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一株Lineage7和Lineage8重组PRRSV的全基因组分析
1
作者 许浒 李金昊 +16 位作者 张思钰 孙琪 张梦琳 郭镇洋 龚帮俊 李超 相丽润 彭金美 王倩 周国辉 汤艳东 冷超粮 赵款 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期745-750,共6页
Lineage7 PRRSV最早出现于美国,2005年Lineage7 PRRSV在我国首次发现,但近20年一直无该分支PRRSV的报道。2024年黑龙江省某猪场疑似出现PRRS疫情,保育猪出现咳嗽、消瘦等临床症状。为明确引起猪发病的病原,本研究采集14份保育猪血清,经... Lineage7 PRRSV最早出现于美国,2005年Lineage7 PRRSV在我国首次发现,但近20年一直无该分支PRRSV的报道。2024年黑龙江省某猪场疑似出现PRRS疫情,保育猪出现咳嗽、消瘦等临床症状。为明确引起猪发病的病原,本研究采集14份保育猪血清,经荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)鉴定并测序分析。结果显示其中2份为PRRSV-2阳性,测序结果显示,2份阳性血清样品中PRRSV-2的基因序列一致,且于同一猪场发生,表明两株PRRSV-2相同,将其命名为HLJ3897株。利用高通量测序技术对HLJ3897株全基因组测序,利用Megalign软件分析HLJ3897株与各谱系PRRSV-2代表株全基因组序列的相似性;利用MEGA7.0软件构建PRRSV ORF5基因、部分Nsp2基因和全基因组序列的遗传进化树,分析其遗传变异情况;利用Simplot3.5.1和RDP4软件分析HLJ3897株的重组事件;利用Megalign软件比对各谱系PRRSV Nsp2的氨基酸序列,分析其氨基酸序列的变异。结果显示测序获得的HLJ3897株全基因组序列长15 409 bp,全基因组序列相似性比对结果显示,HLJ3897株与Lineage 8 HP-PRRSV代表株JXA1的相似性最高达96.5%,与其他谱系PRRSV代表株的相似性为83.6%~93.3%。ORF5基因和全基因组序列的遗传进化树结果显示,HLJ3897株与Lineage8的HP-PRRSV处于同一进化分支,为Lineage8 PRRSV,与相似性分析结果一致,而基于部分Nsp2基因的遗传进化树显示HLJ3897株与Lineage7 PRRSV处于同一进化分支,这表明我国HP-PRRSV出现了新的变异。重组分析结果显示,HLJ3897株是以HP-PRRSV JXA1株为主要亲本,Lineage7 PRRSV APRRS株提供部分Nsp2基因片段的重组病毒,重组断点分别位于nt1 507和nt3 205。根据重组断点前(nt1~nt1 507)、中(nt1 508~nt3 205)、后(nt3 206~nt15 409)3个片段构建的遗传进化树验证了上述重组分析的结果。氨基酸比对结果显示,HLJ3897株Nsp2氨基酸序列均未出现Lineage7 PRRSV和HP-PRRSV的特征性氨基酸序列的插入或缺失。本研究在中国首次发现并报道了Lineage7 PRRSV与Lineage8 HP-PRRSV的重组野毒株,提示我国PRRSV-2的流行日趋复杂,应加大监测力度,关注PRRSV-2变异株对我国养猪业的危害。本研究对了解我国PRRSV-2的流行现状以及PRRS的防控均具有重要指导意义。 展开更多
关键词 Lineage7 prrsv Lineage8 prrsv 重组病毒 首次发现
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从河南省猪群中鉴定出PRRSV1病毒感染
2
作者 王新港 郭占达 +5 位作者 杜季梅 姬星宇 张先锋 陈陆 王彦辉 王川庆 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期427-435,共9页
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒种1(porcine reproductive and respiratory syndrome virus 1,PRRSV1)在河南省的流行情况,本研究对河南省部分规模化猪场临床病料进行分子流行病学调查与病毒分离鉴定。利用PRRSV1 ORF5基因特异性引物进行... 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒种1(porcine reproductive and respiratory syndrome virus 1,PRRSV1)在河南省的流行情况,本研究对河南省部分规模化猪场临床病料进行分子流行病学调查与病毒分离鉴定。利用PRRSV1 ORF5基因特异性引物进行RT-PCR检测与序列测定,结果共检测出PRRSV1阳性样品8份,获得ORF5基因序列6个,全基因序列1个。利用PAM细胞成功分离出1株PRRSV1,命名为HENZMD-10。对分离毒株基因遗传变异分析,获得的6个ORF5基因均为PRRSV1,分离毒株ORF5基因遗传变异较大,遗传进化树上分属于不同的分支。其中,HENJZ-11、HENJY-7、HENJY-8遗传进化距离较近,分属于同一分支。HENZMD-10分离株基因组全长为15071 bp,核苷酸序列比对与LV毒株核苷酸相似性为89.1%;与PRRSV2 ATCC-VR2332毒株核苷酸相似性为62.1%;与美国NADC30毒株核苷酸相似性为61.5%;与国内JXA1毒株核苷酸相似性为61.6%。全基因组遗传进化分析显示,HENZMD-10与国内分离PRRSV1毒株NVDC-NM1-2011、LNEU12和FJEU13毒株的遗传距离较近。结果表明,本试验通过对河南省PRRSV1的分子流行病学调查以及病毒全基因遗传进化分析,成功分离1株PRRSV1,为PRRSV1在国内的流行动态及其防控提供一定的临床指导意义。 展开更多
