7例儿童PRKAG2心脏综合征的临床和遗传学特征分析

1

作者 严子航 王玉珍 +4 位作者 产文秀 陈浩 吴近近 陈轶维 傅立军 《临床儿科杂志》 北大核心 2025年第3期211-215,232,共6页

目的探讨儿童PRKAG2心脏综合征(PCS)患者的临床和遗传学特点。方法回顾性分析1999年9月至2022年10月上海儿童医学中心确诊为PCS患儿的临床资料和基因检测结果。结果共纳入7例PCS患儿,其中男6例,女1例,发病中位年龄9.0(3.0~12.0)岁。其中... 目的探讨儿童PRKAG2心脏综合征(PCS)患者的临床和遗传学特点。方法回顾性分析1999年9月至2022年10月上海儿童医学中心确诊为PCS患儿的临床资料和基因检测结果。结果共纳入7例PCS患儿,其中男6例,女1例,发病中位年龄9.0(3.0~12.0)岁。其中5例患儿出现不同程度心肌肥厚,4例合并心室预激,2例合并房室传导阻滞,1例合并窦性静止。7例患儿中检测到PRKAG2基因的6种不同的错义突变,包含2个新发现的突变(F293V,Q337H)。中位随访时间3.0(2.0~3.8)年,其中1例患儿进展为终末期心衰接受心脏移植、1例因为三度房室传导阻滞安装了永久性心脏起搏器,2例因为左室流出道梗阻分别接受了改良扩大Morrow手术和室间隔射频消融手术。结论PCS是儿童肥厚型心肌病的少见病因,容易发生传导系统病变,对于合并预激综合征或缓慢性心律失常的肥厚型心肌病患儿,需要注意该病的筛查。 展开更多

关键词 prkag2心脏综合征 肥厚型心肌病 预激综合征 心律失常

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中国人群PRKAG2心脏综合征新突变的PRKAG2基因的功能分析

2

作者 何静 秦永文 张必利 《江苏医药》 CAS 2016年第4期382-386,F0003,共6页

目的研究中国人群家族性传导系统异常伴心室预激及心肌肥厚患者新错义突变的PRKAG2基因表达和功能变化。方法利用PCR扩增其功能区外显子片段,双脱氧末段终止测序法来构建表达PRKAG2G100S、PRKAG2R302Q及野生型(WT)PRKAG2基因的慢病毒载... 目的研究中国人群家族性传导系统异常伴心室预激及心肌肥厚患者新错义突变的PRKAG2基因表达和功能变化。方法利用PCR扩增其功能区外显子片段,双脱氧末段终止测序法来构建表达PRKAG2G100S、PRKAG2R302Q及野生型(WT)PRKAG2基因的慢病毒载体,并对其从细胞学水平进行体外实验研究。结果(1)PRKAG2 G100S和PRKAG2 R302Q突变对PRKAG2基因在CCL13细胞中的表达位置没有影响;(2)PRKAG2突变组CCL13/GS和CCL13/RQ与CCL13/WT组相比,PRKAG2蛋白表达量减少,且细胞质及胞核内有较多糖原沉积;(3)PRKAG2基因G100S和R302Q突变降低了CCL13细胞中的AMPK活性,而G100S突变降低AMPK活性的作用弱于R302Q突变(P<0.05或P<0.01)。结论 PRKAG2G100S突变是中国人PRKAG2心脏综合征家系的发病原因,初步证实了突变导致AMPK活性降低及糖原累积是家系的发病机制;G100S突变可能使PRKAG2基因Bateman结构域功能发生变化,但对Bateman结构域功能的影响弱于R302Q突变。 展开更多

关键词 prkag2心脏综合征 prkag2基因 AMP激活蛋白激酶

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PRKAG2基因新突变致心肌肥厚和严重心力衰竭但不合并心律失常的心脏综合征 被引量：4

3

作者 张震 蔡琳 +1 位作者 许金超 李宗哲 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2019年第4期3006-3009,共4页

