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2019年~2023年我国PRRSV ORF5基因遗传变异和密码子使用偏好性分析
1
作者 翁成桢 李鸿喜 +6 位作者 黄欣欣 章蓓雯 唐歆 曹翀 唐静晖 李晓冰 陈洪博 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期221-230,共10页
为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况、遗传演化特征和密码子使用偏好性等,本研究从GenBank中下载2019年~2023年我国1194条PRRSV ORF5基因,采用MEGA6.0中的NJ法对上述ORF5基因和国内外26条PRRSV参考株ORF5基因构建进化... 为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况、遗传演化特征和密码子使用偏好性等,本研究从GenBank中下载2019年~2023年我国1194条PRRSV ORF5基因,采用MEGA6.0中的NJ法对上述ORF5基因和国内外26条PRRSV参考株ORF5基因构建进化树鉴定PRRSV的基因型。通过MEGA6.0中K2P模型计算相同及不同基因型PRRSV ORF5(后仅称为ORF5基因)基因核苷酸和氨基酸序列的遗传距离。采用DnaSP v5软件分析不同基因型ORF5基因的平均差异位点数、核苷酸多态性、交换频率和基因间遗传变异等分析ORF5基因的迁移。采用RDP4和SimPlot分析不同基因型ORF5基因的重组事件。采用CodonW分析不同基因型ORF5基因编码区的碱基组成,评估该基因编码区密码子使用的偏好性及影响因素。基因型鉴定结果显示,2019年~2023年我国谱系L1 PRRSV占比最高为70.4%,谱系L5最少为3.3%,基因Ⅰ型中的1亚型为2.3%。遗传距离计算结果显示,我国流行的基因Ⅱ型谱系L1、L3内ORF5基因核苷酸和氨基酸序列的遗传距离均大于其他谱系与基因Ⅰ型,且不同基因型ORF5基因核苷酸和氨基酸序列的遗传距离均大于相同基因型。迁移分析结果显示,不同基因型间ORF5基因的遗传分化程度大,但交换及传递频率较低,其中谱系L1、L3 ORF5基因比其他谱系的遗传多样性更广泛,更易发生变异。重组分析结果显示,共检测到7个发生重组的ORF5基因,且均为谱系L1、L3和L8之间的重组。密码子使用偏好性结果显示,同义密码子第3位碱基A3s含量在不同基因型ORF5基因间均最低,C3s含量在不同基因型ORF5基因间均最高。谱系L5和L8 ORF5基因的GC含量均高于50%,谱系L1、L3和1亚型ORF5基因的GC含量均低于50%,相对同义密码子使用度RSCU分析结果显示,不同基因型ORF5基因高表达密码子第3位以G/C为主,低表达密码子第3位以A/U为主;密码子偏好性的影响因素分析结果显示,不同基因型ORF5基因编码区的有效密码子数ENC在58~61(ENC>40),且均在ENC曲线上。上述结果表明,表明不同基因型ORF5基因间同义密码子第3位碱基偏好于C,很少偏好于A,且ORF5基因密码子偏好于GC,其密码子偏好性仅受突变压力影响,且使用偏好性较低。本研究为我国的PRRSV的流行病学调查和PRRS的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5 基因重组 遗传多样性 密码子
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基于PRRSV ORF5基因TaqMan qPCR检测方法的建立及遗传变异分析 被引量：6
2
作者 张帅 赵云环 +5 位作者 刘莹 翟刚 郭禹 刘涛 左玉柱 范京惠 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1122-1130,共9页
为了快速、高效、准确地检出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进一步了解河北部分地区的流行毒株遗传变异情况,本研究根据PRRSV经典、高致病性和NADC30代表毒株ORF5基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种通用型TaqMan qPCR检测... 为了快速、高效、准确地检出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进一步了解河北部分地区的流行毒株遗传变异情况,本研究根据PRRSV经典、高致病性和NADC30代表毒株ORF5基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种通用型TaqMan qPCR检测方法以实现对猪场的全面筛查,并对筛查出的阳性样品ORF5基因扩增测序后进行遗传进化分析。结果显示:该方法与PRV、PCV2、PEDV、CSFV、TGEV、RV均无交叉反应,特异性强;对重组质粒pMD19T-PRRSV标准品的最低检测下限为2.19×10^(1)拷贝/μL,敏感性高;组内和组间变异系数均小于1%,重复性好;在临床样品检测中较普通PCR有更高的检出率;扩增出的5株PRRSV流行毒株均为美洲型毒株,5株PRRSV流行毒株之间核苷酸序列同源性为82.9%~99.8%,氨基酸序列同源性为82.1%~99.0%;氨基酸序列与国内外已报道的代表株相比在GP5抗原表位及高变区分别存在着不同的差异。结果表明:河北部分地区当前流行毒株复杂多样,优势毒株正从高致病性毒株逐步向NADC30类毒株过渡,提示持续监测PRRSV流行毒株变异动态的必要性,为PRRSV的防控、临床诊断及掌握遗传变异规律提供依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 TaqMan qPCR 遗传变异分析