关键词 prrsv prrsv1 ORF5基因 全基因测序 遗传进化分析
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1株类NADC30 PRRSV三谱系重组株的分离鉴定及遗传分析
3
作者 蔡丙严 乔洋洋 +5 位作者 刘天昕 左伟勇 王永娟 张凯 陆辉 王海明 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期420-426,共7页
2018年6月黑龙江佳木斯某猪场的母猪出现了大量流产,随后该场的断奶仔猪在35日龄左右开始出现持续高烧症状,部分猪体温超过41.5℃。为确定此次疫情的病因,本研究对来自本养殖场送检的63份临床样品进行检测。结果显示,63份样品中有60份... 2018年6月黑龙江佳木斯某猪场的母猪出现了大量流产,随后该场的断奶仔猪在35日龄左右开始出现持续高烧症状,部分猪体温超过41.5℃。为确定此次疫情的病因,本研究对来自本养殖场送检的63份临床样品进行检测。结果显示,63份样品中有60份样品呈现猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗原阳性。随后将PRRSV抗原阳性病料接种于非洲绿猴胚胎肾细胞(Marc-145),盲传3代后,进行IFA(indirect immunofluorescence assay),结果显示,成功分离获得1株PRRSV,命名为HLJ38株。随后对HLJ38株进行了全基因组测序,并利用生物信息学软件对其基因组进行了详细分析,结果显示HLJ38株Nsp2基因的推导氨基酸序列中存在3处、共计131(323~433 aa、483 aa和504~522 aa)个氨基酸的缺失,符合类NADC30 PRRSV的分子遗传标志;进化树分析结果显示,HLJ38与GenBank中的类NADC30 PRRSV同属于谱系1亚群,与国内代表毒株CH-1a、HuN4亲缘关系较远,其核苷酸同源性仅为85.2%和84.6%;重组分析结果显示,HLJ38是1株重组的类NADC30 PRRSV,且重组的基因片段来源于多个毒株,其中1~201 nt片段由VR2332毒株提供,而6641~8061 nt来源于HP-PRRSV毒株。结果表明,该猪场此次疫情的原因可能是由不同谱系间PRRSV毒株发生重组所致,重组后的流行毒株不仅具有一定的致病性,而且现有的商品化疫苗对其交叉保护性较弱;不同谱系间的重组增加了PRRSV的基因多样性,也加剧了猪场PRRS防控的难度。因此,有必要持续监控猪场中PRRSV的流行动态,及时采取有效措施,遏制PRRS疫情的扩散。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30 prrsv HLJ38 重组分析
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1株多毒株重组PRRSV的分离鉴定与遗传进化分析
4
作者 元娜 邵明珠 +4 位作者 吕凤霞 窦丽娜 李向清 赵宝凯 董世山 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第3期58-65,共8页
为了分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特性,本试验对来自山西省某猪场疑似感染PRRSV的母猪血清和仔猪肺脏组织样品进行PRRSV实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,阳性肺脏组织样品研磨液接种于猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将出现细... 为了分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特性,本试验对来自山西省某猪场疑似感染PRRSV的母猪血清和仔猪肺脏组织样品进行PRRSV实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,阳性肺脏组织样品研磨液接种于猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将出现细胞病变的PAMs进行有限稀释法纯化后用间接免疫荧光(IFA)鉴定,利用逆转录PCR(RT-PCR)分段扩增分离毒株全基因组序列,并用分子生物学软件进行开放阅读框5(ORF5)基因和全基因组的同源性和遗传进化分析、非结构蛋白2(Nsp2)氨基酸特征及全基因组序列的重组分析。结果显示,qRT-PCR检测样品总阳性率为80%(16/20),从PRRSV阳性仔猪肺脏组织中分离获得1株PRRSV,命名为SXZY202301;分离毒株基因组全长15 021 bp,与NADC30毒株的核苷酸同源性达到90.4%,在遗传进化树中处于同一分支,属于Sublineage 1.8;ORF5基因与IA/2014/NADC34毒株的ORF5基因高度相似,同源性达到了95.1%,在遗传进化树中处于同一分支,属于Sublineage 1.5;分离毒株与类NADC30毒株Nsp2氨基酸序列具有相同的131个氨基酸缺失的典型特征;重组分析结果显示,SXZY202301存在6个重组位点,是以类NADC30毒株为主要亲本,以JXA1毒株和类NADC34毒株为次要亲本的多毒株重组类毒株。本试验为进一步研究PRRSV的重组和演化提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 分离鉴定 测序分析 遗传进化 重组
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PRRSV通过代谢重编程逃避宿主免疫应答研究进展
5
