可以提供免疫保护(合并OR=22.77,95%CI=9.91~52.28)。综合分析15篇单个试验研究的结果表明,经典疫苗Bartha-K61对PRV变异株的免疫保护达到80%以上,且高滴度的疫苗效果更好,但比起其对经典株的保护效果略差;而且,以PRV变异株为亲本研制的疫苗对亲本毒株的攻毒保护效果优于Bartha-K61疫苗。 展开更多
关键词 Bartha-K61疫苗 prv变异株 prv经典株 META分析 免疫效果
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应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测Ⅱ.JEV、PPV、PRRSV、PRV单项PCR检测方法的建立 被引量:15
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作者 孙明 李红卫 +5 位作者 高显明 涂长春 何旭玉 白晓鸿 金宁一 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期10-13,共4页
在利用计算机设计出检测流行性乙型脑炎病毒 ( JEV)、猪细小病毒 ( PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)、猪伪狂犬病病毒 ( PRV)的多联 PCR引物的基础上 ,分别进行各单项 PCR检测相应病毒试验 ,确定了各单项 PCR反应条件范围 ,并对各... 在利用计算机设计出检测流行性乙型脑炎病毒 ( JEV)、猪细小病毒 ( PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)、猪伪狂犬病病毒 ( PRV)的多联 PCR引物的基础上 ,分别进行各单项 PCR检测相应病毒试验 ,确定了各单项 PCR反应条件范围 ,并对各 PCR扩增产物进行了点杂交和部分测序鉴定。用单项 PCR对感染猪相关病毒的检测证实 ,本试验已经建立了有效、特异、敏感的检测 JEV、PPV、PRRSV、PRV的单项 PCR技术 ,为进一步建立多联 展开更多
关键词 JEV PPV PRRSV prv PCR 繁殖障碍 病毒 检测方法
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PRVLA株gD基因的序列测定及其重复高变区的发现 被引量:10
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作者 范伟兴 魏荣 +2 位作者 张雪莲 陈溥言 赵宏坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期350-352,共3页
对猪伪狂犬病病毒鲁 A株 (PRV L A株 ) g D基因进行了克隆和序列测定 ,结果表明 :在测序的 14 5 3bp的 DNA序列中包括着 1个 12 0 3bp的 ORF(即 g D基因 ) ,它编码 4 0 0个氨基酸组成的多肽 ;在整个 g D基因的 ORF内 PRVL A株与 PRV Ea... 对猪伪狂犬病病毒鲁 A株 (PRV L A株 ) g D基因进行了克隆和序列测定 ,结果表明 :在测序的 14 5 3bp的 DNA序列中包括着 1个 12 0 3bp的 ORF(即 g D基因 ) ,它编码 4 0 0个氨基酸组成的多肽 ;在整个 g D基因的 ORF内 PRVL A株与 PRV Ea株、Hubei株、Rice株、NIA- 3株、Kaplan株的 g D基因比较 ,核苷酸的同源性分别为 98.3%、98.3%、98.0 %、98.1%、98.6 % ,氨基酸的同源性分别为 97.8%、97.8%、97.5 %、98.1%、98.6 % ;发现 PRV L A株 g D基因与Ea株、Hubei株、Rice株、NIA- 3株、Kaplan株的 g D基因均在 80 2~ 837nt处有 1个 C(A) GGCCC的重复高变区 ,其对应的是 g D2 6 7~ 2 79位氨基酸残基 Arg- Pro的重复高变区。正是该重复高变区的碱基缺失或插入使得 PRV g D的ORF在 1194~ 12 15 nt间变化 ,g D前体的氨基酸残基为 398~ 4 0 4个。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 prv LA株 GD基因 序列测定 重复高变区 伪狂犬病 同源性
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PCV2、PRV和PRRSV多重PCR方法的建立及其应用 被引量:14
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作者 耿庆华 彭永刚 +1 位作者 张波 裴程程 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1393-1397,共5页
根据GenBank登录的猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gE基因、PRRSV的N基因的目的片段,通过优化反应中各个影响因素,建立了PRV、PCV... 根据GenBank登录的猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gE基因、PRRSV的N基因的目的片段,通过优化反应中各个影响因素,建立了PRV、PCV2、PRRSV的多重PCR(mPCR)检测方法。敏感性和特异性的结果表明,该方法对这3种病毒的最低核酸检出量分别为32.5(PRV)、25.2(PCV2)、35.9pg(PRRSV)。该方法对猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、大肠杆菌、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(TGE)等病毒的检测结果均为阴性。200份临床样品的多重PCR结果表明,PCV2感染率为80%(160/200),PRV感染率为21%(42/200),PRRSV的感染率为78%(156/200)。200份临床样品主要为PCV2和PRRSV混合感染,阳性率达56.0%(112/200)。该方法的建立对这3种病毒病的早期快速检测和指导临床实践具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 prv PCV2 PRRSV 多重PCR
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多重PCR/RT-PCR技术检测PRRSV、PPV、PRV和PCV-2 被引量:15
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作者 王娟萍 姚敬明 +6 位作者 高英杰 金扩世 丁馥香 周胜花 曹日亮 贺东昌 雷宇平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期258-262,共5页