目的对1个肥厚型心肌病先证者及其四代家系成员进行致病基因筛查研究。方法收集先证者及其家系成员外周血,提取基因组DNA,应用二代测序法对先证者进行致病突变筛查。发现可疑致病位点后,进一步通过Sanger测序法在家系内其他成员及600个... 目的对1个肥厚型心肌病先证者及其四代家系成员进行致病基因筛查研究。方法收集先证者及其家系成员外周血,提取基因组DNA,应用二代测序法对先证者进行致病突变筛查。发现可疑致病位点后,进一步通过Sanger测序法在家系内其他成员及600个健康个体中进行验证。用PolyPhen-2,SIFT及Mutation Taster等生物信息学软件对发现的潜在致病突变进行致病性分析和功能预测。结果先证者及家系内多个成员均携带耐K4G2基因杂合突变,p.Ser98Asn(c.293G〉A)。但600例健康个体中并未发现该突变。生物信息学分析结果显示FRK4Q2基因的P.Ser98Asn(c.293G>A)杂合突变位于进化保守区域,并可能影响蛋白功能,为致病性突变。与携带该基因其他突变致PKKAG2心脏综合征的患者合并多种心律失常不同,携带该PR/C4G2基因突变位点的家系成员有心肌肥厚和心衰等心脏综合征的表现,但不合并心律失常。结论我们首次报道一个新的舲曲02基因致病性错义突变,该突变导致的PRKAG2心脏综合征包括心肌肥厚和严重心力衰竭,但不合并心律失常。 展开更多

关键词 prkag2 肥厚型心肌病 二代测序 靶向测序 基因诊断

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PRKAG2基因G100S新突变对心肌细胞钙稳态和糖原含量的影响 被引量：1

4

作者 陈长源 郑兴 +2 位作者 秦永文 徐荣良 胡建强 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1165-1168,共4页

目的探讨首次在国人WPW综合征(PRKAG2心脏综合征)家系中发现的一个新的错义突变PRKAG2 G100S引起心肌肥厚的可能机制。方法使用Invitrogen的GatewayTM重组系统构建含有人全长PRKAG2基因新突变体(PRKAG2 G100S)的重组腺病毒载体;以增强... 目的探讨首次在国人WPW综合征(PRKAG2心脏综合征)家系中发现的一个新的错义突变PRKAG2 G100S引起心肌肥厚的可能机制。方法使用Invitrogen的GatewayTM重组系统构建含有人全长PRKAG2基因新突变体(PRKAG2 G100S)的重组腺病毒载体;以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,将病毒分别感染H9c2大鼠胚胎心肌细胞和SD乳鼠心肌细胞后采用蛋白质印迹方法检测PRKAG2蛋白的表达。重组腺病毒感染H9c2大鼠胚胎心肌细胞48h前后以Rohd-2/AM孵育并测定细胞内游离Ca2+浓度;感染乳鼠心肌细胞48～72h后以过碘酸-雪夫(PAS)法测定细胞内糖原含量。结果重组腺病毒分别感染H9c2大鼠胚胎心肌细胞和SD乳鼠心肌细胞48h后荧光显微镜下可观察到绿色荧光,用PRKAG2单抗能检测到靶蛋白。与野生型PRKAG2和EGFP组比较,重组腺病毒感染H9c2大鼠胚胎心肌细胞48h后突变体PRKAG2 G100S组细胞内游离Ca2+浓度无明显变化;重组腺病毒感染H9c2大鼠胚胎心肌细胞48h前后的细胞内游离Ca2+浓度无明显变化。在重组腺病毒感染乳鼠心肌细胞48h后,PRKAG2 G100S组能检测到明显的心肌细胞内糖原累积。结论 PKRAG2G100S新突变导致心肌肥厚的主要发病机制可能是细胞内糖原累积,Ca2+及其介导的细胞内信号转导途径可能未参与心肌肥厚的发生。 展开更多

关键词 prkag2综合征 基因 突变 钙 糖原

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心脏过表达人源PRKAG2(G100S)转基因小鼠模型的建立 被引量：1

5

作者 陈挺 刘杰 +3 位作者 肖良 鲍礼智 余云华 郑兴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期273-278,共6页

