期刊文献+
共找到11篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
抗菌肽PR39真核表达载体的构建及其在巨噬细胞中的表达和抗菌作用 被引量:6
1
作者 文阳安 郭金英 +5 位作者 余晓林 岑东 陈彦 张键 罗淼 涂植光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第21期2044-2046,共3页
目的构建抗菌肽PR39的真核表达载体,转染后观察PR39在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及抗菌作用。方法采用拼接PCR法合成抗菌肽PR39基因,克隆到真核表达载体pIRES2-GFP中,经鉴定后用阳离子脂质体转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过RT-PCR和... 目的构建抗菌肽PR39的真核表达载体,转染后观察PR39在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及抗菌作用。方法采用拼接PCR法合成抗菌肽PR39基因,克隆到真核表达载体pIRES2-GFP中,经鉴定后用阳离子脂质体转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过RT-PCR和免疫荧光法检测目的基因的表达,并对其抗菌活性进行初步检测。结果成功构建了抗菌肽PR39的真核表达载体pIRES2-GFP/PR39,并能在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达抗菌肽PR39。表达抗菌肽PR39的巨噬细胞杀灭和清除胞内菌的能力明显增强。结论抗菌肽PR39基因能够在小鼠巨噬细胞RAW264.7中表达并发挥抗菌作用。 展开更多
关键词 抗菌肽 pr39 真核表达载体 巨噬细胞 胞内菌
原文传递
靶向巨噬细胞表达抗菌肽PR39基因抗胞内结核分枝杆菌的研究 被引量:3
2
作者 夏乾峰 文阳安 +2 位作者 涂植光 钱士匀 覃西 《海南医学院学报》 CAS 2011年第3期292-295,308,共5页
目的:观察靶向巨噬细胞表达抗菌肽PR39基因的腺病毒在小鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠肺部的表达及抗结核分枝杆菌活性。方法:利用携巨噬细胞启动子和抗菌肽PR39基因的重组腺病毒感染体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠肺部,采用荧光免... 目的:观察靶向巨噬细胞表达抗菌肽PR39基因的腺病毒在小鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠肺部的表达及抗结核分枝杆菌活性。方法:利用携巨噬细胞启动子和抗菌肽PR39基因的重组腺病毒感染体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠肺部,采用荧光免疫技术检测PR39在小鼠肺部表达,并对其抗菌活性进行初步检测。结果:重组腺病毒能够成功感染RAW264.7,并有效表达抗菌肽PR39。与对照相比,感染重组腺病毒的RAW264.7具有更强的杀灭胞内BCG的能力,同时,重组腺病毒能够成功感染小鼠肺部,并表达目的基因。与对照相比,感染重组腺病毒的小鼠肺部的BCG活菌数明显减少。结论:靶向巨噬细胞表达抗菌肽PR39基因在体内外均能够发挥抗胞内BCG作用,为抗菌肽PR39在胞内菌感染基因治疗中的应用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 pr39 腺病毒载体 胞内菌 BCG 巨噬细胞
暂未订购
携抗菌肽PR39基因重组腺病毒的构建及抗胞内伤寒菌研究 被引量:3
3
作者 文阳安 杨细媚 +1 位作者 李朴 涂植光 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期131-134,共4页
目的构建抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体,观察其在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及抗菌活性。方法PCR扩增抗菌肽PR39成熟肽基因,插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,经PmeI线性化后与腺病毒骨架(pAdEasy-1)共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌... 目的构建抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体,观察其在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达及抗菌活性。方法PCR扩增抗菌肽PR39成熟肽基因,插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,经PmeI线性化后与腺病毒骨架(pAdEasy-1)共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒载体(pAd-PR39)。重组腺病毒载体经PacI线性化后转染293细胞,包装出重组腺病毒(Ad-PR39)。