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稳定表达PRRSV ORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌的构建及其生物学特性 被引量：2
3
作者 杨亚东 张俊峰 +8 位作者 张春杰 陈松彪 程相朝 廖成水 刘莎莎 王二鑫 张晓洁 尚珂 汪洋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期47-53,共7页
为构建能稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌,以p MD19-T-ORF5-7为模板,PCR分别扩增出ORF5和ORF6,将2个基因先后插入表达载体PYA3493,构建了重组质粒PYA3493-ORF5-ORF6。PCR、双酶切及测序... 为构建能稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌,以p MD19-T-ORF5-7为模板,PCR分别扩增出ORF5和ORF6,将2个基因先后插入表达载体PYA3493,构建了重组质粒PYA3493-ORF5-ORF6。PCR、双酶切及测序结果表明,成功构建了重组质粒p YA3493-ORF5-ORF6。将该重组质粒电转至减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1基因缺失株,获得PRRSVORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6),并对该重组减毒猪霍乱沙门菌的生长特性、遗传稳定性和表达特性进行了测定。进一步对重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6)研究发现,其生长速度比强毒株C78-1明显减慢,与ΔcrpΔcyaΔasd C78-1缺失株及ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)互补菌株基本一致。在体外连续传代能够稳定遗传ORF5-ORF6融合基因。重组菌培养上清经SDS-PAGE能检测到ORF5-ORF6蛋白条带,且经Western-blot分析证实,重组菌共表达的GP5和M蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合。以上结果表明,能稳定携带ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6)构建成功,为开发猪繁殖与呼吸综合征和仔猪副伤寒基因工程二联疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 prrsv orf5-ORF6 减毒猪霍乱沙门菌 二联疫苗 生物学特性
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多重RT-PCR检测PRRSV和CSFV及PRRSV ORF5基因遗传变异分析 被引量：4
4
作者 张金强 吴家强 +7 位作者 孟斌 郭文龙 王希辉 李坤 于江 刘少宁 张玉玉 王金宝 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期633-637,共5页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪瘟病毒（CSFV）的基因组序列设计了2对特异性引物,建立了同时检测PRRSV和CSFV的多重RT-PCR方法。2008年1月至2009年12月期间,采集山东各地71个不同规模猪场及农村散养户212份病料,采用建立的多... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪瘟病毒（CSFV）的基因组序列设计了2对特异性引物,建立了同时检测PRRSV和CSFV的多重RT-PCR方法。2008年1月至2009年12月期间,采集山东各地71个不同规模猪场及农村散养户212份病料,采用建立的多重RT-PCR技术同时检测PRRSV和CSFV的感染状况。检测结果显示,病料中高致病性PRRSV占57.1%（121/212）,CSFV占29.2%（62/212）。应用RT-PCR方法扩增山东不同地区16株PRRSV的ORF5基因,并进行了序列分析。结果表明,16株PRRSV的ORF5基因核苷酸同源性为97.0%~100.0%;与参考变异毒株JXA1、传统毒株VR2332核苷酸同源性分别为98.0%~99.5%和86.4%~87.7%。推导的氨基酸序列分析表明,16株毒株GP5蛋白氨基酸不存在缺失,但存在位点突变。12株在非中和表位29位点与准种进化34位点发生了突变,分别由V→A和N→S;1株在非中和表位185位点发生突变,由A→V;这与2007年流行的PRRSV毒株JXA1、HUN等不同。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 多重PCR orf5基因
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PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建 被引量：2
5
作者 赵鸿雁 李俊 +4 位作者 丛晓燕 曹帅 王文志 张秀美 王金宝 《动物医学进展》 CSCD 2006年第11期61-64,共4页