目的建立心脏过表达人源PRKAG2(G100S)的转基因小鼠模型,为进一步研究该人源基因点突变对小鼠心脏发育、形态和功能维持的作用奠定基础。方法克隆人源基因PRKAG2并构建点突变质粒,将人源PRKAG2(G100S)插入α肌球蛋白重链(α-MHC)启动子... 目的建立心脏过表达人源PRKAG2(G100S)的转基因小鼠模型,为进一步研究该人源基因点突变对小鼠心脏发育、形态和功能维持的作用奠定基础。方法克隆人源基因PRKAG2并构建点突变质粒,将人源PRKAG2(G100S)插入α肌球蛋白重链(α-MHC)启动子下游,构建转基因表达载体。选用C57BL/6J小鼠为遗传背景,通过显微注射法建立人源PRKAG2(G100S)转基因小鼠模型,利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法检测人源PRKAG2(G100S)的表达。结果经过回交繁育后建立了2个品系的心脏特异表达人源PRKAG2(G100S)的转基因小鼠品系F2代,并通过qPCR、蛋白质印迹法检测,确认了转基因小鼠心脏组织中人源PRKAG2(G100S)在mRNA和蛋白水平存在过表达,且该突变能在转基因小鼠中稳定传代。结论本研究成功建立了心脏特异表达人源PRKAG2(G100S)转基因小鼠模型,人源PRKAG2(G100S)基因在心脏组织的过度表达在小鼠心脏发育和功能维持中的作用需要进一步深入研究与探讨。 展开更多

关键词 prkag2 受精卵原核注射 转基因小鼠 心脏病

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PRKAG2基因多态性及其与北京鸭经济性状的关联分析 被引量：1

6

作者 张春雷 周嫄 +4 位作者 房兴堂 侯水生 张桂英 陈宏 陈国宏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期1045-1049,共5页

本研究利用PCR-SSCP及DNA测序技术对334个北京鸭个体已报道的重要能量代谢调控基因——PRKAG2基因进行遗传变异的检测,分析其多态性,并使用SPSS 19.0将北京鸭的经济性状与PRKAG2多态性进行了关联分析。结果表明,在北京鸭PRKAG2基因位点... 本研究利用PCR-SSCP及DNA测序技术对334个北京鸭个体已报道的重要能量代谢调控基因——PRKAG2基因进行遗传变异的检测,分析其多态性,并使用SPSS 19.0将北京鸭的经济性状与PRKAG2多态性进行了关联分析。结果表明,在北京鸭PRKAG2基因位点发现1个SNP(A>G),该位点位于PRKAG2基因3′-非翻译区,有3种基因型:AA、AB、BB,其中AA基因型为优势基因型。与经济性状的相关性分析发现,PRKAG2基因的遗传多态性对北京鸭的18日龄重、胸宽有极显著影响(P<0.01),对龙骨长有显著影响(P<0.05),可作为北京鸭分子育种的辅助标记,也可为改善鸭性能提供参考。 展开更多

关键词 北京鸭 prkag2基因 经济性状 PCR-SSCP 关联分析

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人PRKAG2全长基因的体外拼接及TA克隆载体的构建 被引量：1

7

作者 张必利 郑兴 +2 位作者 徐荣良 吴弘 秦永文 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第8期1465-1468,共4页

目的:应用体外基因拼接及TA克隆技术构建含PRKAG2基因的载体。方法:通过商业途径购得PRKAG2基因的一个转录变体cDNA质粒(GenBank登记号BC068598),其在N端缺失了44个氨基酸,根据已知的PRKAG2基因序列(GenBank登记号NM_016203),设计搭桥... 目的:应用体外基因拼接及TA克隆技术构建含PRKAG2基因的载体。方法:通过商业途径购得PRKAG2基因的一个转录变体cDNA质粒(GenBank登记号BC068598),其在N端缺失了44个氨基酸,根据已知的PRKAG2基因序列(GenBank登记号NM_016203),设计搭桥引物及序列扩增引物,通过PCR搭桥方法,合成完整全序列的PRKAG2基因,并将其克隆到TA载体,将得到的阳性克隆测序鉴定。结果:拼接出全长1759bp的PRKAG2基因,目的基因连接到载体后测序与设计的PRKAG2基因完全一致。结论:成功的构建了全长人PRKAG2基因的TA克隆,为进一步研究PRKAG2基因的功能提供了模板。 展开更多

关键词 prkag2基因 基因拼接 TA克隆载体

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PRKAG2心脏综合征中R302Q突变对心肌细胞糖原和钙离子稳态的影响 被引量：2