利用重组腺病毒感染体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用RT-PCR和免疫细胞化学检测目的基因的表达,并对其抗菌活性进行初步检测。结果先后构建了携抗菌肽PR39基因的穿梭载体和重组病毒载体,包装出重组腺病毒,并成功感染小鼠巨噬细胞RAW264.7。感染重组腺病毒的小鼠巨噬细胞RAW264.7能有效表达抗菌肽PR39。与对照(10.8±2.1CFU/cell)相比,感染重组腺病毒的小鼠巨噬细胞RAW264.7具有更强的杀灭胞内伤寒菌的能力(7.2±1.8CFU/cell)。结论构建的重组腺病毒能够感染小鼠巨噬细胞RAW264.7并发挥抗菌作用,为抗菌肽PR39在胞内菌感染基因治疗中的应用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 pr39 腺病毒载体 胞内菌 巨噬细胞
暂未订购
巨噬细胞特异性启动子/抗菌肽PR39基因腺病毒载体的构建及其表达 被引量:2
4
作者 余雪梅 文阳安 +4 位作者 李朴 孔飞飞 陈光辉 邱欣欣 涂植光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期201-204,209,共5页
旨在构建由巨噬细胞特异性启动子调控的抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体,检测目的基因在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达。PCR扩增巨噬细胞启动子/抗菌肽PR39成熟肽基因序列,插入腺病毒穿梭载体pAdTrack中,重组穿梭质粒(pAdTrack-SP/PR39)... 旨在构建由巨噬细胞特异性启动子调控的抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体,检测目的基因在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达。PCR扩增巨噬细胞启动子/抗菌肽PR39成熟肽基因序列,插入腺病毒穿梭载体pAdTrack中,重组穿梭质粒(pAdTrack-SP/PR39)与腺病毒骨架(pAdEasy-1)共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组产生重组腺病毒载体(pAd-SP/PR39)。pAd-SP/PR39经PacI线性化后转染293细胞,包装出重组腺病毒(Ad-SP/PR39)。Ad-SP/PR39感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,经RT-PCR和免疫细胞化学检测PR39的靶向表达特异性。成功构建了由巨噬细胞特异性启动子调控的抗菌肽PR39基因腺病毒表达载体。包装出的重组腺病毒仍然能感染小鼠巨噬细胞且高效表达抗菌肽PR39。构建的重组腺病毒能够在巨噬细胞中表达抗菌肽PR39基因,为靶向表达抗菌肽在胞内菌感染治疗中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 pr39 腺病毒载体 胞内菌
在线阅读 下载PDF
hTRX-PR39融合基因cDNA克隆的构建及鉴定 被引量:2
5
作者 阮喜云 毕建忠 +3 位作者 刘庆勇 张士宝 杨广笑 王全颍 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第3期30-34,42,共6页
目的研究人硫氧还蛋白(hTRX)和抗菌肽PR39基因在脑缺血疾病治疗中的作用,构建hTRX-PR39cDNA融合基因。方法设计合成PR39、hTRX正向和反向引物,采用PCR方法,扩增获得两端具有BamHI和Ecor721、Eco721和EcoI酶切位点的PR39 cDNA和hTRXcDNA... 目的研究人硫氧还蛋白(hTRX)和抗菌肽PR39基因在脑缺血疾病治疗中的作用,构建hTRX-PR39cDNA融合基因。方法设计合成PR39、hTRX正向和反向引物,采用PCR方法,扩增获得两端具有BamHI和Ecor721、Eco721和EcoI酶切位点的PR39 cDNA和hTRXcDNA片段,并分别克隆到pGEM-Teasy中,转化细菌,筛选阳性克隆,酶切鉴定并测序。BamHI和EcoR721双酶切pGEM-T-hTRX和pGEM-T-PR39,将获取的PR39/BamHI,EcoR721片段克隆到pGEM-T-hTRX/BamHI,EcoR721载体中,构建pGEM-T-hTRX-PR39载体。结果经DNA测序证实,修饰过的hTRXcDNA、PR39 cDNA片段的核酸序列和推导的氨基酸同数据库资料一致。重组质粒pGEM-T-hTRX-PR39酶切图谱证实hTRX-PR39融合肽cDNA已克隆到pGEM-T表达载体中。结论成功克隆出具有EcoR721和EcoRI、BamHI和EcoR721酶切位点的hTRXcDNA和PR39 cDNA片段,并构建pGEM-T-hTRX-PR39载体。 展开更多
关键词 脑缺血 硫氧还蛋白 基因融合 抗菌肽pr39
原文传递
hTRX-PR39重组腺相关病毒载体的构建 被引量:2
6
作者 阮喜云 魏敏 +2 位作者 毕建忠 杨广笑 王全颍 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第7期61-64,共4页