根椐GenBank中已发表的猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等4种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PRRSV M和N、PPV VP2、PRVgD、PCV-2ORF2基因的保守区为各病毒的诊断靶序列... 根椐GenBank中已发表的猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等4种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PRRSV M和N、PPV VP2、PRVgD、PCV-2ORF2基因的保守区为各病毒的诊断靶序列。在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了4种病毒的四重PCR技术,可同时扩增PRRSV的660 bp(北美株),PPV的313 bp,PRV的217 bp,PCV-2的447 bp的特异性片段。用82份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR/RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为93%以上。表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这4种病毒的同时检测和鉴别诊断。 展开更多
关键词 多重PCR PRRSV PPV prv PCV2
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伪狂犬病毒(PRV)GZ-JS2017株的分离鉴定及主要毒力基因分子特征分析 被引量:6
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作者 徐国 梁海英 +7 位作者 曾智勇 汤德元 王彬 黄涛 叶百川 张爱琼 何小莉 咸文 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期209-216,共8页
为查明贵州省合肥地区某规模化养殖场猪只发生急性死亡的病因,以及明确病原主要毒力基因的分子特征。本试验采用PCR技术、细胞接种试验、动物试验及透射电子显微镜观察等方法进行病原的分离鉴定,并对该病原的主要毒力基因进行克隆、测... 为查明贵州省合肥地区某规模化养殖场猪只发生急性死亡的病因,以及明确病原主要毒力基因的分子特征。本试验采用PCR技术、细胞接种试验、动物试验及透射电子显微镜观察等方法进行病原的分离鉴定,并对该病原的主要毒力基因进行克隆、测序及生物信息学分析。结果显示:PCR检测可扩增出PRV特异性核酸阳性条带,接种Vero细胞后可见明显CPE现象,在透射电子显微镜下可见囊泡中呈圆形、160nm左右的成熟病毒粒子,胞核中可见病毒包涵体和实心、空心2种无囊膜病毒粒子;接种健康猪可引起神经症状,最后麻痹死亡;通过生物信息学分析显示该毒株的gE、gC、gD及TK基因序列均与参考毒株中湖北HNX株和河南HN1201株相对应的核苷酸同源性最高,且在gE基因的48位和496位都有1个天冬氨酸(Asp)的插入;根据gE、gC、gD及TK基因序列的遗传进化树结果显示本次分离毒株与2011年以后所分离鉴定的变异毒株属同一分支。说明本试验成功分离鉴定一株猪伪狂犬病病毒变异毒株,以期为贵州省猪伪狂犬病病毒的流行及变异提供一些参考。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(prv) 分离鉴定 gE、gC、gD及TK基因 分子特征
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PRV基因缺失株在体外细胞中增殖的超微结构 被引量:5
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作者 徐志文 郭万柱 +3 位作者 朱玲 徐凯 王印 王小玉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1008-1012,共5页
用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Fa株和本实验室构建的系列PRV基因缺失株(PRV-TK-、PRV-gI\gE-、PRV-TK\gI\gE-株)感染不同的细胞系(IBRS-2、Marc145、ST、Vero、MDBK细胞),对感染细胞的形态学观察发现,受试各PRV毒株在以上细... 用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Fa株和本实验室构建的系列PRV基因缺失株(PRV-TK-、PRV-gI\gE-、PRV-TK\gI\gE-株)感染不同的细胞系(IBRS-2、Marc145、ST、Vero、MDBK细胞),对感染细胞的形态学观察发现,受试各PRV毒株在以上细胞均能增殖并引起细胞病变,但对不同的细胞却表现差异,其中在ST细胞上增殖滴度最低,在MDBK上最高;同PRV Fa株相比,PRV-gI\gE-和PRV-TK\gI\gE-株的增殖力有所降低,而PRV-TK-则变化不明显;对细胞感染后的超微结构分析发现,基因缺失对该毒株在细胞上的吸附和穿入过程没有影响,但与Fa株相比,主要表现为增殖速度的减缓和病毒粒子数量的减少。 展开更多
关键词 prv基因缺失疫苗 细胞感染 形态学 超微结构
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表达猪细小病毒VP2蛋白的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株的生物学特性 被引量:8
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作者 付朋飞 乔涵 +3 位作者 张宇 杨兴武 徐朋丽 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期11-17,共7页
探索重组PPV VP2基因的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株作为弱毒疫苗候选株的潜在价值,对其在多种细胞上的增殖特性、病毒滴度、最适培养细胞中的遗传稳定性、一步生长曲线、转录和翻译水平等生物学特性进行研究,并初步探索对小鼠安全性。结... 探索重组PPV VP2基因的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株作为弱毒疫苗候选株的潜在价值,对其在多种细胞上的增殖特性、病毒滴度、最适培养细胞中的遗传稳定性、一步生长曲线、转录和翻译水平等生物学特性进行研究,并初步探索对小鼠安全性。结果显示:重组病毒rPRV-VP2株在VERO、ST、PK-15和IPEC细胞上的TCID50分别为104.375/0.1mL、106.5/0.1mL、103.75/0.1mL、105.625/0.1mL。重组毒与亲本毒PRV HB-98株在ST细胞中的毒力(106.125 TCID50/0.1mL)和细胞病变相当,重组病毒保持了PRV病毒的通性。连续传毒20代后的绿色荧光观察、RTPCR、Western blot试验结果均表明重组病毒中的VP2基因得到了有效表达,且遗传稳定性良好。安全性试验结果显示:重组毒对小鼠安全。本试验为后期对PPV VP2基因重组猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的开发利用奠定了基础。 展开更多
关键词 重组 猪细小病毒 VP2基因 prv 生物学特性
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