8

作者 张亚平 颜彦 +1 位作者 宋振举 童朝阳 《中国临床医学》 2015年第4期479-481,共3页

目的:探讨PRKAG2心脏综合征中R302Q突变对心肌细胞糖原和钙离子稳态的影响。方法:用表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、PRKAG2-WT、PRKAG2-R302Q的腺病毒感染大鼠H9C2心肌细胞,同时设正常对照组。感染2... 目的:探讨PRKAG2心脏综合征中R302Q突变对心肌细胞糖原和钙离子稳态的影响。方法:用表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、PRKAG2-WT、PRKAG2-R302Q的腺病毒感染大鼠H9C2心肌细胞,同时设正常对照组。感染24 h和48 h后,采用过碘酸–雪夫(Periodic acid-Schiff,PAS)染色法进行糖原染色,观察心肌细胞的糖原贮积;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞内糖原含量;同时用Rohd-2/AM活体染料进行钙离子染色,然后采用流式细胞术分析钙离子库信号差异。结果:EGFP组与对照组糖原染色和含量结果无明显差别;PRKAG2-WT组糖原染色和含量略微增强;PRKAG2-R302Q组糖原染色和含量明显增强。各组的钙离子稳态并未受到影响。结论:PRKAG2心脏综合征中R302Q突变导致心肌细胞内糖原贮积,而钙离子稳态并未受到影响,没有钙超载现象发生。 展开更多

关键词 prkag2心脏综合征 R302Q突变 糖原 钙超载

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肉鸭PRKAG2基因表达水平与饲料效率性状的相关性分析 被引量：1

9

作者 金四华 何婷婷 +4 位作者 杨磊 范心凤 李云霞 汪加发 耿照玉 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2018年第4期600-604,共5页

为了探讨PRKAG2基因在不同饲料效率肉鸭中的表达规律及与饲料效率性状的相关性,选取具有系谱记录的1000只H系公鸭,测定21~42日龄体增重和采食量,并计算剩余采食量(RFI)。根据RFI,挑选高低RFI个体各8只,采集胸大肌、腿肌和肝脏,采用q PC... 为了探讨PRKAG2基因在不同饲料效率肉鸭中的表达规律及与饲料效率性状的相关性,选取具有系谱记录的1000只H系公鸭,测定21~42日龄体增重和采食量,并计算剩余采食量(RFI)。根据RFI,挑选高低RFI个体各8只,采集胸大肌、腿肌和肝脏,采用q PCR检测高低RFI组肉鸭PRKAG2表达量。结果表明,PRKAG2基因在低RFI组胸大肌的表达量极显著高于高RFI组(P<0.01),低RFI组腿肌中的表达量显著高于高RFI组(P<0.05)。相关性分析表明,PRKAG2在胸大肌中表达量与日采食量、饲料转化率和RFI呈极显著负相关(P<0.01),与代谢体重呈显著负相关(P<0.05);腿肌PRKAG2表达量与日采食量、饲料转化率和RFI呈显著负相关(P<0.05)。 展开更多

关键词 肉鸭 prkag2 剩余采食量 FCR 相关性分析

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PRKAG2基因R302Q突变致同胞兄弟不同临床表现的研究 被引量：1

10

作者 刘湘玮 王聪 +4 位作者 孙爱军 王鹏 管丽华 程蕾蕾 葛均波 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2013年第2期486-488,共3页

目的本研究报道了均携带R302Q突变却具有完全不同临床表现的同胞兄弟二人病例,分析R302Q突变引起PRKAG2心脏综合征的异质性。方法收集临床资料并进行基因测序检测其突变,结合其他家系和实验研究结果进行分析。结果心脏超声示先证者心肌... 目的本研究报道了均携带R302Q突变却具有完全不同临床表现的同胞兄弟二人病例,分析R302Q突变引起PRKAG2心脏综合征的异质性。方法收集临床资料并进行基因测序检测其突变,结合其他家系和实验研究结果进行分析。结果心脏超声示先证者心肌肥厚,其胞弟心超未见明显异常。先证者心电图呈现比较典型的PRKAG2心脏综合征心电图改变如Ⅱ度房室传导阻滞,而胞弟则有偶尔腿部肌肉酸痛和肌型肌酸激酶同功酶(CK-MM)升高表现。结论本研究中兄弟二人截然不同的临床表现显示,即使在同一家系中,R302Q突变引起PRKAG2心脏综合征也具有显著的异质性。 展开更多