根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列,分别设计一对引物,应用PCR和RT-PCR扩增出PCV-2 ORF2基因和PRRSV ORF5基因。将PCR产物ORF2经NheⅠ/EcoRⅠ双酶切回收后插入真核表达载体pIRES得到pIRES-OR... 根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列,分别设计一对引物,应用PCR和RT-PCR扩增出PCV-2 ORF2基因和PRRSV ORF5基因。将PCR产物ORF2经NheⅠ/EcoRⅠ双酶切回收后插入真核表达载体pIRES得到pIRES-ORF2,RT-PCR产物ORF5经NotⅠ/XbaⅠ双酶切回收后插入pIRES-ORF2构建重组质粒pIRES-ORF2/ORF5。对此质粒中的插入片段,进行PCR RT-PCR及双酶切鉴定,同时对插入序列进行测序分析,表明SD1株ORF2与国内多种毒株的同源性为99%,pIRES-ORF2ORF5转移载体ORF5基因的核苷酸推导氨基酸与北美洲原型(VR-2332株)氨基酸同源性为99%。此重组表达载体的成功构建,为进一步研究PCV-2 ORF2及PRRSV ORF5编码蛋白的生物学活性及研究猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二联核酸疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF2 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5 真核表达载体
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表达PRRSV ORF5和PCV2 ORF2基因的重组鸡痘病毒的构建及鉴定 被引量：1
6
作者 沈国顺 金宁一 +3 位作者 庄天中 韩贞珍 李阳 张金双 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期405-409,共5页
分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞... 分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞,进行同源重组。通过3次溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)加压筛选,经RT-PCR、IFA和Western blot鉴定,表明重组鸡痘病毒中的目的基因在鸡胚成纤维细胞中得到表达,获得一株携带有目的基因ORF2和ORF5的重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5。 展开更多
关键词 prrsv orf5 PCV-2 ORF2 鸡痘病毒
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2014-2017年山东省部分规模化猪场PRRSV ORF5基因的遗传演化分析 被引量：5
7
作者 曲向阳 孙英军 +7 位作者 张洪亮 周磊 刘媛媛 任夫波 赖清华 夏天 周明明 杨汉春 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第9期12-15,18,共5页
为了解山东省规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况及其分子特征,对2014-2017年其省内96个规模化养殖场的236份疑似PRRSV感染猪的肺脏、淋巴结、脾脏等病料进行RT-PCR检测,并对PRRSV阳性样品进行ORF5基因的克隆测序和遗传演化... 为了解山东省规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况及其分子特征,对2014-2017年其省内96个规模化养殖场的236份疑似PRRSV感染猪的肺脏、淋巴结、脾脏等病料进行RT-PCR检测,并对PRRSV阳性样品进行ORF5基因的克隆测序和遗传演化分析。共检测到阳性样品122份,阳性率51. 7%,测序获得122条ORF5基因序列。所检测PRRSV ORF5核苷酸序列同源性与氨基酸同源性分别是:78. 9%～99. 7%和73. 7%～99. 5%。遗传演化分析结果表明,山东地区主要存在4个Lineage的PRRSV毒株,以Lineage 1(NADC30-like)、Lineage 5(VR-2332)和Lineage 8(Hu N4)的毒株为主要流行株,其中Lineage 1检出率最高(46. 7%)。本研究在2014年检测到的Lineage 1毒株是国内首次报道,可能由美国引入,尚未在我国广泛流行。氨基酸比对分析表明,ORF5基因存在较大变异,但各Lineage毒株在ORF5基因的进化上具有保守性,均具有独特的氨基酸特性。通过对PRRSV ORF5遗传演化分析,表明山东地区PRRS的流行具有广泛的毒株变异特性,毒株的持续变异,增大了PRRS临床防控的难度,同时该研究为PRRS的防控提供一定的数据支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 山东 监测 orf5 遗传演化
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核表达质粒在小鼠的细胞免疫应答 被引量：1
8
作者 温建新 李俊 +6 位作者 周顺 任慧英 刘文华 邹玲 徐文 牛钟相 王金宝 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1516-1521,共6页
为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫... 为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 细胞免疫应答
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒对猪体免疫作用研究 被引量：2
9
作者 温建新 王金宝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期925-930,共6页
