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体外靶向筛选小鼠精子特异性PRSS37基因最适siRNA
1
作者 高斯 赵萍 +3 位作者 刘晓雅 方桂杰 任红艳 毕延震 《生物技术》 2025年第1期20-24,共5页
[目的]细胞水平靶向筛选出小鼠精子特异性PRSS37基因的最适siRNA序列。[方法]构建PRSS37过表达载体pcDNA3.1-Kozak-3×Flag-PRSS37,并将其转染至GC-2细胞,通过Western Blot检测PRSS37的异位表达。基于PRSS37序列设计并合成3对siRNA... [目的]细胞水平靶向筛选出小鼠精子特异性PRSS37基因的最适siRNA序列。[方法]构建PRSS37过表达载体pcDNA3.1-Kozak-3×Flag-PRSS37,并将其转染至GC-2细胞,通过Western Blot检测PRSS37的异位表达。基于PRSS37序列设计并合成3对siRNA序列,将PRSS37过表达载体和siRNA共转染于GC-2细胞,实时荧光定量PCR检测siRNA对PRSS37干扰效率,筛选最有效的siRNA。[结果]PRSS37过表达载体在GC-2细胞中成功表达,与对照组相比,实验组中PRSS37蛋白表达显著升高;设计合成的3对siRNA均能有效干扰PRSS37的表达,与未干扰组相比差异显著(P<0.05),其中siRNA-1干扰效率最高,干扰效率约为63%。[结论]成功实现了PRSS37在GC-2细胞中的异位表达,并在细胞水平筛选出小鼠PRSS37最适siRNA序列。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶37 表达载体 异位表达 SIRNA 共转染 干扰效率
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Prss37基因转录起始位点的确定及其转录调控的初步探讨 被引量：2
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作者 王津津 匡昉哲 +2 位作者 庄华 陆翠杰 匡颖 《实验动物与比较医学》 CAS 2016年第2期93-100,共8页
目的确定P坶537基因的转录起始位点，并利用转基因技术在整体水平验证该启动子的组织特异性。方法运用cDNA5’末端快速扩增法（5’RACE）对C57BL／6J小鼠睾丸mRNA进行分析，确定P坶s37的转录起始位点；构建P船s37内源启动子区域转录起... 目的确定P坶537基因的转录起始位点，并利用转基因技术在整体水平验证该启动子的组织特异性。方法运用cDNA5’末端快速扩增法（5’RACE）对C57BL／6J小鼠睾丸mRNA进行分析，确定P坶s37的转录起始位点；构建P船s37内源启动子区域转录起始位点上游不同长度DNA片段（1kb、2kb、4kb）驱动的荧光素酶基因表达的质粒；通过受精卵雄原核显微注射技术获得上述三种启动子驱动荧光素酶基因表达的转基因小鼠；利用活体成像技术观察荧光素酶基因的表达，明确启动子的组织特异性。结果Prss37基因的转录起始位点位于NCBIGeneBankTM（NM_026317．2）报道序列上游的40bp处；成功获得三种转基因小鼠，其中1kb启动子驱动的转基因小鼠检测到荧光素酶基因的表达，且在脑、睾丸和附睾组织中的表达较强。结论明确P瑙妇7的转录起始位点，成功获得了睾丸和附睾表达荧光素酶基因的转基因小鼠，为进一步的Prss37基因转录调控研究奠定了基础。 展开更多
关键词 prss37基因 转录 转基因小鼠 荧光素酶基因
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