关键词 prkag2基因 R302Q突变 AMPKγ2亚基

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PRKAG2心脏综合征的分子遗传学病因及发病机制研究进展 被引量：1

11

作者 陈长源 郑兴 《国际心血管病杂志》 2009年第3期136-138,147,共4页

PRKAG2心脏综合征是一种少见的常染色体显性遗传性心脏病,主要临床表型包括心室预激、传导系统异常和心肌肥厚。由于编码AMP激活蛋白激酶(AMPK)γ2调节亚基的基因(PRKAG2)突变,导致AMPK活性改变,心肌细胞内糖原储积。因此,PRKAG2心脏综... PRKAG2心脏综合征是一种少见的常染色体显性遗传性心脏病,主要临床表型包括心室预激、传导系统异常和心肌肥厚。由于编码AMP激活蛋白激酶(AMPK)γ2调节亚基的基因(PRKAG2)突变,导致AMPK活性改变,心肌细胞内糖原储积。因此,PRKAG2心脏综合征被认为是一种新的心脏特异的糖原累积综合征。 展开更多

关键词 prkag2心脏综合征 遗传 基因 离子通道

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人PRKAG2(R302Q)突变型SD乳鼠心肌细胞模型的建立及检测

12

作者 陈挺 刘杰 +3 位作者 于云华 鲍礼智 康波 郑兴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期34-39,共6页

目的包装人PRKAG2(R302Q)突变型的腺病毒后感染原代SD乳鼠心肌细胞,构建细胞模型。方法首先通过BP及LR重组获得人PRKAG2(R302Q)突变型的腺病毒表达载体,将其线性化转染293细胞进行腺病毒包装和扩增。收集纯化腺病毒液感染原代SD乳鼠心... 目的包装人PRKAG2(R302Q)突变型的腺病毒后感染原代SD乳鼠心肌细胞,构建细胞模型。方法首先通过BP及LR重组获得人PRKAG2(R302Q)突变型的腺病毒表达载体,将其线性化转染293细胞进行腺病毒包装和扩增。收集纯化腺病毒液感染原代SD乳鼠心肌细胞后进行蛋白质印迹法检测。结果 PRKAG2(R302Q)突变型的腺病毒载体经测序验证插入序列正确,腺病毒感染乳鼠心肌细胞后蛋白质印迹法检测其过表达明显(P<0.05)。结论包装人PRKAG2(R302Q)突变型基因的腺病毒并成功感染SD乳鼠心肌细胞,为进一步研究基因PRKAG2(R302Q)突变体的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 prkag2基因 突变 腺病毒包装 心肌细胞模型

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PRKAG2基因新突变体重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞中的表达

13

作者 陈长源 郑兴 +2 位作者 徐荣良 胡建强 秦永文 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第8期1425-1428,1433,共5页

目的:构建携带人全长PRKAG2基因新突变体(PRKAG2 G100S)及增强型绿色荧光蛋白报告基因(EGFP)的重组腺病毒载体,并将其在乳鼠心肌细胞中表达。方法:利用Invitrogen的GatewayTM技术,通过重叠PCR技术将目的基因突变体PRKAG2G100S-IRES-EGF... 目的:构建携带人全长PRKAG2基因新突变体(PRKAG2 G100S)及增强型绿色荧光蛋白报告基因(EGFP)的重组腺病毒载体,并将其在乳鼠心肌细胞中表达。方法:利用Invitrogen的GatewayTM技术,通过重叠PCR技术将目的基因突变体PRKAG2G100S-IRES-EGFP及野生型PRKAG2-IRES-EGFP定向克隆至入门载体pDONR221上,然后与腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST重组反应,形成包含目的基因及EGFP的腺病毒表达克隆。经筛选阳性表达克隆并测序验证后,PacI酶切、包装、扩增、纯化获得携带EGFP及PRKAG2基因的重组体腺病毒。病毒PCR鉴定并将其感染原代培养的SD乳鼠心肌细胞,用Westernblot技术检测PRKAG2蛋白的表达。结果:成功构建了携带人PRKAG2 G100S及EGFP基因的重组腺病毒,病毒的滴度为8.4×108pfu/ml。荧光显微镜下可见Ad-PRKAG2 G100S重组体腺病毒感染后的乳鼠心肌细胞表达EGFP而发出绿色荧光,PCR证实重组腺病毒载体构建成功,Western blot证明PRKAG2蛋白在乳鼠心肌细胞中过表达。结论:成功构建了携带EGFP基因的Ad-PRKAG2 G100S重组腺病毒载体并将其在乳鼠心肌细胞中正确表达,为今后突变体PRKAG2基因的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 prkag2基因 突变 腺病毒载体 AMPK