目的:为了增强猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗免疫效力,以pVAX1为真核表达载体,以PRRSV ORF5基因为目的基因,构建了含有CpG和PRRSV ORF5的真核表达质粒CpG-pVAX1-ORF5,并在猪体进行了免疫试验。方法:检测猪PRRSV的特异性抗体滴度... 目的:为了增强猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗免疫效力,以pVAX1为真核表达载体,以PRRSV ORF5基因为目的基因,构建了含有CpG和PRRSV ORF5的真核表达质粒CpG-pVAX1-ORF5,并在猪体进行了免疫试验。方法:检测猪PRRSV的特异性抗体滴度、IL-2水平以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平,并做了攻毒保护试验。结果:试验结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫(显著的淋巴细胞增殖反应水平)。攻毒结果表明CpG-pVAX1-ORF5组能够有效地抵抗经鼻攻毒,可以保护猪轻微病毒血症,比对照组减少80%,也不表现临床症状,对肺的损害能提供部分保护。结论:CpG的加入可使免疫猪的病变减轻或消失。从而表明含有CpG-ODN能作为PRRSVDNA疫苗的有效佐剂。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 CPG DNA免疫
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PRRSV ORF5基因和CSFVE2基因重组真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验 被引量：1
10
作者 杨柳絮 侯磊 +1 位作者 周宇 张淼涛 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第6期4-9,共6页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)已知序列设计3对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV ORF5基因和CSFV E2基因,目的基因依次插入真核表达载体pcDNA4.0,经PCR、酶切及测序分析,重组质粒构建成功,并命名为pcDNA4.0-ORF5-E2... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)已知序列设计3对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV ORF5基因和CSFV E2基因,目的基因依次插入真核表达载体pcDNA4.0,经PCR、酶切及测序分析,重组质粒构建成功,并命名为pcDNA4.0-ORF5-E2。重组质粒回收提纯后,以100μg/只剂量免疫小鼠,免疫3次。三免后10 d采血并制备血清,用间接ELISA检测小鼠血清中PRRSV及CSFV抗体效价。结果显示,所构建的重组质粒能够诱导小鼠产生PRRSV及CSFV抗体。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 orf5基因 E2基因 真核表达质粒 抗体效价
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2022年鄂西地区PRRSV ORF5基因遗传进化分析 被引量：1
11
作者 欧阳艳 刘发志 +3 位作者 王孝忠 李祚丹 熊同舟 杜建丰 《中国动物检疫》 CAS 2022年第12期12-17,共6页
为掌握鄂西地区PRRSV的流行及遗传变异情况,对2022年采自该地区8个县(市、区)的疑似感染发病猪血液、肺脏组织等样品共672份,进行PRRSV实时荧光RT-PCR检测,并对部分阳性样品的ORF5基因序列进行遗传进化分析。结果显示:检出PRRSV阳性样... 为掌握鄂西地区PRRSV的流行及遗传变异情况,对2022年采自该地区8个县(市、区)的疑似感染发病猪血液、肺脏组织等样品共672份,进行PRRSV实时荧光RT-PCR检测,并对部分阳性样品的ORF5基因序列进行遗传进化分析。结果显示:检出PRRSV阳性样品33份,阳性检出率为5%;通过进一步分型鉴定,23份为HP-PRRSV阳性,占69.7%,10份为类NADC30(NADC30-like PRRSV)阳性,占30.3%;采用DNAstar软件分析4份阳性样品的GP5蛋白氨基酸序列,显示存在多个氨基酸突变,在诱骗表位(27~30 aa)出现29G→29C,在中和表位,HP-PRRSV毒株出现39A→39T,类NADC30毒株出现38A→38T。结果表明,鄂西地区存在高致病性和类NADC30两种PRRSV毒株流行,其GP5蛋白氨基酸序列已发生了多个变异。结果提示,应持续加强PRRSV分子流行病学监测,选择与流行毒株匹配的疫苗进行免疫。 展开更多
关键词 prrsv orf5基因 遗传进化分析
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒构建及其免疫原性的研究
12
作者 温建新 李俊 +7 位作者 周顺 任慧英 刘文华 邹玲 徐文 牛钟相 王金宝 吴家强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期1503-1510,共8页