作者 褚贝贝 马英先 +2 位作者 王江 曾磊 明胜利 《山西农业科学》 2025年第6期20-29,共10页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染可导致母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病以及公猪精液质量下降,对全球养猪业造成重大经济损失。该病毒具有高度变异性和免疫抑制特性,能够通过多种机制逃避宿主天然免疫应答,从而在猪群中建立持续性感染... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染可导致母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病以及公猪精液质量下降,对全球养猪业造成重大经济损失。该病毒具有高度变异性和免疫抑制特性,能够通过多种机制逃避宿主天然免疫应答,从而在猪群中建立持续性感染。这种持续感染状态不仅加大了临床防控的难度,也使得传统疫苗免疫策略面临效果不稳定的挑战。作为一种严格依赖宿主细胞完成复制过程的病毒,PRRSV本身缺乏独立的生物合成系统,其基因组的复制、转录及病毒颗粒的组装、释放等各个环节,均高度依赖宿主细胞提供的代谢资源和能量支持。近年来研究表明,病毒通过重编程宿主细胞的代谢通路,包括糖类、脂质及氨基酸代谢,以满足其复制所需能量和生物前体,这种病毒诱导的代谢重编程不仅为病毒复制营造了有利的胞内环境,同时也能调控免疫应答,实现免疫逃逸。这为理解PRRSV的致病机制提供了新视角,也为抗病毒策略的开发指明了新方向。文章系统综述了PRRSV调控宿主细胞代谢重编程的机制,重点探讨其如何通过干预糖酵解、脂质代谢及氨基酸利用,影响宿主的免疫应答,并对靶向代谢通路作为抗PRRSV策略的潜力进行展望。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 代谢重编程 免疫逃逸 糖酵解 脂质代谢 氨基酸代谢
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苏北鲁南地区PRRSV流行病学调查
6
作者 周庆雨 张巍巍 +5 位作者 买尔外提·波拉提 卢玮 沙黑拉·巴合提 罗林 包文武 张秀玉 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期199-205,共7页
本调查对苏北鲁南地区30余个规模化养殖场送检的2894份样品进行RT-PCR检测,通过检测数据统计分析,确定了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在本地区的流行趋势。同时选用NSP2基因序列特异性引物探针试剂盒,对300份阳性样本进行毒株鉴别,发... 本调查对苏北鲁南地区30余个规模化养殖场送检的2894份样品进行RT-PCR检测,通过检测数据统计分析,确定了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在本地区的流行趋势。同时选用NSP2基因序列特异性引物探针试剂盒,对300份阳性样本进行毒株鉴别,发现PRRSV高致病性变异株阳性率逐年攀升。进一步对Ct值较低的50份阳性样本进行NSP2、ORF5基因测序分析,锁定了苏北鲁南地区主要的PRRSV流行毒株。 展开更多
关键词 prrsv 类NADC30 prrsv高致病性变异株 基因测序
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2型PRRSV N蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定 被引量：3
7
作者 庞燕丽 覃建光 +7 位作者 刘沐阳 任同伟 刘嘉琪 周玲杉 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第1期16-21,45,共7页
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白的单克隆抗体,用原核表达系统表达并纯化后的2型PRRSV毒株的N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间... 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白的单克隆抗体,用原核表达系统表达并纯化后的2型PRRSV毒株的N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)对杂交瘤细胞进行鉴定,使用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行亚克隆筛选。结果显示,成功获得1株单克隆抗体细胞株4A7。Western blot和IFA结果表明,该单克隆抗体能够准确识别1型和2型PRRSV的N蛋白。同时,通过原核表达系统对N蛋白基因进行截短表达,利用Western blot试验筛选出4A7识别的B细胞抗原表位的氨基酸序列为^(51)EKPHF^(55)。在不同毒株的N蛋白基因序列中对该表位的氨基酸进行比对,发现单克隆抗体4A7识别的抗原表位^(51)EKPHF^(55)与1型PRRSV毒株中3个亚型、2型PRRSV毒株中9个谱系的序列无氨基酸差异,具有较高的保守性。研究结果为研发PRRSV诊断试剂盒和新型疫苗奠定了理论基础。 展开更多
关键词 prrsv 核衣壳蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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中国新发L1A PRRSV变异株的出现与流行状况分析 被引量：7
8
作者 许浒 龚帮俊 +17 位作者 李超 孙琪 李宛生 赵静 郭镇洋 李金昊 张思钰 相丽润 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 汤艳东 赵鸿远 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期779-786,共8页
