PRSV-CP正义、反义RNA植物表达载体的构建 被引量：2

1

作者 蔡群芳 魏军亚 周鹏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第3期222-226,共5页

利用基因工程方法构建了RNA介导的正义、反义植物表达载体,并通过电激法导入农杆菌中.经PCR和酶切鉴定证实,成功构建了PRSV-CP正义、反义RNA植物表达载体及其相应的农杆菌工程菌株.这为后续转基因研究及番木瓜抗PRSV分子育种奠定了基础.

关键词 prsv-cp 正义RNA 反义RNA 农杆菌工程菌株

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禾生素、病毒必克和病毒A对番木瓜体内PRSV-CP基因表达的抑制作用 被引量：2

2

作者 张荣萍 李慧林 +1 位作者 陈萍 李和平 《热带农业工程》 2010年第6期43-47,共5页

为了解禾生素、病毒必克和病毒A对番木瓜植株体内PRSV基因表达的影响,以组织培养的日升番木瓜为研究对象,以β-actin基因为内参基因,应用RT-PCR技术对番木瓜体内的PRSV-CP基因进行半定量分析,建立一个特异、稳定的RT-PCR半定量检测体系... 为了解禾生素、病毒必克和病毒A对番木瓜植株体内PRSV基因表达的影响,以组织培养的日升番木瓜为研究对象,以β-actin基因为内参基因,应用RT-PCR技术对番木瓜体内的PRSV-CP基因进行半定量分析,建立一个特异、稳定的RT-PCR半定量检测体系,研究了禾生素、病毒必克和病毒A处理对番木瓜体内PRSV基因表达量的影响。初步说明,0.2%的禾生素及4.0g/L和1.0g/L的病毒必克显著抑制了番木瓜体内PRSV-CP基因的表达,而病毒A及其它浓度的禾生素和病毒必克对番木瓜体内的PRSV-CP基因的增殖没有抑制作用。 展开更多

关键词 番木瓜 prsv-cp基因 禾生素 病毒必克 病毒A RT-PCR

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PRSV-CP转基因番木瓜表达与抗病能力关系的研究 被引量：15

3

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1996年第2期77-83,共7页

利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ... 利用ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ（点杂交）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ（分子杂交）等技术，分析了ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜转录水平（ｍＲＮＡ）的表达，再通过ＲＮＡ斑点杂交和间接斑点ＥＬＩＳＡ等技术估测了ＲＮＡ、蛋白质在ＰＲＳＶ－ＣＰ转基因番木瓜中的表达量，最后通过大田攻毒试验检测了ＲＮＡ、蛋白质的表达量与抗病能力的关系。 展开更多

关键词 番木瓜 转基因番木瓜 杂交 抗病性

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海南PRSV-CP与rhIFNα-2b双价载体构建新策略 被引量：3

4

作者 周鹏 郭安平 黎小瑛 《热带作物学报》 CSCD 2003年第3期58-62,共5页

为了获得抗病毒能力较强的海南番木瓜转基因新品系,采用海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋白(PapayaRing Spot Virus-Capsid Protein of Hainan,HPRSV-CP)和重组人源干扰素α-2b(recombinant human interferon-α 2b,rhIFNα-2b)为目的基因... 为了获得抗病毒能力较强的海南番木瓜转基因新品系,采用海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋白(PapayaRing Spot Virus-Capsid Protein of Hainan,HPRSV-CP)和重组人源干扰素α-2b(recombinant human interferon-α 2b,rhIFNα-2b)为目的基因,利用pBI121、pCAMBIA2300载体及相关技术(如技术基因内部位点突变套叠PCR),实施双价基因表达载体的构建策略。本研究成果可为其他多价基因表达载体的构建提供技术依据。 展开更多

关键词 海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋 重组人源干扰素α-2b 双价基因表达载体 转基因 抗病性

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应用酵母双杂交系统检测NIa-vpg与PRSV-CP蛋白间互作 被引量：2

5

作者 王明钦 沈文涛 +1 位作者 何尧声 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2008年第4期450-454,共5页

将NIa-vpg与GAL4-BD蛋白融合作为DNA结合域蛋白,将PRSV-CP与GAL4-AD蛋白融合作为激活域蛋白,排除自身激活作用后,共转化酵母菌,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用。结果表明NIa-vpg与PRSV-CP... 将NIa-vpg与GAL4-BD蛋白融合作为DNA结合域蛋白,将PRSV-CP与GAL4-AD蛋白融合作为激活域蛋白,排除自身激活作用后,共转化酵母菌,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用。结果表明NIa-vpg与PRSV-CP在酵母中存在相互作用,PRSV病毒运动蛋白自身的相互作用在植株感染和致病过程中可能起着重要作用。 展开更多

关键词 酵母双杂交 互作 NIa—vpg 木瓜环斑病毒外壳蛋白

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木瓜环斑病毒外壳蛋白与核酸酶嵌合基因转化番木瓜胚状体的研究 被引量：4