【目的】提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。【方法】经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSVGP... 【目的】提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。【方法】经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSVGP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的特异性抗体滴度、脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。【结果】本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫。【结论】CpG-ODN可提高PRRSV基因疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 DNA免疫
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含CpG序列PRRSV ORF5重组质粒在小鼠细胞中的免疫
13
作者 温建新 王金宝 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期1-5,共5页
为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,将成功构建含CpG序列PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5免疫SPF小鼠,检测小鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。结果表明,构建的含Cp... 为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,将成功构建含CpG序列PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5免疫SPF小鼠,检测小鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。结果表明,构建的含CpG序列真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 细胞免疫应答
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2014年华南地区PRRSV ORF5基因的遗传变异分析 被引量：1
14
作者 邓胜朝 冯嘉萍 +5 位作者 崔进 陈耀 崔甜甜 白小磊 石庆伟 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期3-6,共4页
为了研究华南地区PRRSV的遗传变异情况,本研究对2014年华南地区16份PRRSV阳性样品的ORF5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化分析。结果表明：本研究检测的16株PRRSV ORF5基因的核苷酸同源性为82.8%-100%,与... 为了研究华南地区PRRSV的遗传变异情况,本研究对2014年华南地区16份PRRSV阳性样品的ORF5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化分析。结果表明：本研究检测的16株PRRSV ORF5基因的核苷酸同源性为82.8%-100%,与JXA1,CH-1a以及VR2332核苷酸同源性分别为84.4%-99.3%,85.9%-95.0%和83.6%-89.2%。遗传进化树分析显示,所获得16株毒株序列中有13株属于以JXA1为代表的变异株亚群,另外3株属于以GM2,QYYZ为代表的新分支亚群。GP5氨基酸位点分析发现新分支亚群存在较为广泛的变异,尤其在信号肽区,诱导表位,中和表位及高变区。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征 华南地区 orf5 遗传变异
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2020—2022年闽粤赣地区PRRSV ORF5基因的分子流行病学调查 被引量：6
15
作者 吕紫欣 张鑫杰 +7 位作者 薛少华 金艳冬 陈林熙 黄喜荣 罗国清 蒙宁 陈瑶 戴爱玲 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期235-242,共8页
【目的】了解闽粤赣地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子流行动态,为该疫病的科学防控提供参考。【方法】采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对2020—2022年闽粤赣地区1475份临床猪组织和血清样品进行检测,对PRRSV阳性样品进行ORF5... 【目的】了解闽粤赣地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子流行动态,为该疫病的科学防控提供参考。【方法】采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对2020—2022年闽粤赣地区1475份临床猪组织和血清样品进行检测,对PRRSV阳性样品进行ORF5基因扩增和测序,并对ORF5基因的序列进行系统发育分析。【结果】2020、2021、2022年闽粤赣地区发病猪PRRSV的阳性率分别为24.23%(95/392)、27.69%(162/585)、18.07%(90/498),2020—2022年福建、广东、江西地区PRRSV的阳性率分别为23.20%(272/1172)、23.96%(52/217)、26.44%(23/87)。挑选来自不同猪场的86份阳性样品进行PCR扩增,成功获得62株PRRSV ORF5基因序列,并下载GenBank已发布的18株2020—2022年闽粤赣地区PRRSV的ORF5基因序列,与127株PRRSV国内外参考株ORF5基因序列构建系统发育树。