2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类N... 2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类NADC34 PRRSV阳性病料样品中选择4份样品经PCR分段扩增PRRSV全基因组序列并测序,利用SeqMan软件拼接,获得了4株完整的PRRSV全基因组序列,相应的病毒分别命名为TZJ2165、TZJ2451、TZJ2756、WK621株。下载GenBank中所有中国类NADC34 PRRSV和美国L1C变异株的ORF5基因及NSP2基因序列,利用MEGA7.0构建上述PRRSV ORF5基因序列的遗传进化树,分析其遗传变异情况。利用Megalign软件分析各分支内ORF5基因序列的相似性,以及新发类NADC34 PRRSV NSP2氨基酸序列,分析其是否存在一致的氨基酸缺失特征。根据PRRSV ORF5基因的限制性片段多态性(RFLP)分类方法,对新发类NADC34 PRRSV的ORF5基因序列分类。利用Simplot软件分析新发类NADC34 PRRSV和L1C变异株全基因组序列中的重组事件。基于ORF5基因进化树结果显示,这4株新发类NADC34 PRRSV与之前分离的TZJ2007、BJ-20-06等12株PRRSV均属于L1A亚型,与早期类NADC34 PRRSV相比,这些病毒株形成了一个独立分支,将其命名为L1A变异株,且其ORF5基因序列的相似性≥93%。NSP2氨基酸序列比对分析发现,L1A变异株具有一致的131个氨基酸不连续缺失的分子特征。ORF5基因的RFLP模式分析结果显示,L1A变异株RFLP模式分为1-4-2、1-4-4、1-5-4、1-7-4和1-6-4,模式并不一致。重组分析结果显示,L1A变异株存在相似的重组模式,它们均是以NADC30株(类NADC30 PRRSV)为主要亲本,JXA1株(类HP-PRRSV)提供部分非结构蛋白基因区域、IA/2014/NADC34株(类NADC34 PRRSV)提供ORF2a~ORF6区域的重组病毒。目前L1A变异株已经在黑龙江、内蒙古、辽宁、北京、广西、江苏、四川、福建、山东、广东和山西等11个省份检出。通过与美国L1C变异株比较,发现二者流行特征有诸多相似性,鉴于L1C变异株对美国养猪业造成严重影响,加大对L1A变异株的监测力度至关重要。本研究聚焦新发类NADC34 PRRSV的流行及变化特征,对了解我国PRRSV流行现状以及对PRRS的防控均具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 L1A prrsv变异株 类NADC30 prrsv 类NADC34 prrsv HP-prrsv 重组 出现与流行
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对PRRSV快速分型的多重RT-PCR方法的建立与应用 被引量：14
9
作者 林华 郭万柱 +6 位作者 韩国全 岳玉红 郭杨 徐志文 颜其贵 王印 李宇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期6-10,共5页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的Nsp2基因间的差异,设计3对特异性扩增引物,建立快速检测PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的多重RT-PCR方法。利用PRRSV欧洲株、经典株和高致病... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的Nsp2基因间的差异,设计3对特异性扩增引物,建立快速检测PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的多重RT-PCR方法。利用PRRSV欧洲株、经典株和高致病性Nsp2变异株及其他相关病毒株进行敏感度和特异性试验。结果显示,所建立的多重RT-PCR对欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的RNA最小检出量分别为0.050 2、0.055 4、0.056 4ng,与CSFV、TGEV、JEV、SIV的核酸均无交叉反应。用该方法检测病料76份,结果PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的阳性率分别为0、7.89%和53.9%,未发现3型病毒间有混合感染的情况。检测结果与单一RT-PCR及RT-PCR检测试剂盒检测结果一致,高于病毒分离。 展开更多
关键词 prrsv欧洲株 prrsv美洲经典株 prrsv高致病性Nsp2变异株 多重RT-PCR
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表达PEDV S蛋白优势抗原区域的重组PRRSV活载体疫苗株的鉴定 被引量：1
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作者 劳梦琴 刘瑞琳 +13 位作者 陈鹏飞 黄世静 于家荣 朱钧锐 孙祁 虞凌雪 高飞 姜一峰 童武 刘长龙 李丽薇 于海 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期155-163,共9页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名为SNE,利用反向遗传操作技术将其引入至HuN4-F112株基因组中,构建了含有SNE的PRRSV全长cDNA克隆pHuN4-F112-SNE,通过病毒拯救获得了重组病毒rHuN4-F112-SNE株,经过对重组病毒引入基因和表达蛋白的鉴定,证实获得的重组病毒rHuN4-F112-SNE能够正确表达PEDV S蛋白优势抗原区域,其生物学特性与亲本毒株相似。将该重组病毒连续传至30代,引入的SNE基因均能获得稳定表达,且不影响亲本毒复制和自身蛋白的表达,表明重组病毒rHuN4-F112-SNE中引入的SNE基因可稳定遗传,研究结果为后续评价rHuN4-F112-SNE作为二价基因工程活载体疫苗的有效性奠定了基础。 展开更多