目的探讨hTRX-PR39融合基因在脑缺血疾病中的治疗作用。方法将已经构建好的hTRX-PR39融合基因插入到具有相应酶切位点的pSSCMV病毒载体质粒中,得到重组腺相关病毒载体质粒,酶切电泳鉴定。将已构建的重组腺相关病毒载体质粒、腺病毒辅助... 目的探讨hTRX-PR39融合基因在脑缺血疾病中的治疗作用。方法将已经构建好的hTRX-PR39融合基因插入到具有相应酶切位点的pSSCMV病毒载体质粒中,得到重组腺相关病毒载体质粒,酶切电泳鉴定。将已构建的重组腺相关病毒载体质粒、腺病毒辅助质粒PFG140和包装质粒pAAV/Ad,三质粒磷酸钙共沉淀法转染293细胞系,通过同源重组获得hTRX-PR39重组腺相关病毒载体,收集病毒,斑点杂交(Dot blot)法测定病毒滴度。结果成功构建重组腺相关病毒质粒pSSCMV/hTRX-PR39。包装、回收病毒后,Dot blot法测定重组病毒滴度为3.46×(1012~1013)PFU/mL。结论成功构建pSSCMV/hTRX-PR39重组腺相关病毒载体,并包装较高浓度的重组病毒。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白 抗菌肽pr39 融合基因 重组腺相关病毒
原文传递
猪PR39真核表达载体构建 被引量:1
7
作者 江学斌 陈嘉蔚 +5 位作者 杨军 胡位荣 肖安吉 卢志鹏 楚品品 张玲华 《广东农业科学》 CAS 2016年第3期148-151,共4页
为构建猪源抗菌肽PR39的高效表达真核载体pVAX1-PR39,通过猪股骨骨髓组织基因组RNA合成c DNA,根据PR39基因全长序列,设计高效表达启动子,利用PCR扩增获得PR39全长基因,连接到真核载体pVAX1,构建重组载体pVAX1-PR39。转化大肠杆菌DH5α... 为构建猪源抗菌肽PR39的高效表达真核载体pVAX1-PR39,通过猪股骨骨髓组织基因组RNA合成c DNA,根据PR39基因全长序列,设计高效表达启动子,利用PCR扩增获得PR39全长基因,连接到真核载体pVAX1,构建重组载体pVAX1-PR39。转化大肠杆菌DH5α后进行菌落PCR鉴定和测序,测序结果与NCBI网站上猪源抗菌肽PR39基因序列完全一致,表明已成功构建了猪PR39的真核表达载体,理论上所构建的PR39表达载体能够提高猪的免疫能力。 展开更多
关键词 抗菌肽 pr39 真核表达 载体 PVAX1
在线阅读 下载PDF
5'非翻译区序列改建提高抗菌肽PR39表达 被引量:5
8
作者 明飞平 杨军 +11 位作者 朱进美 邝哲师 李华周 夏枫耿 叶明强 王候光 赵祥杰 黄志丰 蔡海明 施巨清 马苗鹏 张玲华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期86-91,共6页
目的:在毕赤酵母SMD1168中高效表达抗菌肽PR39,并检测其抗菌活性。方法:根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成4条寡核苷酸片段,通过重叠PCR获得PR39核苷酸序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,重组表达质粒pPIC9K-PR39经PCR敲除PR39 5'... 目的:在毕赤酵母SMD1168中高效表达抗菌肽PR39,并检测其抗菌活性。方法:根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成4条寡核苷酸片段,通过重叠PCR获得PR39核苷酸序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,重组表达质粒pPIC9K-PR39经PCR敲除PR39 5'端多余的长度为24bp的核苷酸序列得到pPIC9K-PR39-D,再经PCR、酶切连接构建5'UTR已删除8个核苷酸GGATCCAA的新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E;pPIC9K-PR39-D-E转化到毕赤酵母SMD1168,经PCR鉴定及G418筛选,用0.5%的甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE分析,再利用琼脂糖扩散法测定发酵上清的抗菌活性,表达产物经反相层析及SP-Sepharose层析柱纯化测定其表达量。结果:经Tricine-SDS-PAGE检测,在4.7kDa左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后测定蛋白浓度表达量约为175.6mg/L。获得的抗菌肽PR39对E.coli DH5α,有明显抑菌活性。结论:经改建后新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E在毕赤酵母中可高效表达抗菌肽PR39,为以后深入研究毕赤酵母高效表达抗菌肽奠定了基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 pr39 pPIC9K 5’UTR 分泌表达 抗菌活性
原文传递
Recombinant adeno-associated virus delivered human thioredoxin-PR39 prevents hypoxia-induced apoptosis of ECV304 cells
9
作者 Xiyun Ruan Zhenguo Yuan +2 位作者 Yifeng Du Guangxiao Yang Quanying Wang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2012年第9期708-713,共6页