系统发育树显示,80株闽粤赣PRRSV分离株均属美洲株。其中,40株分布在谱系1(NADC30-like株、NADC34-like株)上,12株分布在谱系3(GM2-like株、QYYZ-like株)上,7株分布在谱系5(VR2332-like株、BJ-4-like株)上,21株分布在谱系8(JXA1-like株、CH-1a-like株)上。对核苷酸和氨基酸序列的同源性进行分析,结果显示,80株PRRSV ORF5基因编码的核苷酸序列同源性为81.2%~100%,氨基酸序列同源性为78.6%~100%。33株PRRSV ORF5基因编码的GP5蛋白氨基酸序列在中和表位区第39氨基酸残基处存在变异。【结论】2020—2022年闽粤赣地区PRRSV流行株以谱系1为主(50.00%),并存在谱系1、3、5、8的混合流行。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) orf5基因 遗传变异
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2019—2021年我国部分地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析 被引量：9
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作者 何晓明 王东东 +4 位作者 田小艳 刘桂武 李春梅 欧阳海平 叶敏慧 《中国动物检疫》 CAS 2023年第2期9-16,共8页
为了解2019—2022年我国南方地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)ORF5基因遗传变异情况,自广东、广西、湖南、江西4个省份的种猪场和育肥场,采集疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对部分阳性样品进行病毒分离培养和ORF5基因测序。... 为了解2019—2022年我国南方地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)ORF5基因遗传变异情况,自广东、广西、湖南、江西4个省份的种猪场和育肥场,采集疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对部分阳性样品进行病毒分离培养和ORF5基因测序。结果显示:PRRSV总检出率为26.12%,其中育肥场场检出率(86.36%)高于种猪场(52.00%);共成功分离到97株病毒并对其进行了ORF5测序分析,发现Sublineage 1.8占比最高(51.55%),其次为Lineage 5(15.46%),Sublineage 1.5、Lineage 8、Lineage 3占比依次为13.40%、10.31%和9.28%;类NADC34毒株在2021年有3个省份(广东、广西和湖南)被首次检出,且当年检出率达13.40%。GP5蛋白分析结果显示,分离株中第13和151位氨基酸以及中和表位变异较多。对其中1株毒株进行重组分析发现,该毒株以类NADC30毒株为主要亲本,其多处基因组与JXA1和IA2014毒株发生了重组。结果表明:我国南方地区PRRSV流行较为普遍,尤其是在育肥猪群中;流行毒株类型较为复杂,但类NADC30毒株是优势毒株;流行毒株毒力位点及中和表位突变较为普遍,且部分毒株出现了重组,这有可能会影响毒株致病性以及现有疫苗的免疫保护效果,需要继续加强监测和研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 orf5基因 GP5蛋白 重组
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利用DNA Shuffling技术构建重组PRRSV ORF5基因 被引量：1
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作者 刘建奎 魏春华 +3 位作者 黄春芳 陈小燕 戴爱玲 杨小燕 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期888-896,共9页
通过DNA shuffling技术对PRRSV ORF5基因进行改组,研究其对异源毒株交叉中和能力。将获得的嵌合基因△2ORF5与载体pET-32a连接,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21中,经诱导表达获得约42 kDa重组蛋白。将纯化的重组△2ORF5蛋白免疫BAL... 通过DNA shuffling技术对PRRSV ORF5基因进行改组,研究其对异源毒株交叉中和能力。将获得的嵌合基因△2ORF5与载体pET-32a连接,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21中,经诱导表达获得约42 kDa重组蛋白。将纯化的重组△2ORF5蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,Western blotting试验表明其与4株亲本毒株重组ORF5蛋白具有良好的反应性。病毒感染抑制试验结果表明,多克隆抗体对4株亲本毒株具有较高的抑制率(>53%)。研究结果为研制新型PRRSV疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 prrsv orf5基因 DNA SHUFFLING 多克隆抗体 病毒感染抑制试验
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PRRSV NJ-a株ORF5基因A表位的修饰与糖基化位点的突变对其DNA疫苗免疫效力的影响 被引量：13