关键词 PEDV S蛋白 prrsv 重组病毒
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不同基因型PRRSV鉴别诊断多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：1
11
作者 贾钦瑞 闫乙鑫 +4 位作者 罗志鹏 徐通 陈弟诗 周远成 朱玲 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第2期452-457,478,共7页
【目的】针对PRRSV的多基因型特性,旨在建立一种灵敏、特异且稳定的多重RT-PCR检测方法。【方法】根据GeneBank数据库中公布的ORF1、ORF6和Nsp2基因保守序列分别设计合成3对特异性引物,分别以PRRSV欧洲株(PRRSV-1)、高致病性毒株(HP-PRR... 【目的】针对PRRSV的多基因型特性,旨在建立一种灵敏、特异且稳定的多重RT-PCR检测方法。【方法】根据GeneBank数据库中公布的ORF1、ORF6和Nsp2基因保守序列分别设计合成3对特异性引物,分别以PRRSV欧洲株(PRRSV-1)、高致病性毒株(HP-PRRSV)、美洲经典株(Classic-PRRSV)和NADC30-like株cDNA为模板进行PCR扩增并构建重组质粒,通过对反应体系和反应条件的优化建立不同基因型PRRSV鉴别诊断多重RT-PCR检测方法。对该方法进行特异性、灵敏性、重复性和准确性验证。【结果】优化过后的cDNA模板为7.5μL,引物为0.5μL,退火温度为56℃;该方法与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)无交叉反应,特异性强。对PRRSV-1、NADC30、HP-PRRSV、Classic-PRRSV株的最低检测下限分别为3.93×10^(2)、4.52×10^(2)、3.70×10^(2)和4.58×10^(2)copies/μL,灵敏性较高。分别以10^(4)copies/μL的混合阳性质粒和4种单一阳性质粒为模板,进行PCR扩增,重复性较好。对来自四川各地的118份临床样本进行检测,总符合率达到98%。【结论】该方法能够精确鉴别PRRSV的不同基因型毒株,具有良好特异性、灵敏性、重复性和准确性,在临床样品中鉴别不同基因型PRRSV毒株的方面具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 prrsv欧洲株 高致病性毒株 美洲经典株 NADC30-like株 多重RT-PCR
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JEV、PRRSV和CSFV TaqMan三重RT-qPCR方法的建立与应用
12
作者 张力 汤德元 +10 位作者 曾智勇 王彬 袁盛林 陈旭 廖正波 周飘 何松 毛茵茗 胡雯雯 周敏 高邡鑫 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第9期1824-1833,共10页
为建立鉴别日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的TaqMan三重RTqPCR检测方法,本... 为建立鉴别日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的TaqMan三重RTqPCR检测方法,本研究参照NCBI GenBank中已公开的JEV E、PRRSV ORF6和CSFV E2保守序列,设计并合成3对特异性引物和探针,通过对反应体系以及反应程序的优化,建立检测3种病毒的多重RT-qPCR方法,并将其应用于临床样品的检测。结果显示,建立的TaqMan三重RT-qPCR能特异性扩增出JEV、PRRSV和CSFV的基因片段,而不能扩增其他非目的基因,表明建立的方法特异性良好。组内和组间重复试验结果显示,其Cv值均低于3%,表明所建立的方法具有良好的重复性。敏感性试验结果显示,对3种病毒的重组质粒的最低检测量均为100拷贝/μL。应用该方法对贵州省26个猪场的血液、流产死胎、精液和病死猪等总计969份样品进行检测JEV检出率为34.3%(332/969)、PRRSV检出率为28.3%(274/969)、CSFV检出率为19.8%(192/969)。JEV与PRRSV的混合感染检出率为10.1%(98/969),JEV与CSFV的混合感染检出率为12.1%(117/969),CSFV与PRRSV的混合感染检出率为14.6%(141/969),而JEV、PRRSV和CSFV的三重混合感染检出率为7.9%(77/969)。上述结果显示,本研究成功构建了JEV、PRRSV和CSFV TaqMan三重RT-qPCR检测方法,可适用于猪场对这3种病毒的检测,为鉴别病毒引起的繁殖障碍性疫病提供了技术支持。 展开更多
关键词 JEV prrsv CSFV 三重RT-qPCR 临床检测
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PRRSV类NADC30毒株感染诱导机体免疫失衡的免疫学特征
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作者 李法昊 李家辉 +3 位作者 王梦翔 张宜娜 陈静 夏平安 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1226-1234,共9页