Human thioredoxin and antibacterial peptide, PR39, have been shown to have potent antioxidant effects that may prolong survival of cells during hypoxia. The pSSCMV/human thioredoxin-PR39 vector was successfully constr... Human thioredoxin and antibacterial peptide, PR39, have been shown to have potent antioxidant effects that may prolong survival of cells during hypoxia. The pSSCMV/human thioredoxin-PR39 vector was successfully constructed in this study and used to infect ECV304 cells. Transfected ECV304 cells were incubated at 1%, 5% hypoxic, and normal oxygen conditions. We found that the number of apoptotic cells after transfection with recombinant adeno-associated virus-human thioredoxin -PR39 was significantly lower than controls, suggesting a protective effect of the recombinant human thioredoxin-PR39 protein on hypoxic cells. 展开更多
关键词 human thioredoxin antimicrobial peptide pr39 fusion gene recombinant adeno-associated virus gene therapy APOPTOSIS HYPOXIA
在线阅读 下载PDF
抗菌肽PR39在大肠杆菌中的表达及抑菌活性检测 被引量:5
10
作者 刘阳欣 李海滨 +5 位作者 姜艳平 崔文 乔薪瑗 葛俊伟 李一经 唐丽杰 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第3期13-16,共4页
根据GenBank上发表的猪抗菌肽PR39基因序列进行引物设计并合成168 bp全基因,与表达载体pCold连接。定向插入到表达载体pCold质粒后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中获得重组菌pCold-PR39/BL21(DE3)。经IPTG诱导并对其表达条件进行优化,通过SDS-... 根据GenBank上发表的猪抗菌肽PR39基因序列进行引物设计并合成168 bp全基因,与表达载体pCold连接。定向插入到表达载体pCold质粒后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中获得重组菌pCold-PR39/BL21(DE3)。经IPTG诱导并对其表达条件进行优化,通过SDS-PAGE和Westernblot分析均表明猪抗菌肽PR39得到了正确表达,获得了约54 ku的重组蛋白;抑菌试验表明,重组PR39抗菌肽对大肠杆菌和鼠伤寒沙门菌有一定的抑菌作用,抑菌圈直径分别为5.7和4.9 mm;对金黄色葡萄球菌没有观察到抑菌作用。该试验结果为PR39的进一步开发与应用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪抗菌肽pr39 原核表达 抑菌活性
原文传递
猪感染PRRSV后Cathelicidins抗菌肽基因的表达情况 被引量:3
11
作者 卢艳敏 《江苏农业科学》 2018年第2期24-27,共4页
猪源抗菌肽主要包括防御素(defensins)和cathelicidins两大家族,cathelicidins是一类在结构上存在很大差异,含有保守cathelin区域的抗菌肽。猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是猪的一种高度传染性疾病,对养猪业造成了巨大的经济损失,PRRSV已成... 猪源抗菌肽主要包括防御素(defensins)和cathelicidins两大家族,cathelicidins是一类在结构上存在很大差异,含有保守cathelin区域的抗菌肽。猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是猪的一种高度传染性疾病,对养猪业造成了巨大的经济损失,PRRSV已成为严重威胁我国养猪业发展的重要传染病之一。主要研究猪感染PRRSV后体内cathelicidins抗菌肽的表达情况,以期为PRRSV新药物的开发提供思路。结果表明,PR39、PG1、PG1-5、PMAP23的表达受到PRRSV的影响,猪在感染PRRSV后,脾脏、肺、肺门淋巴结中的PR39、PG1、PG1-5、PMAP23表达量均上调,其中PRRSV对PR39与PG1-5表达的影响较大。 展开更多
关键词 PRRSV CATHELICIDINS 抗菌肽 pr39 PG1 PG1-5 PMAP23
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部