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作者 郑其升 李鹏 +5 位作者 毕志香 牛明福 曹瑞兵 周斌 陈德胜 陈溥言 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期33-39,共7页
为了提高PRRSVORF5基因的免疫效力,对ORF5基因进行了改造,将CpG序列和通用型辅助性T淋巴细胞表位插入A表位与B表位之间,并对N33与N51位糖基化位点进行了点突变,获得改造的ORF5基因。在此基础上构建了由两个CMV启动子调控的共表达改造的O... 为了提高PRRSVORF5基因的免疫效力,对ORF5基因进行了改造,将CpG序列和通用型辅助性T淋巴细胞表位插入A表位与B表位之间,并对N33与N51位糖基化位点进行了点突变,获得改造的ORF5基因。在此基础上构建了由两个CMV启动子调控的共表达改造的ORF5(MORF5)与ORF6基因的真核表达质粒pcDNA-M5A-6A。经Western-blot与IFA验证真核质粒的体外表达后,免疫6周龄Balb/c小鼠,利用微量中和试验检测免疫后的中和抗体,利用MTT法检测免疫后淋巴细胞的增生情况,并与未改造ORF5基因真核表达质粒pcDNA-5A-6A、弱毒疫苗以及灭活疫苗的免疫效果进行比较。结果表明,pcDNA-M5A-6A不但能够刺激免疫小鼠在较短的时间内产生更高水平的中和抗体,而且可以诱导产生更强烈的T淋巴细胞增殖反应。所构建的共表达PRRSV改造的ORF5基因与ORF6基因的DNA疫苗pcDNA-M5A-6A,能够较好的诱发小鼠产生较高的特异性针对PRRSV的中和抗体和细胞免疫应答,为研究能够更好地防制PRRSV的新型疫苗提供了新的思路。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 基因改造 DNA疫苗
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PRRSV BJ-4株ORF5基因的原核表达与重组蛋白的纯化 被引量：36
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作者 谷红 杨汉春 +1 位作者 郭鑫 陈艳红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期64-69,共6页
为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在E.coliBL21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,... 为成功表达猪繁殖与综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5,通过PCR方法从重组质粒pGEM ORF5扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF5(deletingORF5)。将dORF5克隆至原核高效表达载体pGEX 4T 2,在E.coliBL21细胞中成功表达了重组蛋白GST dORF5,表达产物以包涵体的形式存在,表达量为20 8%。Western Blot结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。利用融合肽进行亲和层析得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究PRRS病毒结构蛋白的结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 prrsv BJ-4株 orf5基因 原核表达 重组蛋白 分离纯化 猪 繁殖与呼吸综合症
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PRRSV山西株ORF5和Nsp2基因序列分析 被引量：8
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作者 姚敬明 刘文俊 +7 位作者 罗甜甜 吴忻 王娟萍 孟帆 韩一超 樊振华 米瑞娟 詹海杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-5,共5页
采用RT-PCR方法对2009—2011年山西省分离的5株猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的ORF5和Nsp2（2503～3269nt）基因进行克隆和测序，并对其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外毒... 采用RT-PCR方法对2009—2011年山西省分离的5株猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的ORF5和Nsp2（2503～3269nt）基因进行克隆和测序，并对其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外毒株进行了同源性分析。序列分析结果显示，5株分离株Nsp2基因与国内分离的PRRSV变异株（JXA1、HuN、HUN4、HUB1）的序列同源性最高，为96．8％～98．2％，且缺失位置一致，均存在2个位点30个氨基酸缺失；ORF5基因大小为603bp，编码200个氨基酸，第13、151位均为具有强毒特性的精氨酸（R），137位为丝氨酸（S），表明这5株均为野毒株，与国内分离的PRRSV变异株（JXA1、HuN、HUN4、HUB1）毒株的序列同源性最高，为96．5％～98．0％。结果表明，山西省内目前流行的PRRSV为Nsp2缺失30个氨基酸的变异毒株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 NSP2基因 变异分析
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