本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)类NADC30毒株感染诱导机体免疫失衡的免疫学特征。通过PRRSV类NADC30毒株感染20日龄健康仔猪,结合病毒载量检测(RT-PCR/RT-qPCR)、... 本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)类NADC30毒株感染诱导机体免疫失衡的免疫学特征。通过PRRSV类NADC30毒株感染20日龄健康仔猪,结合病毒载量检测(RT-PCR/RT-qPCR)、中和抗体效价分析(ELISA)、细胞因子动态监测(RT-qPCR)及Th1/Th2分型检测(流式细胞术)等方法,系统评估了病毒感染后的免疫应答特征。结果显示,感染后病毒血症呈现双峰模式(14d和35d),中和抗体延迟至35d出现,42d达峰值后下降。促炎因子IL-1β在感染后第7d显著升高,TNF-α则在感染后第14d上调;抑炎因子(TGF-β、IL-10)在感染后第14d升高,并在感染后第28d达到峰值;免疫检查点分子CTLA-4在感染后第7d和第28d时表达量显著提高,LAG-3在感染后第14d检测到上调,随后表达量虽有下降但仍为上调。血液中Th1/Th2分型比例随着感染时长的变化在不同仔猪个体之间并不存在明显的一致性,但均具有明显的分化漂移现象。本研究揭示了PRRSV类NADC30毒株感染引起猪机体免疫失衡的免疫学特征,这种特征阻碍了PRRSV有效疫苗的研发。 展开更多
关键词 prrsv 免疫因子 Th1/Th2免疫失衡
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类NADC30-like株和HP-PRRSV鉴别诊断RT-PCR方法的建立及应用
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作者 乔璐 柳海云 +4 位作者 杨健 黄国梁 郭慧琛 孙世琪 牛家强 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第12期1635-1642,共8页
本研究旨在建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30株(NADC30-like)和高致病PRRSV(HP-PRRSV)鉴别诊断的RT-PCR方法,为该病的检测和防控提供依据。根据PRRSVNsp2基因核苷酸序列特征,设计一种可同时鉴定HP-PRRSV和NADC3O-like株的... 本研究旨在建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30株(NADC30-like)和高致病PRRSV(HP-PRRSV)鉴别诊断的RT-PCR方法,为该病的检测和防控提供依据。根据PRRSVNsp2基因核苷酸序列特征,设计一种可同时鉴定HP-PRRSV和NADC3O-like株的RT-PCR方法。结果显示,该方法扩增出的HP-PRRSV和NADC30-like株Nsp2基因片段分别为931bp和628bp,最低检测下限分别为472copies/uL和132copies/uL,对其他基因亚型PRRSV和病毒均未扩增出特异性条带。针对此方法,分离优势毒株并纯化。对来自甘肃省部分地区猪场的196份临床样品进行检测,发现28份样品为HP-PRRSV核酸阳性,15份样品为NADC30-like核酸阳性,3份样品为HP-PRRSV+NADC30-like核酸阳性;RT-PCR检测ORF5基因,发现HP-PRRSV和NADC30-like核酸阳性样品数量分别为37份和9份,但未发现混合感染样品;分离优势毒株,得到了传代稳定的病毒;纯化后获得了纯度较高且结构完整的病毒粒子。本研究建立的RT-PCR方法可用于HP-PRRSV和NADC30-like株快速鉴别诊断和分子流行病学调查研究,但其灵敏度稍差;且其无法检测其他PRRSV亚型毒株。 展开更多
关键词 HP-prrsv NADC3O-like 鉴别诊断 RT-PCR 分离纯化
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CpG重组质粒对猪PBMC刺激效果及体外抗PRRSV活性分析
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作者 王帅 武力 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期107-114,共8页
为了探讨CpG重组质粒对猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)刺激效果及体外抗PRRSV效果,试验对大量提取的CpG49重组质粒进行了酶切鉴定,采用CCK-8法及实时荧光定量PCR方法检测了CpG49重组质粒对猪PBMC在第24,4... 为了探讨CpG重组质粒对猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)刺激效果及体外抗PRRSV效果,试验对大量提取的CpG49重组质粒进行了酶切鉴定,采用CCK-8法及实时荧光定量PCR方法检测了CpG49重组质粒对猪PBMC在第24,48,72小时的免疫刺激效果及α干扰素(IFN-α)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)的转录水平,最后通过终点稀释法、实时荧光定量PCR、间接免疫荧光法和Western-blot方法评估CpG49重组质粒孵育猪PBMC细胞48 h后收获的上清液对PRRSV体外的抗病毒作用。结果表明:CpG49重组质粒在4 397 bp处出现单酶切条带,在2 492 bp和1 905 bp处出现双酶切条带。不同质量浓度CpG49重组质粒均对猪PBMC有一定刺激效果,但10μg/mL CpG49重组质粒在第48小时对猪PBMC细胞的刺激效果最佳。与阴性对照相比,10μg/mL CpG49重组质粒亦能够在作用24 h后极显著提升猪PBMC的IL-1β、IL-6、IL-10和IL-12细胞因子的mRNA相对表达量(P<0.01或P<0.000 1),作用持续时间可达48 h。与病毒对照组相比,用10μg/mL CpG49重组质粒孵育猪PBMC细胞上清液能够极显著降低子代病毒滴度、PRRSV ORF7 mRNA相对表达量及PRRSV N蛋白相对表达量(P<0.000 1)。说明CpG49重组质粒能够刺激猪PBMC免疫应答且具有体外抗PRRSV效果。 展开更多