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心脏遗传病相关PRKAG2基因定点突变研究

14

作者 张必利 徐荣良 +2 位作者 郑兴 吴弘 秦永文 《中国心血管病研究》 CAS 2009年第5期381-383,共3页

目的利用聚合酶链反应技术介导PRKAG2基因cDNA上第994和995位碱基的体外定点突变。方法以PRKAG2基因为模板，利用PCR技术进行定点突变，设计2对引物，将突变位点设计在引物上，通过PCR扩增引物，扩增片段上含有所需要的突变位点，并将... 目的利用聚合酶链反应技术介导PRKAG2基因cDNA上第994和995位碱基的体外定点突变。方法以PRKAG2基因为模板，利用PCR技术进行定点突变，设计2对引物，将突变位点设计在引物上，通过PCR扩增引物，扩增片段上含有所需要的突变位点，并将其克隆到TA载体，通过序列分析进行确证。结果序列分析提示，994处碱基由A→C，995处碱基由G→A，使PRKAG2基因第302位密码子由精氨酸（Arg）突变为谷氨酰胺（Gin）。结论PCR技术诱导定点突变准确、高效，成功完成了PRKAG2基因的体外定点突变，为进一步研究该突变位点的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 心脏遗传病 prkag2基因 聚合酶链反应 定点突变

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突变型人PRKAG2基因的克隆及其表达载体构建

15

作者 叶忠 张必利 +4 位作者 徐荣良 雷军平 石秀英 陈挺 郑兴 《生物医学工程与临床》 CAS 2012年第4期390-394,共5页

目的构建含有定点突变的人PRKAG2基因表达载体。方法首先应用Trizol法抽提健康人全血mRNA,通过实时聚合酶链反应(RT-PCR)克隆得到野生型人PRKAG2 cDNA;继而通过聚合酶链反应(PCR)定点突变的方法获得突变型人PRKAG2基因,命名为G100S,最... 目的构建含有定点突变的人PRKAG2基因表达载体。方法首先应用Trizol法抽提健康人全血mRNA,通过实时聚合酶链反应(RT-PCR)克隆得到野生型人PRKAG2 cDNA;继而通过聚合酶链反应(PCR)定点突变的方法获得突变型人PRKAG2基因,命名为G100S,最后应用酶切连接的方法得到重组载体pEGFP-G100S。结果Trizol法提取人细胞mRNA,经RT-PCR合成cDNA第一条链,特异性引物PCR扩增得到PRKAG2基因片段,目的片段条带在1 761 bp左右。分段克隆得到的G100S片段分别为300 bp与1 500 bp左右。转化Top10感受态细菌,PCR筛选阳性菌落5个克隆有3个克隆可见1 800 bp左右的阳性片段,筛选得到pEGFP-G100S重组阳性克隆。测序证实重组载体pEGFP-G100S构建成功。结论构建的含定点突变人PRKAG2基因重组载体pEGFP-G100S为进一步研究基因PRKAG2 G100S突变的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 prkag2基因 定点突变 pEGFP—N1载体 人