6

作者 周鹏 郑学勤 陈向民 《热带作物学报》 CSCD 1995年第S1期31-35,共5页

以农杆菌ＬＢＡ４４０４介导木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ－ＣＰ）与核酸酶（Ｎｕｃｌｃａｓｅ）嵌合基因，通过振动共培养法转化番木瓜子叶型胚状体，在选择培养基上筛选诱导再生转基因植株。ＮＰＴⅡ分析和ＳＯｕｔｈｅｒｎｂｌｏ... 以农杆菌ＬＢＡ４４０４介导木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ－ＣＰ）与核酸酶（Ｎｕｃｌｃａｓｅ）嵌合基因，通过振动共培养法转化番木瓜子叶型胚状体，在选择培养基上筛选诱导再生转基因植株。ＮＰＴⅡ分析和ＳＯｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔＤＮＡ分子杂交结果表明，ＰＲＳＶ－Ｃｐ－Ｎｕｃｌｅａｓｃ嵌合基因已整合到番木瓜核基因组中。 展开更多

关键词 prsv-cp-Nuclcasc嵌合基因 子叶型胚状体 振动共培养 检测 转基因植株

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根癌农杆菌介导的环斑病毒外壳蛋白基因转化番木瓜的研究 被引量：17

7

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1993年第2期71-77,共7页

利用杂种一代番术瓜(cariea papaya L.)实生苗的下胚轴及无菌苗的茎段、叶片等外植体与根癌农杆菌共培养的方法(即改良的叶盘法),将PBIU1质粒上的新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)和环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV—CP)导入番木瓜细胞的核基因... 利用杂种一代番术瓜(cariea papaya L.)实生苗的下胚轴及无菌苗的茎段、叶片等外植体与根癌农杆菌共培养的方法(即改良的叶盘法),将PBIU1质粒上的新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)和环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV—CP)导入番木瓜细胞的核基因组中。经共培养的外植体在含有卡那霉素(kan,100μg/ml)的选择培养基上产生抗性的愈伤组织,并通过体胚发生途径再生植株。NPTⅡ分析证明,NPTⅡ基因已在再生植株中稳定地表达。Southern blot分子杂交证明,PRSV—CP基因已整合到番木瓜的核基因组中。本研究已获得转PRSV—CP基因植株,并且在苗床移栽成活。 展开更多

关键词 番木瓜 根癌农杆菌 环斑病毒

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花粉管通道技术转化番木瓜的初步研究 被引量：3

8

作者 蔡群芳 魏军亚 周鹏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第1期16-19,共4页

以番木瓜"solo Ⅱ"号植株为受体材料,用花粉管通道法进行了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)278bp片段的遗传转化.采用质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液,分别处理花187和232朵,收获成熟番木瓜105和30个,座果率分别为56.15%... 以番木瓜"solo Ⅱ"号植株为受体材料,用花粉管通道法进行了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)278bp片段的遗传转化.采用质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液,分别处理花187和232朵,收获成熟番木瓜105和30个,座果率分别为56.15%和12.93%,随机选择每种载体的种子100粒播种,成株率分别为61%和60%.对T1幼苗(除含空载体外)全部进行PCR检测.检测结果为质粒DNA和农杆菌菌液两种导入液转化所得的幼苗阳性率分别为50.54%和51.22%. 展开更多

关键词 番木瓜 花粉管通道法 PRSV—CP基因 PCR检测

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番木瓜环斑病毒CP基因同源区段的克隆及植物表达载体的构建 被引量：2

9

作者 魏军亚 刘德兵 +2 位作者 蔡群芳 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2007年第2期54-59,共6页

采用RT-PCR技术对番木瓜环斑病毒CP基因的同源区段进行了克隆和鉴定分析。序列分析结果表明,获得PRSV-CP基因3′端的278bp DNA片段同源率最高。构建了目的基因包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p... 采用RT-PCR技术对番木瓜环斑病毒CP基因的同源区段进行了克隆和鉴定分析。序列分析结果表明,获得PRSV-CP基因3′端的278bp DNA片段同源率最高。构建了目的基因包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,并通过电激法导入农杆菌中。经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入获得了农杆菌工程菌株。利用该植物表达载体对番木瓜的遗传转化工作目前正在进行中。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因 同源区段 RNA介导植物表达载体 农杆菌工程菌株

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PRSV—外壳蛋白基因在转基因番木瓜中的表达 被引量：3

10

作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1995年第S1期36-39,共4页

用酶联免疫吸附试验（ＥｎｚｙｍｅｌｔｉｎｋｃｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｒｎｔＡｓｓａｙ　ＥＬＩＳＡ）和蛋白质免疫印迹技术（ｗｅｓｔｅｒｍｂｌｏｔ）．对番木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ－ＣＰ）基因转基因植株进行表达蛋白的检... 用酶联免疫吸附试验（ＥｎｚｙｍｅｌｔｉｎｋｃｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｒｎｔＡｓｓａｙ　ＥＬＩＳＡ）和蛋白质免疫印迹技术（ｗｅｓｔｅｒｍｂｌｏｔ）．对番木瓜环斑病毒外壳蛋白（ＰＲＳＶ－ＣＰ）基因转基因植株进行表达蛋白的检测。ＥＬＩＳＡ的结果表明，外壳蛋白基因已在转基因番木瓜中表达；ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明，外壳蛋白基因在转基因植株中的表达产物具有与天然蛋白同样的大小及相同的血清学反应。 展开更多

关键词 转基因番木瓜 环斑病毒外壳蛋白 酶联免疫吸附试验 蛋白质免疫印迹

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番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建 被引量：2

11

作者 陈瑶 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带生物学报》 2011年第2期113-116,共4页

重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原... 重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原核表达载体上,构建成PRSV-CP基因dsRNA原核表达载体。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因 DSRNA RNA沉默 OZ-LIC法 原核表达载体

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