关键词 CpG重组质粒 prrsv 免疫刺激 抗病毒 猪外周血单个核细胞 细胞因子 TOLL样受体9
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基于单B细胞筛选技术制备PRRSV N蛋白单克隆抗体
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作者 李钰婷 王衡平 +2 位作者 李芳 周昕 王会岩 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期63-70,共8页
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体。本试验构建和鉴定重组表达质粒pET28a(+)-sumo-N,以原核表达并纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用单B细胞筛选技术获得分泌针对N蛋白的特异性抗体的单B细胞,再经单细胞测... 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白的单克隆抗体。本试验构建和鉴定重组表达质粒pET28a(+)-sumo-N,以原核表达并纯化的N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用单B细胞筛选技术获得分泌针对N蛋白的特异性抗体的单B细胞,再经单细胞测序获得抗体基因序列并构建真核表达质粒,利用中华仓鼠卵巢(CHO)细胞瞬时转染表达并筛选和纯化单克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其效价,蛋白质免疫印迹(WB)鉴定其特异性,生物膜干涉(BLI)技术测定其亲和力和表位分组。结果显示,N蛋白呈可溶性表达,分子量约34 kDa。基于单B细胞筛选技术筛选出5株单克隆抗体。5株单克隆抗体效价均大于10~5,均可与PRRSV N蛋白产生特异性反应,亲和力解离常数(Kd)分别为8.72×10^(-9)、1.41×10^(-8)、1.14×10^(-10)、1.00×10^(-12)和1.54×10^(-11)mol/L,且表位均不相同。本试验应用单B细胞筛选技术成功制备出抗PRRSV N蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究PRRSV N蛋白的结构特性、功能作用以及建立高效且快速的PRRSV抗体检测方法提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征(prrsv) N蛋白 单克隆抗体 单B细胞筛选技术
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2020-2024年北京地区PRRSV-2流行病学调查和遗传进化分析 被引量：1
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作者 郭生革 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第10期50-57,共8页
为了分析2020—2024年北京市猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况和遗传变异特征,本试验从北京市8个地区的不同规模猪场采集了6127份临床样本,利用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测PRRSV感染情况,通过PCR扩增获... 为了分析2020—2024年北京市猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况和遗传变异特征,本试验从北京市8个地区的不同规模猪场采集了6127份临床样本,利用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测PRRSV感染情况,通过PCR扩增获得PRRSV的开放阅读框5(ORF5)序列,并基于ORF5基因进行同源性分析和遗传进化分析。结果显示,2020—2024年北京地区样本PRRSV总检出率为16.35%(1002/6127),不同年度的PRRSV检出率呈逐年下降趋势;不同地区的PRRSV检出率介于10.31%~22.84%,其中延庆区的检出率最高;不同样本类型的PRRSV检出率不同,其中肺脏样本的检出率最高,为22.54%(222/985),环境样本的检出率较低,为3.72%(16/430),种公猪精液中未检出PRRSV。本试验测序获得26个PRRSV ORF5基因序列,通过系统进化分析发现,北京地区检测到的PRRSV毒株主要属于谱系1.8(NADC30-like)和1.5(NADC34-like),占比分别为42.31%(11/26)和34.62%(9/26),此外,谱系5(VR2332-like)和谱系8(HP-PRRSVlike)也有少量分离毒株分布。本试验揭示了北京市PRRSV-2的流行特性和遗传多样性,为制定针对性防控措施提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 开放阅读框5(ORF5) 流行病学 遗传进化分析
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体外抗PRRSV天津株的中药组方筛选