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突变型人PRKAG2基因的克隆及其真核表达载体构建

16

作者 陈挺 张必利 +2 位作者 何平 程平 郑兴 《海军医学杂志》 2013年第2期92-95,共4页

目的构建含有突变位点R302Q的PRKAG2的真核表达载体。方法首先通过RT-PCR获得人PRKAG2的基因序列,然后采用PCR定点突变获得含有R302Q的PRKAG2基因序列,最后通过酶切连接至真核表达载体pIRES2-EGFP中。结果通过RT-PCR获得的人PRKAG2的编... 目的构建含有突变位点R302Q的PRKAG2的真核表达载体。方法首先通过RT-PCR获得人PRKAG2的基因序列,然后采用PCR定点突变获得含有R302Q的PRKAG2基因序列,最后通过酶切连接至真核表达载体pIRES2-EGFP中。结果通过RT-PCR获得的人PRKAG2的编码区序列1710 bp,经测序比对与NCBI公布的序列完全一致,通过PCR定点突变拼接900 bp和800 bp片段获得了含有R302Q突变位点的PRKAG2,酶切连接至pIRES2-EGFP载体中,经菌落PCR筛选和酶切验证获得阳性克隆pR302Q-IRES2-EGFP,经测序验证与预期完全一致。结论构建含定点突变人PRKAG2基因重组载体pR302Q-IRES-EGFP为进一步研究基因PRKAG2 R302Q突变体的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 prkag2基因 RT—PCR 定点突变 pIRES2-EGFP载体

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PRKAG2心脏综合征发病机制研究进展

17

作者 叶忠 张必利 郑兴 《心血管病学进展》 CAS 2012年第1期42-45,共4页

PRKAG2心脏综合征是一种由于编码单磷酸腺苷激活蛋白激酶γ2亚基的PRKAG2基因遗传性缺陷导致的罕见的常染色体显性遗传病,它的典型表现为:心室预激、进展性传导系统疾病和心脏肥大。虽然PRKAG2心脏综合征的临床表现与肥厚型心肌病、预... PRKAG2心脏综合征是一种由于编码单磷酸腺苷激活蛋白激酶γ2亚基的PRKAG2基因遗传性缺陷导致的罕见的常染色体显性遗传病,它的典型表现为:心室预激、进展性传导系统疾病和心脏肥大。虽然PRKAG2心脏综合征的临床表现与肥厚型心肌病、预激综合征相似,但它们在发病机制上却存在着本质的差别,PRKAG2心脏综合征是一种心脏代谢性疾病。现就近年来对PRKAG2心脏综合征发病机制的研究做一综述。 展开更多

关键词 prkag2心脏综合征 机制

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PRKAG2基因突变与心脏的关系 被引量：1

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作者 胡海鹰 张必利 郑兴 《心血管病学进展》 CAS 2018年第3期339-342,共4页

PRKAG2基因突变与心脏关系密切,可引起类似肥厚型心肌病表现,如心室预激(WPW综合征)、心肌肥厚、心脏传导功能障碍及糖原沉积,被称为PRKAG2心脏综合征。该病为罕见病,属于常染色体显性遗传性疾病,确诊有赖于基因检测。现就近年来PRKAG2... PRKAG2基因突变与心脏关系密切,可引起类似肥厚型心肌病表现,如心室预激(WPW综合征)、心肌肥厚、心脏传导功能障碍及糖原沉积,被称为PRKAG2心脏综合征。该病为罕见病,属于常染色体显性遗传性疾病,确诊有赖于基因检测。现就近年来PRKAG2基因的功能研究现状做一综述。 展开更多

关键词 prkag2 基因 腺苷单磷酸激活蛋白激酶 家族性心肌病

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天葵子上调PRKAG2-AS1对胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响 被引量：6

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作者 孟召莲 王振云 高燕 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2022年第16期4060-4063,共4页

目的研究天葵子生物碱对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其机制。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测不同浓度天葵子生物碱对胶质瘤细胞增殖的影响。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测P... 目的研究天葵子生物碱对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其机制。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测不同浓度天葵子生物碱对胶质瘤细胞增殖的影响。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PRKAG2-AS1表达,Western印迹检测Ki67、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)蛋白表达。转染PRKAG2-AS1小干扰RNA(si-PRKAG2-AS1)至U251细胞,检测下调PRKAG2-AS1表达对天葵子乙醇提取物干预的U251细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果中、高剂量的天葵子生物碱处理后,U251细胞存活率、克隆形成数、Ki67和N-cadherin蛋白表达显著降低,PRKAG2-AS1和E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。下调PRKAG2-AS1表达可降低天葵子生物碱对U251细胞增殖、侵袭、迁移及Ki67、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的影响(P<0.05)。结论天葵子生物碱能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与上调PRKAG2-AS1表达有关。 展开更多

关键词 天葵子 胶质瘤 增殖 迁移和侵袭 prkag2-AS1

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