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作者 朱琪 任卫科 +9 位作者 杨丽景 王建军 路超 石俊鹏 钱建旺 张莉 李富强 孟乐 冯保亮 鄢明华 《安徽农业科学》 2025年第23期71-74,79,共5页
为了筛选抗PRRSV的中药组方,自拟10种中药组方,以PRRSV类NADC 30毒株(天津株)感染Marc-145细胞为模型,评估其体外抗PRRSV的效果。首先采用MTT法测定各中药组方对Marc-145细胞的毒性作用,结果显示,10种中药组方最大安全浓度为1.250~10.00... 为了筛选抗PRRSV的中药组方,自拟10种中药组方,以PRRSV类NADC 30毒株(天津株)感染Marc-145细胞为模型,评估其体外抗PRRSV的效果。首先采用MTT法测定各中药组方对Marc-145细胞的毒性作用,结果显示,10种中药组方最大安全浓度为1.250~10.000 mg/mL。之后采用PRRSV天津株感染Marc-145细胞,建立了PRRSV Marc-145细胞感染模型,并通过阻断、抑制和杀灭3种作用方式测定各中药组方对PRRSV感染Marc-145细胞的影响,评价10种中药组方体外抗PRRSV天津株的作用效果。结果表明,综合以上3种抗病毒方式的体外抗PRRSV天津株效果,组方3的作用效果最好,组方5、组方7和组方10的作用次之。该研究为防控PRRS天然绿色药物的研发提供前期基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 抗病毒 中药组方 体外试验
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2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化 被引量：52
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作者 张洪亮 张文立 +14 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 相丽润 冷超粮 李真 刘春晓 汤艳东 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期512-516,共5页
为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株n... 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 prrsv NADC30-like prrsv 主要流行毒株 细胞嗜性
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小单元隔离栏舍对PRRSV和PCV2免疫退出防控的效果研究
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作者 张杏艳 陈宝剑 +12 位作者 刘明君 关志惠 秦谦涛 潘星辰 蓝晞 朱文 梁旦 农素群 潘翠玲 杨楷 廖玲玲 谢炳坤 蓝海恩 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第12期5881-5890,共10页
【目的】研究小单元隔离栏舍对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)免疫及免疫退出的防控效果。【方法】试验设置常规封闭式栏舍免疫... 【目的】研究小单元隔离栏舍对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)免疫及免疫退出的防控效果。【方法】试验设置常规封闭式栏舍免疫退出组(conventional closed pigsty immune-exit group,CCP-N)和PCV2免疫组(PCV2 immune group,CCP-PCV2),小单元隔离栏舍免疫退出组(small-cell partition pigsty immune-exit group,SPP-N)、PCV2免疫组(PCV2 immune group,SPP-PCV2)和PRRSV免疫组(PRRSV immune group,SPP-PRRSV),每组10个重复,每个重复1头猪,从断奶至出栏养殖200 d。2种栏舍的免疫退出组不进行任何疫苗免疫,PCV2免疫组和PRRSV免疫组分别于入栏后第20和30天进行1次疫苗免疫。试验第0、60、140、200天检测血液PRRSV N蛋白抗体和PCV2抗体水平,试验第200天检测血液PRRSV GP5蛋白抗体水平和组织PRRSV核酸水平,观察和统计试验猪肺部病变情况。【结果】在试验期内,SPP-N组猪血清PRRSV N蛋白的抗体水平全程处于低水平状态,显著低于其余各组(P<0.05);PRRSV阳性率全程为0,明显低于其余各组。试验结束时SPP-N组猪血清PRRSV GP5蛋白抗体水平极显著低于其余各组(P<0.01);PRRSV N蛋白抗体单阴性率及N蛋白和GP5蛋白抗体双阴性率均为100%,高于其余各组;猪肺脏组织病变得分值最低且极显著低于其余各组(P<0.01);组织PRRSV核酸阴性率及猪血清PRRSV N蛋白抗体、GP5蛋白抗体和组织PRRSV核酸三阴性率为100%,高于其余各组。试验第60天,所有试验组猪血清PCV2抗体水平和阳性率升至峰值并维持至试验结束。【结论】在存在PRRSV和PCV2混合感染的养殖场,小单元隔离栏舍PRRSV和PCV2免疫退出养殖效果显著,可有效阻断PRRSV的感染,明显提升猪肺脏健康度,起到PRRSV长期阴性养殖的效果,是一种良好的施行PRRSV和PCV2免疫退出养殖的支撑设备。 展开更多
关键词 小单元 隔离 猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv) 猪圆环病毒2型(PCV2) 防控 免疫退出
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